本文關(guān)鍵詞：CtBP2-c-Myc通路促進(jìn)前列腺癌進(jìn)展的分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 CtBP2 c-Myc Rho ROCK 分子機(jī)制

【摘要】：目的:探討Ct BP2-c-Myc信號通路對前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,并初步揭示其作用機(jī)制。方法:運(yùn)用基因工程手段,截取Ct BP2 m RNA序列對應(yīng)的c DNA序列片段,重組到載體質(zhì)粒上,得到Ct BP2高表達(dá)質(zhì)粒。目的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞并經(jīng)過擴(kuò)增后轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞,利用RT-q PCR及Westernblot技術(shù)對其進(jìn)行驗證。分別運(yùn)用MTT法、Transwell法、Annexin V法檢測Ct BP2高表達(dá)對PC3細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響。利用RT-q PCR技術(shù)檢測Ct BP2高表達(dá)對Rho A、Rho B和Rho C m RNA表達(dá)水平的影響。查詢UCSC數(shù)據(jù)庫,預(yù)測Ct BP2能否轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)Rho C。構(gòu)建包含Ct BP2與Rho C轉(zhuǎn)錄結(jié)合區(qū)域DNA的質(zhì)粒。分別運(yùn)用luciferase和chip技術(shù)探究Ct BP2與Rho C是否存在轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)關(guān)系。通過RT-q PCR技術(shù)驗證Rho C高/低表達(dá)的PC3細(xì)胞,分別檢測對應(yīng)PC3細(xì)胞中的ROCK激酶活性,運(yùn)用Westernblot技術(shù)檢測Rho C高/低表達(dá)的PC3細(xì)胞p-MLC蛋白(ROCK激酶下游底物)表達(dá)水平。應(yīng)用Westernblot技術(shù)檢測Ct BP2高表達(dá)對ROCK1、Rho C、c-Myc及其下游蛋白p-c-Myc、HSPC111表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1.成功構(gòu)建Ct BP2高表達(dá)質(zhì)粒及PC3細(xì)胞系,運(yùn)用RT-q PCR及Westernblot技術(shù)驗證了Ct BP2在PC3細(xì)胞中的高表達(dá)(P0.001);2.通過檢測PC3細(xì)胞的生物學(xué)行為,發(fā)現(xiàn)Ct BP2高表達(dá)促進(jìn)PC3細(xì)胞的侵襲(P0.05),但未明顯影響PC3細(xì)胞的增殖(P0.05)和凋亡(P0.05);3.運(yùn)用RT-q PCR技術(shù)檢測細(xì)胞Rho A、Rho B和Rho C的m RNA表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)Ct BP2高表達(dá)可促進(jìn)Rho A m RNA(P0.05)和Rho C m RNA(P0.001)的表達(dá),但會抑制Rho B m RNA(P0.01)的表達(dá);4.通過查詢UCSC數(shù)據(jù)庫,預(yù)測Ct BP2能夠轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)Rho C。成功構(gòu)建包含Ct BP2與Rho C轉(zhuǎn)錄結(jié)合區(qū)域DNA的質(zhì)粒,分別運(yùn)用luciferase和chip技術(shù)檢測驗證Ct BP2與Rho C存在轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)系;5.RT-q PCR技術(shù)成功驗證Rho C高/低表達(dá)的PC3細(xì)胞系,分別檢測其ROCK激酶活性,發(fā)現(xiàn)Rho C高表達(dá)促進(jìn)ROCK激酶活性(P0.005),Rho C低表達(dá)抑制ROCK激酶活性(P0.005)。Westernblot技術(shù)檢測Rho C高表達(dá)時p-MLC蛋白(ROCK激酶下游底物)表達(dá)水平明顯增高(P0.005),Rho C低表達(dá)時p-MLC蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.001)。Westernblot技術(shù)測得Ct BP2高表達(dá)的細(xì)胞中ROCK1、Rho C、c-Myc及下游蛋白p-c-Myc、HSPC111表達(dá)水平均顯著增高(P0.001)。結(jié)論:Ct BP2的高表達(dá)可促進(jìn)前列腺癌PC3細(xì)胞侵襲。Ct BP2可通過調(diào)節(jié)c-Myc促進(jìn)前列腺癌的進(jìn)展。Ct BP2可成為治療前列腺癌的一個新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 CtBP2 c-Myc Rho ROCK 分子機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語/符號說明9-10
• 前言10-14
• 研究現(xiàn)狀、成果10-12
• 研究目的、方法12-14
• 對象和方法14-45
• 結(jié)果45-60
• 討論60-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明70-71
• 綜述 Rho蛋白家族在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展71-85
• 綜述參考文獻(xiàn)77-85
• 致謝85-87
• 個人簡歷87

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1 李鵬昊;CtBP2-c-Myc通路促進(jìn)前列腺癌進(jìn)展的分子機(jī)制[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：574646