本文關(guān)鍵詞：重組小鼠Parkin共同調(diào)節(jié)基因在昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)中的表達

  更多相關(guān)文章： Parkin共同調(diào)節(jié)基因 桿狀病毒載體 昆蟲細(xì)胞 真核表達 精子發(fā)生

【摘要】：目的:構(gòu)建小鼠Parkin co-regulated gene(Pacrg)/GFP-p Fast Bac1重組桿狀病毒載體,并在Sf9昆蟲細(xì)胞中表達。方法:PCR擴增小鼠全長Pacrg編碼c DNA序列,通過TA克隆、連接等方法將該基因插入到攜帶e GFP的供體質(zhì)粒p Fast Bac1中,獲得重組載體rp FBac-Pacrg-GFP,然后轉(zhuǎn)化到DH10Bac宿主菌中。篩選獲得的重組桿狀病毒載體r Bacmid-Pacrg-e GFP經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至Sf9昆蟲細(xì)胞中,熒光顯微鏡及Western印跡檢測分析重組蛋白。結(jié)果:經(jīng)測序及酶切鑒定顯示構(gòu)建的Pacrg/GFP-p Fast Bac1重組桿狀病毒載體正確,Western印跡結(jié)果顯示PACRG/e GFP融合蛋白在Sf9昆蟲細(xì)胞中表達且攜帶綠色熒光。結(jié)論:成功構(gòu)建了Pacrg/GFP-p Fast Bac1重組桿狀病毒載體,且該重組蛋白在Sf9昆蟲細(xì)胞中大量表達,為進一步研究PACRG蛋白的結(jié)構(gòu)及其在精子發(fā)生中的調(diào)控作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院;武漢市職業(yè)病防治院;Department
【關(guān)鍵詞】： Parkin共同調(diào)節(jié)基因 桿狀病毒載體 昆蟲細(xì)胞 真核表達 精子發(fā)生
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81300536,81571428,81502792) 湖北省衛(wèi)生和計劃生育委員會青年人才項目(WJ2015Q026)~~
【分類號】：R698.2;Q78
【正文快照】：

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本文編號：570543