本文關鍵詞：高鈣離子誘導人腎小管上皮細胞表達MCP-1和HMGB1的體外研究

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【摘要】：目的觀察體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細胞在高鈣離子環(huán)境下細胞損傷及炎性因子MCP-1和HMGB1的表達。方法體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞(HK-2細胞),使用CaCl2配制成不同鈣離子濃度的溶液作為刺激劑,實驗分為①正常對照組(+正常培養(yǎng)液)、②Ca Ⅰ組(5mmol/L Ca2+液)、③Ca Ⅱ組(10mmol/LCa2+液)、④Ca Ⅲ組(15 mmol/L Ca2+液)。各組細胞分別培養(yǎng)至3 h、6 h、9 h時,采用MTT法檢測細胞活力。培養(yǎng)6 h時,采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)進行細胞凋亡染色,觀察各組細胞凋亡情況；同時收集細胞培養(yǎng)上清液,采用ELISA法分別檢測各組細胞上清液過氧化氫(H2O2)和8-IP濃度,微量酶標儀法檢測各組細胞上清液乳酸脫氫酶(LDH)活性。此外,培養(yǎng)6 h時收集各組細胞,采用RT-qPCR法檢測細胞MCP-1和HMGB1的mRNA表達情況；并收集各組細胞上清液,采用ELISA法檢測其MCP-1、HMGB1的含量。結果隨著細胞培養(yǎng)液中鈣離子濃度的增加,細胞活力抑制率和細胞凋亡明顯增加。LDH活性在正常對照組、Ca Ⅰ組、Ca Ⅱ組、Ca Ⅲ組分別為16.67±4.43U/L、51.42±7.70 U/L、69.15±8.54 U/L、85.46±8.60 U/L,各組間差異有統(tǒng)計學顯著性(P0.05)。細胞上清液H2O2的濃度在正常對照組、Ca Ⅰ組、Ca Ⅱ組、Ca Ⅲ組分別為17.30±0.28 mmol/L.19.10±0.33 mmol/L.21.56±0.28 mmol/L.24.30±0.16 mmol/L,各組間差異有統(tǒng)計學顯著性(P0.05)。細胞上清液8-IP的含量在正常對照組、Ca Ⅰ組、Ca Ⅱ組、Ca Ⅲ組分別為21.55±4.31 ng/ml,61.12±4.55 ng/ml, 78.48±2.57 ng/ml,94.74±3.34 ng/ml,各組間差異有統(tǒng)計學顯著性(P0.05).RT-qPCR的結果顯示,與對照組比較,3個鈣離子誘導組細胞MCP-1和HMGBl的mRNA表達水平升高,差異有統(tǒng)計學顯著性(P0.05)。此外,各組細胞上清液MCP-1含量測定值分別為13.48±1.60 pg/mL、22.93±2.86 pg/mL、40.57±1.63 pg/mL、 30.39±1.61 pg/mL,各組間差異有統(tǒng)計學顯著性(P0.05)；細胞上清液HMGB1含量分別為138.17±5.99 pg/mL、181.82±4.54 pg/mL、346.81±20.26 pg/mL、223.15±16.0 pg/mL,各組間差異有統(tǒng)計學顯著性(P0.05)。結論本研究結果提示,高鈣離子可誘導人腎小管上皮細胞出現(xiàn)氧化應激損傷,同時細胞高表達MCP-1和HMGB1。由MCP-1和HMGB1引發(fā)的炎癥反應可能是高鈣尿參與結石形成的重要機制。
【關鍵詞】：高鈣尿 人腎小管上皮細胞 炎癥 MCP-1 HMGB1
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R691.4
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 實驗材料13-16
• 實驗方法16-30
• 結果30-46
• 討論46-51
• 結論51-52
• 參考文獻52-57
• 附錄57-58
• 綜述58-73
• 參考文獻66-73
• 致謝73-74
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文74

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本文編號：567612