發(fā)布時間：2017-07-19 02:11

  本文關(guān)鍵詞：乙二胺四乙酸二酐對草酸脫羧酶的修飾改性

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【摘要】：為提高草酸脫羧酶(Oxdc)在預(yù)防治療泌尿系結(jié)石癥方面的穩(wěn)定性和應(yīng)用性能,采用乙二胺四乙酸二酐(EDTAD)對Oxdc進(jìn)行化學(xué)修飾,并初步優(yōu)化了修飾條件:當(dāng)修飾反應(yīng)時間為8 h、EDTAD/Oxdc的摩爾比為50:1、反應(yīng)p H為7.0、反應(yīng)溫度為37℃時,修飾率為71.91%,酶活回收率為75.42%。聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和超高效液相色譜-質(zhì)譜(UPLC-MS)聯(lián)用分析證明Oxdc和EDTAD共價結(jié)合成功。紫外-可見吸收光譜(UV)和圓二色性光譜(CD)分析結(jié)果表明,修飾后Oxdc的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定程度的改變。同時,部分酶學(xué)性質(zhì)研究表明,經(jīng)EDTAD修飾后的Oxdc較游離的Oxdc,最適p H向堿性方向偏移了約1.5個單位,耐熱性和耐胰蛋白酶酶解的能力均顯著增強。此外,修飾后的Oxdc在草酸鈣上的吸附量明顯提高。結(jié)果說明修飾后的Oxdc的穩(wěn)定性顯著增強,應(yīng)用性能有所改善。
【作者單位】： 廣西民族大學(xué)海洋與生物技術(shù)學(xué)院廣西高校微生物與植物資源利用重點實驗室;廣西民族大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院化學(xué)與生物轉(zhuǎn)化過程新技術(shù)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 泌尿系結(jié)石 酶 草酸脫羧酶 純化 乙二胺四乙酸二酐 化學(xué)修飾 吸附
【基金】：國家教育部留學(xué)回國人員科研啟動基金項目(教外司留[2012]1707號) 廣西自然科學(xué)基金項目(2014GXNSFAA118045) 廣西民族大學(xué)研究生教育創(chuàng)新計劃項目(gxun-chxs2015089)~~
【分類號】：R691.4
【正文快照】： 引言泌尿系結(jié)石中70%~80%的結(jié)石為草酸鈣結(jié)石[1-2]。目前,雖然可以通過體外沖擊波碎石術(shù)、經(jīng)皮腎鏡取石術(shù)、輸尿管鏡碎石術(shù)、化學(xué)藥物治療等物理和化學(xué)方法對其進(jìn)行治療[3],并取得了一定的療效;然而,物理、化學(xué)方法的治療費用昂貴、對人體副作用較大,且草酸鈣結(jié)石具有較高的復(fù)，

本文編號：560767