本文關(guān)鍵詞：MiR-101調(diào)控前列腺癌細(xì)胞CRMP4的表達(dá)及其機(jī)制的初步研究

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【摘要】：目的:探討mi R-101、EZH2及CRMP4在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性;分析前列腺癌中mi R-101是否通過EZH2調(diào)控CRMP4基因啟動子組蛋白修飾以調(diào)控CRMP4基因的表達(dá),以進(jìn)一步闡明CRMP4的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制。方法:使用Lipofectamine 2000分別將pre-mi RNA-101、陰性對照pre-mi RNA negative control,si RNA EZH2,陰性對照si RNA negative control、陽性對照si RNA MAPK-1轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞中。應(yīng)用熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞熒光亮度及比例。運(yùn)用real-time RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率,以及CRMP4、EZH2 m RNA表達(dá)量。使用可抑制EZH2表達(dá)及其組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性的3-Deazaneplanocin A(DZNEP)處理PC3細(xì)胞作為對照;運(yùn)用Western Blot檢測EZH2、C RMP4及H3K27me3、u H2AK119、H3AC在轉(zhuǎn)染及DZNEP處理前后表達(dá)的改變。結(jié)果:轉(zhuǎn)染6h后,除空白對照組外,各組細(xì)胞熒光明亮,約有85%細(xì)胞具有熒光。轉(zhuǎn)染48h后real-time RT—PCR顯示,pre-mi RNA-101組:mi R-101、CRMP4m RNA表達(dá)顯著上調(diào),EZH2 m RNA表達(dá)顯著下調(diào)。pre-mi RNA-101組及si RNA EZH2組;CRMP4 m RNA表達(dá)顯著上調(diào),EZH2 m RNA表達(dá)顯著下調(diào);轉(zhuǎn)染72h后,pre-mi RNA-101組、si RNA EZH2組、DZNep處理組:CRMP4、H3AC蛋白表達(dá)顯著上調(diào),EZH2蛋白、組蛋白H3K27me3、u H2AK119蛋白表達(dá)顯著下調(diào)、陰性對照組中的各蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:miR-101可能通過下調(diào)EZH2的表達(dá),進(jìn)而下調(diào)與CRMP4基因轉(zhuǎn)錄相關(guān)的組蛋白H3K27me3、u H2AK119,上調(diào)組蛋白H3Ac,繼而上調(diào)CRMP4表達(dá),從而抑制前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：mi RNA PC3細(xì)胞 RT-PCR western blot
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第1章 前言7-10
• 第2章 實驗材料與方法10-23
• 2.1 材料10-12
• 2.1.1 主要試劑10-11
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備11-12
• 2.1.3 前列腺癌細(xì)胞系來源12
• 2.2 實驗方法及步驟12-22
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)12-14
• 2.2.2 轉(zhuǎn)染試劑來源14
• 2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染14-15
• 2.2.4 轉(zhuǎn)染 48H后，REAL-TIME RT-PCR檢測MIR-101、CRMP4、EZH、MAPK-1 MRNA的表達(dá)量變化15-19
• 2.2.5 DZN EP藥物干擾19
• 2.2.6 轉(zhuǎn)染及DZNEP處理 72H后，，WESTERN-BLOT檢測CRMP4、EZH2、H3K27ME3、H3AC、UH2AK119蛋白表達(dá)19-22
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析22-23
• 第3章 結(jié)果23-28
• 3.1 轉(zhuǎn)染 6H后，熒光顯微鏡下觀察PC3細(xì)胞陰性對照組轉(zhuǎn)染效率23
• 3.2 轉(zhuǎn)染 48H后，REAL- TIME RT-PCR檢測MIR-101、CRMP4、EZH2、MAPK-1 MRNA的表達(dá)量變化23-26
• 3.3 轉(zhuǎn)染及DZN EP處理 72H后，WESTERN-BLO T檢測CRMP4、EZH2、H3K27ME3、H3AC、UH2AK119蛋白表達(dá)26-28
• 第4章 討論28-32
• 第5章 結(jié)論32-33
• 致謝33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述38-48
• 參考文獻(xiàn)44-48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：557713