本文關(guān)鍵詞：云南白族人群特發(fā)性低枸櫞酸尿癥與VDR基因SNP的關(guān)聯(lián)研究及VDR和NaDC1在HK-2細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：[目的]探討云南白族人群特發(fā)性低枸櫞酸尿癥與維生素D受體(vitamin D receptor, VDR)基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism SNP)位點(diǎn)rs7975232、rs2228570、rs731236及rs1544410的關(guān)系及維生素D受體(vitamin D receptor, VDR)和二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(sodium-dicarboxylate cotransporter protein 1, NaDCl)在人腎近曲小管上皮細(xì)胞(human kidney-2 cell, HK-2細(xì)胞)中的表達(dá)。[方法]在2013年10月至2015年12月期間篩選云南白族泌尿系結(jié)石患者500例及云南白族正常健康體檢者200例留取空腹靜脈血及尿液標(biāo)本,依據(jù)尿枸櫞酸含量篩選出云南白族200例特發(fā)性低枸櫞酸尿癥患者和120例尿枸櫞酸水平正常者為對照組,通過桑格測序技術(shù)檢測VDR基因SNP位點(diǎn)rs7975232、 rs2228570、rs731236及rs1544410,并分析其與云南白族特發(fā)性低枸櫞酸尿癥之間的相關(guān)性。另外按照HK-2細(xì)胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)細(xì)胞,采用流式細(xì)胞學(xué)檢測所培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞的細(xì)胞凋亡情況,免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測VDR和NaDCl在HK-2細(xì)胞中的表達(dá)情況。[結(jié)果]200例云南白族特發(fā)性低枸櫞酸尿癥患者的尿枸櫞酸含量平均值為(239.58±38.66)mg/24h與120例云南白族尿枸櫞酸值正常者的尿枸櫞酸含量平均值為(593.65±130.33)mg/24h的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在VDR基因SNP位點(diǎn)的基因型哈迪溫伯格平衡檢測中,四個(gè)位點(diǎn)的基因型實(shí)際頻數(shù)與預(yù)計(jì)頻數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。云南白族特發(fā)性低枸櫞酸尿癥患者組與對照組之間,VDR基因SNP位點(diǎn)rs7975232及rs2228570各基因型頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且rs7975232的基因型AA和rs2228570的基因型TT較對照組多見。在兩組受檢者的24h尿枸櫞酸含量中,rs7975232的基因型從和rs2228570的基因型TT者分別為(365.71±195.23)、(363.92±185.43)mg/24h,明顯低于rs7975232的基因型CC、CA和rs2228570的基因型CC、CT者[(507.67±197.42)、(485.55±180.15)、(506.47±198.02)、(485.95±190.95)mg/24h,P0.05],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。細(xì)胞培養(yǎng)：觀察并拍照記錄細(xì)胞生長狀態(tài)；流式細(xì)胞學(xué)：1號～4號流式管HK-2細(xì)胞的凋亡率分別為6.87%,6.80%,8.31%,4.274%；免疫細(xì)胞化學(xué)：NaDCl在HK-2細(xì)胞中表達(dá),胞膜染色。NaDCl的陰性對照,胞膜未染色。NaDCl的陽性對照,在人胚腎293細(xì)胞(human embryonic kidney 293 cells, HEK293 cells)胞膜表達(dá),胞膜染色。VDR在HK-2細(xì)胞中表達(dá),核膜染色。VDR的陰性對照,核膜未染色。VDR的陽性對照,在人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549核膜表達(dá),核膜染色。[結(jié)論]云南白族特發(fā)性低枸櫞酸尿癥與VDR基因SNP位點(diǎn)rs7975232及rs2228570間存在相關(guān)性,VDR基因位點(diǎn)rs7975232的基因型AA和rs2228570的基因型TT有望成為云南白族特發(fā)性低枸櫞酸尿癥的遺傳標(biāo)志基因。所培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率比較低,說明細(xì)胞狀態(tài)較好。VDR和NaDCl分別在HK-2細(xì)胞的核膜和胞膜表達(dá)。VDR和NaDCl都與低枸櫞酸尿癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān),推測VDR可能參與調(diào)控NaDCl活性或表達(dá),本實(shí)驗(yàn)為下一步干擾VDR表達(dá)后檢測NaDCl表達(dá)情況及低枸櫞酸尿癥的病因?qū)W和分子生物學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：維生素D受體 單核苷酸多態(tài)性 特發(fā)性低枸櫞酸尿癥 二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1 人腎近曲小管上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R691.4
【目錄】：

• 縮略詞表(以字母順序排列)5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分11-32
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 第二部分32-40
• 前言32
• 材料與方法32-34
• 結(jié)果34-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 綜述40-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果48-49
• 致謝49-50

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1 李康健;云南白族人群特發(fā)性低枸櫞酸尿癥與VDR基因SNP的關(guān)聯(lián)研究及VDR和NaDC1在HK-2細(xì)胞中的表達(dá)[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：538124