發(fā)布時(shí)間：2017-07-05 20:08

  本文關(guān)鍵詞：血管緊張素Ⅱ1型受體抑制劑纈沙坦對(duì)膀胱癌生物學(xué)行為的影響及機(jī)制的初步探討

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【摘要】：目的：研究血管緊張素Ⅱ1型受體拮抗劑纈沙坦對(duì)不同侵襲能力的膀胱癌細(xì)胞株的細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的關(guān)系,探討纈沙坦對(duì)不同侵襲能力的膀胱癌細(xì)胞株的血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)抗原、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的表達(dá)的影響。為尋找膀胱癌新的治療方法提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和靶點(diǎn)。方法：對(duì)三株不同侵襲能力的細(xì)胞株EJ-M3,EJ,BIU-87進(jìn)行培養(yǎng),使用纈沙坦作用于細(xì)胞株,采用細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)測(cè)定法(噻唑藍(lán)比色試驗(yàn)法,MTT)檢測(cè)細(xì)胞增殖狀況,采用Transwell體外細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)三種膀胱癌細(xì)胞株的侵襲能力和遷移能力的改變。蛋白免疫印跡法(westernb lot)法測(cè)定AT1R,MMP2和MMP9蛋白表達(dá)水平,實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)AT1R,MMP2和MMP9基因的相對(duì)表達(dá)。結(jié)果：使用10-2mol/L,10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L 10-8mol/L,10-9mol/L纈沙坦處理過(guò)的細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定出的生長(zhǎng)曲線選擇濃度為10-3mo1/L纈沙坦作為最終濃度藥物濃度用于細(xì)胞進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：劃痕處理24h后,EJ-M3對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移距離分別為(2.28±0.07)和(1.57±0.12)。EJ對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移距離分別為(1.66±0.13)和(1.07±0.04)。BIU-87對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移距離分別為(1.24±0.09)和(0.81±0.11)。Transwell細(xì)胞小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力結(jié)果顯示：光學(xué)顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)膜背面實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組侵入細(xì)胞數(shù)量明顯減少,EJ-M3實(shí)驗(yàn)組(154.28±6.24)較對(duì)照組(233.39±8.18)相比明顯減少,EJ實(shí)驗(yàn)組(107.88±6.38)較對(duì)照組(150.05±4.73)相比明顯減少,BIU-87實(shí)驗(yàn)組(50.81±3.41)較對(duì)照組(87.19±5.56)相比明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Western blot電泳結(jié)果顯示,AT1R、MMP2、MMP9在三個(gè)細(xì)胞株中均有表達(dá),AT1R電泳條帶相對(duì)光密度值EJ-M3對(duì)照組(3.4871±0.3264)實(shí)驗(yàn)組(0.6991±0.1264),EJ對(duì)照組(1.5198±0.1123)實(shí)驗(yàn)組(0.9198±0.1223),BIU-87對(duì)照組(2.2152±0.0112)實(shí)驗(yàn)組(0.5288±0.1214)。MMP2電泳條帶相對(duì)光密度值EJ-M3對(duì)照組(3.0571±0.2384)實(shí)驗(yàn)組(1.4771±0.1174),EJ對(duì)照組(1.4079±0.1028)實(shí)驗(yàn)組(0.4579±0.1021),BIU-87對(duì)照組(2.9102±0.1302)實(shí)驗(yàn)組(0.5429±0.1384)。MMP9電泳條帶相對(duì)光密度值EJ-M3對(duì)照組(0.9885±0.1894)實(shí)驗(yàn)組(0.5311±0.1079),EJ對(duì)照組(0.7326±0.0121)實(shí)驗(yàn)組(0.2178±0.0203),BIU-87對(duì)照組(0.5112±0.0172)實(shí)驗(yàn)組(0.2078±0.0229)；三組細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組表達(dá)均下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01).AT1RmRNA的相對(duì)表達(dá)：EJ-M3實(shí)驗(yàn)組(3.39±0.14)與對(duì)照組(8.32±0.31)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；EJ實(shí)驗(yàn)組(3.31±0.19)與對(duì)照組(6.28±0.61)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；BIU-87實(shí)驗(yàn)組(2.59±0.24)與對(duì)照組(5.52±0.22)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；MMP2 mRNA的相對(duì)表達(dá)：EJ-M3實(shí)驗(yàn)組(4.91±0.23)與對(duì)照組(8.77±0.58)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；EJ實(shí)驗(yàn)組(3.86±0.13)與對(duì)照組(6.31±0.43)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；BIU-87實(shí)驗(yàn)組(0.85±0.05)與對(duì)照組(2.37±0.02)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；MMP9 mRNA的相對(duì)表達(dá)：EJ-M3實(shí)驗(yàn)組(1.18±0.11)與對(duì)照組(3.61±0.03)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；EJ實(shí)驗(yàn)組(0.944±0.02)與對(duì)照組(2.98±0.07)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；BIU-87實(shí)驗(yàn)組(0.85±0.02)與對(duì)照組(2.59±0.24)比較mRNA表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；結(jié)論：AngⅡ1型受體抑制劑纈沙坦可有效抑制三株細(xì)胞株的增殖、遷移、侵襲能力。通過(guò)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP2和MMP9蛋白和基因的表達(dá)下降.考慮三株膀胱腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)改變與AT1R、MMP2和MMP9的表達(dá)有關(guān),AngⅡ抑制劑有可能成為一種新的抑制膀胱癌轉(zhuǎn)移和延長(zhǎng)膀胱癌患者生存期的藥物。
【關(guān)鍵詞】：膀胱腫瘤 血管緊張素Ⅱ1型受體 基質(zhì)金屬蛋白酶2/9 纈沙坦
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 技術(shù)路線圖14-15
• 第一部分 纈沙坦對(duì)三株膀胱癌細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響15-29
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-21
• 3 結(jié)果21-26
• 4 討論26-28
• 5 結(jié)論28-29
• 第二部分 纈沙坦對(duì)三株膀胱癌細(xì)胞AT1R,MMP_2和MMP_9表達(dá)的影響29-44
• 1 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 2 實(shí)驗(yàn)方法30-38
• 3 結(jié)果38-42
• 4 討論42-43
• 5 結(jié)論43-44
• 總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 文獻(xiàn)綜述49-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章56
• 攻讀學(xué)位期間申請(qǐng)課題56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 歐靖華;楊永秀;劉梅毅;;血管緊張素抑制劑對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞的AT1R,MMP2和MMP9表達(dá)的影響[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2011年05期

2 李國(guó)灝;李運(yùn)柱;李文洲;陳琳;胡衛(wèi)鋒;;AT1R拮抗劑對(duì)膀胱癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究[J];臨床泌尿外科雜志;2011年03期

3 唐寧;金潔;鄧云;柯榮湖;沈秋瑾;樊少華;覃文新;;人源性長(zhǎng)壽保障基因2通過(guò)與V-ATPase作用抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[J];生理學(xué)報(bào);2010年03期

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本文編號(hào)：523410