本文關(guān)鍵詞：補體B因子在常染色體顯性多囊腎病發(fā)病中的作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： ADPKD STAT1 CFB 巨噬細胞

【摘要】：研究目的:研究在常染色體顯性多囊腎病中,補體B因子的表達及可能的調(diào)控機制,并在體外條件下探討補體B因子在巨噬細胞分化中的作用。方法:1.收集ADPKD患者腎臟組織以及Han:SPRD大鼠腎臟組織,蛋白免疫印跡法和免疫組織化學法檢測PC1-CTT、CFB的表達以及JAK2/STAT1通路蛋白的活化情況。2.在UCL93細胞中轉(zhuǎn)染STAT1質(zhì)�；蚪o予STAT1特異性抑制劑Fludarabine后,蛋白免疫印跡法檢測p-STAT1的活化情況以及CFB的表達情況。3.在UCL93細胞中共轉(zhuǎn)染空載體和CFB啟動子質(zhì)粒以及海腎熒光素酶質(zhì)粒作為對照組,共轉(zhuǎn)染STAT1質(zhì)粒和CFB啟動子質(zhì)粒以及海腎熒光素酶質(zhì)粒作為實驗組,雙熒光素酶報告基因體系檢測STAT1對CFB啟動子的作用。4.在293T細胞中采用染色質(zhì)免疫共沉淀的方法檢測轉(zhuǎn)錄因子STAT1是否與CFB啟動序列直接結(jié)合。5.在UCL93細胞中轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒后給予STAT1抑制劑,蛋白免疫印跡法檢測p-STAT1的活化情況以及CFB的表達情況。6.在UCL93細胞中共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+CFB-Pr+海腎熒光素酶質(zhì)粒,共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+STAT1結(jié)合位點突變的CFB啟動子質(zhì)粒+海腎熒光素酶質(zhì)粒,雙熒光素酶報告基因體系檢測CFB啟動子活性。7.在UCL93細胞中共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+空載體+CFB-Pr+Renilla,共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+DN-STAT1+CFB-Pr+Renilla,雙熒光素酶報告基因體系檢測PC1-CTT對CFB啟動子活性的作用。8.在UCL93細胞中轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒后給予NF-κB抑制劑,蛋白免疫印跡檢測CFB和NF-κB通路蛋白的表達,雙熒光素酶報告基因體系檢測CFB啟動子活性。9.給予RAW264.7細胞人純化的補體B因子刺激和PC1-CTT-CM刺激,免疫印跡和RT-PCR法檢測RAW264.7細胞的分化情況。10.PC1-CTT-CM中阻斷補體B因子后培養(yǎng)RAW264.7細胞,免疫印跡法檢測RAW264.7細胞的分化情況。11.UCL93細胞給予STAT1抑制劑處理后,收集條件培養(yǎng)液培養(yǎng)RAW264.7細胞,免疫印跡法檢測RAW264.7細胞的分化情況。12.在UCL93細胞中轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒后給予STAT1抑制劑,收集條件培養(yǎng)液培養(yǎng)RAW264.7細胞,免疫印跡法檢測RAW264.7細胞的分化情況。結(jié)果:1.與對照組相比,ADPKD患者和Cy/+Han:SPRD大鼠腎臟組織中CFB和PC1-CTT表達明顯增高,JAK2/STAT1通路明顯活化。2.PC1-CTT可通過JAK2-STAT1通路調(diào)控CFB的轉(zhuǎn)錄和表達。3.PC1-CTT-CM刺激RAW264.7細胞向M2型分化,該過程需STAT1和CFB參與。結(jié)論:常染色體顯性多囊腎病中,PC1-CTT通過JAK2-STAT1通路上調(diào)CFB表達;PCT-CTT-CM誘導巨噬細胞向M2型分化,該過程需STAT1和CFB參與。CFB可能成為治療和延緩ADPKD進展的一個新靶點。
【關(guān)鍵詞】：ADPKD STAT1 CFB 巨噬細胞
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-13
• 前言13-15
• 第一部分 補體B因子在常染色體顯性多囊腎病中的調(diào)控機制15-49
• 前言15-17
• 實驗設(shè)計17-21
• 材料與方法21-33
• 結(jié)果33-48
• 討論48-49
• 第二部分 PC1-CTT通過JAK2-STAT1-CFB通路對巨噬細胞分化的作用研究49-65
• 前言49-51
• 實驗設(shè)計51-53
• 材料與方法53-57
• 結(jié)果57-63
• 討論63-65
• 全文總結(jié)65-66
• 參考文獻66-70
• 綜述70-78
• 參考文獻73-78
• 在讀期間完成和發(fā)表的文章78-79
• 致謝79

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 丁云紅，呂雁群，洪迎華，徐德安，張建榮，張永生;蛋白免疫印跡法分析纖維連接蛋白分子降解狀態(tài)[J];中華醫(yī)學檢驗雜志;1995年03期

2 熊仁平,周元國;蛋白免疫印跡法在G蛋白檢測中的應用[J];第三軍醫(yī)大學學報;1998年02期

3 胡秀杰,包小兵,宋艷文;蛋白免疫印跡法試驗結(jié)果與HIV感染關(guān)系的探討[J];職業(yè)與健康;2005年08期

4 劉澤軍;魏明競;;簡要快訊[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;1991年01期

5 楊曉虹;許海生;;蛋白免疫印跡法(WB)試驗結(jié)果與HIV感染關(guān)系的分析[J];中國實用醫(yī)藥;2010年13期

6 湯琰;鐘平;朱林英;;一例HIV抗體蛋白免疫印跡法檢測條帶不全病例的分析[J];中國艾滋病性病;2014年07期

7 吳紀霞;董玉金;王興丹;陳雪松;曹麗麗;韓琴芳;周新文;;人肺癌組織中鳥苷酸解離抑制因子-2的表達和意義[J];腫瘤防治研究;2009年12期

8 鄭敏;何云燕;羅建明;;急性白血病患兒維生素D受體表達研究[J];中國實用兒科雜志;2013年06期

9 ;[J];;年期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳美含;補體B因子在常染色體顯性多囊腎病發(fā)病中的作用及機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2016年

2 田恩培;LYG1在炎癥反應中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：521968