本文關(guān)鍵詞：冷凍消融治療前列腺癌后誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景冷凍消融作為中晚期前列腺癌的治療手段之一,在控制局部病灶方面取得顯著療效,在臨床中得以廣泛應(yīng)用。我們?cè)谇捌谂R床工作中發(fā)現(xiàn)冷凍消融治療后部分前列腺癌患者遠(yuǎn)處肺轉(zhuǎn)移灶自行消退,后續(xù)深入研究發(fā)現(xiàn)冷凍免疫可能參與這一過程。旁觀者效應(yīng)(bystander effect),最初源于基因治療領(lǐng)域,即處理細(xì)胞的同時(shí)未處理細(xì)胞發(fā)生損傷,即損傷擴(kuò)大效應(yīng)�；蛑委�、放射治療及抗腫瘤藥物等均被報(bào)道出現(xiàn)旁觀者效應(yīng)。近年來,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中基因治療和放射治療導(dǎo)致的旁觀者效應(yīng)已被廣泛報(bào)道,其可能機(jī)制如下:局部治療可促使機(jī)體發(fā)生免疫炎癥反應(yīng),通過氧化應(yīng)激、ROS、NO合成及炎癥相關(guān)信號(hào)通路等導(dǎo)致非治療細(xì)胞發(fā)生損傷,也可通過胞內(nèi)細(xì)胞釋放危險(xiǎn)信號(hào)可誘發(fā)機(jī)體識(shí)別腫瘤的能力,從而影響機(jī)體免疫微環(huán)境,進(jìn)而激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng),實(shí)現(xiàn)對(duì)非治療區(qū)域的腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)。據(jù)此,本研究旨在通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證冷凍消融是否可誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng),探討免疫炎癥機(jī)制是否參與旁觀者效應(yīng),以期為冷凍消融治療惡性腫瘤提供新的增效方法,也為進(jìn)一步提高腫瘤治療效果提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的構(gòu)建雙側(cè)小鼠前列腺癌移植瘤模型,然后對(duì)單側(cè)移植瘤行實(shí)驗(yàn)治療,觀察小鼠生存期、肺轉(zhuǎn)移及對(duì)側(cè)移植瘤的生長(zhǎng)變化,從動(dòng)物模型中驗(yàn)證冷凍消融是否誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng),并動(dòng)態(tài)觀察該過程中免疫細(xì)胞及炎癥信號(hào)(Hsp70)的變化,初步闡釋冷凍消融后誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng)的相關(guān)機(jī)制。材料與方法1.構(gòu)建小鼠雙側(cè)RM-1前列腺癌移植瘤模型,隨機(jī)分為三組:對(duì)照組(A組)、手術(shù)組(B組)和冷凍消融組(C組),分別對(duì)右側(cè)移植瘤予以假手術(shù)、手術(shù)切除和冷凍治療處理,對(duì)側(cè)(左側(cè))移植瘤不予處理。觀察對(duì)側(cè)(左側(cè))移植瘤生長(zhǎng)變化,記錄各組小鼠生存期。2.分別于術(shù)后7天、14天處死小鼠,留取外周血、脾臟、肺組織、腫瘤組織標(biāo)本。HE染色觀察肺轉(zhuǎn)移情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的數(shù)量及比例,并分析Th1/Th2比例變化。ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清中Hsp70的含量變化,免疫組化染色觀察對(duì)側(cè)腫瘤組織增殖指標(biāo)Ki67的變化。蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)對(duì)側(cè)腫瘤組織細(xì)胞內(nèi)Hsp70表達(dá)情況。結(jié)果1.與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在7天、14天對(duì)側(cè)腫瘤直徑顯著減小(P0.05,P0.05)。B組(手術(shù)組)與A組(對(duì)照組)對(duì)側(cè)腫瘤直徑在術(shù)后7天未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),術(shù)后14天A組對(duì)側(cè)腫瘤直徑大于B組(P0.05)。2.與A組(對(duì)照組)、B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)小鼠總體生存期(OS)明顯延長(zhǎng)(P0.001,P0.001);A組(對(duì)照組)與B組(手術(shù)組)總生存期未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.342)。3.三個(gè)治療組小鼠肺轉(zhuǎn)移率隨時(shí)間推移呈逐漸升高趨勢(shì)。治療后7天三組肺轉(zhuǎn)移率未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.562);治療后14天,C組(冷凍組)轉(zhuǎn)移率顯著低于A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.隨著時(shí)間推移,C組(冷凍組)CD4+T細(xì)胞比例呈上升趨勢(shì),A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)中呈下降趨勢(shì);與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在治療后7天、14天CD4+T細(xì)胞比例顯著增加(P0.05、P0.05)。5.隨時(shí)間推移,C組(冷凍組)、B組(手術(shù)組)中CD8+T細(xì)胞比例呈上升趨勢(shì),在A組(對(duì)照組)中呈下降趨勢(shì);與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在7天、14天CD8+T細(xì)胞比例顯著增加(P0.05、P0.05)。6.隨時(shí)間推移,三組NK細(xì)胞比例均呈先下降后上升趨勢(shì);與B組(手術(shù)組)相比,A組(對(duì)照組)、C組(冷凍組)在7天NK細(xì)胞比例略有增加(P=0.002、P0.001);在14天與A組(對(duì)照組)、B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)NK細(xì)胞比例顯著增加(P=0.003、P=0.001)。7.隨時(shí)間推移,C組(冷凍組)Th1/Th2比值呈上升趨勢(shì),A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)中呈下降趨勢(shì);與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在7天、14天Th1/Th2比值均顯著增加(P0.05、P0.05)。8.隨時(shí)間推移,C組(冷凍組)CTL細(xì)胞殺傷活性呈上升趨勢(shì),A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)中呈下降趨勢(shì);與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在7天、14天CTL細(xì)胞殺傷活性均顯著增加(P0.001、P0.001)。9.隨時(shí)間推移,C組(冷凍組)對(duì)側(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性(Ki67)呈先下降后上升趨勢(shì),A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)呈先上升后下降趨勢(shì);與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在7天、14天對(duì)側(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性(Ki67)顯著下降(P0.05、P0.05),其他兩組間相比無明顯變化(P0.05)。10.隨時(shí)間推移,三組小鼠血清Hsp70含量均呈先上升后下降趨勢(shì);與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在7天、14天小鼠血清Hsp70含量顯著增加(P0.01、P0.01);其他兩組組間比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。11.隨時(shí)間推移,C組(冷凍組)腫瘤細(xì)胞內(nèi)中Hsp70表達(dá)量均呈有下降趨勢(shì),A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)呈上升趨勢(shì);與A組(對(duì)照組)和B組(手術(shù)組)相比,C組(冷凍組)在7天、14天腫瘤細(xì)胞內(nèi)Hsp70表達(dá)量呈下降趨勢(shì)。結(jié)論1.冷凍消融治療可減緩對(duì)側(cè)移植瘤生長(zhǎng)速率,降低小鼠肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率,延長(zhǎng)小鼠生存期,提示冷凍消融治療前列腺癌后可誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng)。2.冷凍消融可誘導(dǎo)機(jī)體CD4+Th1優(yōu)勢(shì)免疫反應(yīng),并增強(qiáng)CD8+CTL細(xì)胞殺傷活性,抑制對(duì)側(cè)腫瘤生長(zhǎng)3.冷凍后外周血Hsp70表達(dá)升高可能參與了冷凍免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 冷凍消融 旁觀者效應(yīng) 免疫反應(yīng) Hsp70
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語/符號(hào)說明13-14
• 前言14-16
• 研究現(xiàn)狀、成果14-15
• 研究目的、方法15-16
• 對(duì)象和方法16-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、分組及實(shí)驗(yàn)材料選擇16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-27
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 1.2.2 小鼠腫瘤模型的構(gòu)建18
• 1.2.3 治療方法18-19
• 1.2.4 標(biāo)本采集19
• 1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞以及Th1/Th2比例19-20
• 1.2.6 肺組織標(biāo)本Hematoxylin-eosin staining（HE）染色20-21
• 1.2.7 腫瘤組織切片免疫組織化學(xué)染色21-22
• 1.2.8 ELISA法檢測(cè)小鼠外周血清中Hsp70水平含量22-24
• 1.2.9 非放射性細(xì)胞毒性試驗(yàn)（LDH殺傷實(shí)驗(yàn)）24-25
• 1.2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡法 (Western Blot）檢測(cè)Hsp7025-27
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法27-28
• 結(jié)果28-56
• 2.1 不同治療方法對(duì)小鼠對(duì)側(cè)腫瘤生長(zhǎng)的影響28-29
• 2.2 不同治療方法對(duì)小鼠總體生存（OS）的影響29-30
• 2.3 不同治療方法對(duì)小鼠肺轉(zhuǎn)移的影響30-31
• 2.4 不同治療方法對(duì)脾臟CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞和Th1/Th2比值的影響31-44
• 2.4.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟CD4+T細(xì)胞比例變化31-34
• 2.4.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟CD8+T細(xì)胞比例變化34-37
• 2.4.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟NK細(xì)胞比例變化37-40
• 2.4.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟Th1/Th2比值的比例變化（%）40-44
• 2.5 不同治療方法對(duì)脾臟CTL細(xì)胞LDH殺傷活性變化的影響44-48
• 2.5.1 脾臟CTL細(xì)胞按 20:1 對(duì)RM-1 細(xì)胞LDH殺傷活性變化的檢測(cè)44-46
• 2.5.2 脾臟CTL細(xì)胞按 40:1 對(duì)RM-1 細(xì)胞LDH殺傷活性變化的檢測(cè)46-48
• 2.6 不同治療方法對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響48-52
• 2.7 不同治療方法對(duì)血清Hsp70含量變化的影響52-54
• 2.8 不同治療方法對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)Hsp70蛋白表達(dá)量變化的影響54-56
• 討論56-62
• 3.1 前列腺癌的發(fā)病率和治療現(xiàn)狀56-57
• 3.2 冷凍消融誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng)的相關(guān)研究57-59
• 3.3 冷凍消融誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng)的抗腫瘤免疫機(jī)制59-60
• 3.4 冷凍消融誘導(dǎo)Hsp70對(duì)抗腫瘤免疫反應(yīng)的影響60-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明67-68
• 綜述 Hsp70在抗腫瘤免疫中的研究進(jìn)展68-77
• 綜述參考文獻(xiàn)73-77
• 致謝77-78
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷78

  本文關(guān)鍵詞：冷凍消融治療前列腺癌后誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：503231