本文關(guān)鍵詞：紅細(xì)胞表面分子在腎移植術(shù)后免疫功能狀態(tài)評價中的臨床價值，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腎移植手術(shù)發(fā)展至今,已經(jīng)使無數(shù)的終末期腎病患者的生存質(zhì)量得到顯著提高,生存時間得以延長,但腎移植術(shù)后排斥反應(yīng)和感染會導(dǎo)致移植腎失功,甚至危及受者生命。目前學(xué)術(shù)界普遍認(rèn)為,上述兩種亟需攻克的難題與機(jī)體免疫功能失衡息息相關(guān)。隨著免疫抑制治療手段的不斷進(jìn)步,組織配型技術(shù)和外科手術(shù)技術(shù)的提高,移植排斥反應(yīng)的發(fā)生率正在逐年降低。但是免疫抑制藥物的使用也提高了腎移植受者機(jī)會性感染的風(fēng)險,可以說免疫抑制藥物的臨床應(yīng)用具有雙面性,在保護(hù)移植器官免受宿主體內(nèi)免疫系統(tǒng)攻擊的同時也導(dǎo)致了機(jī)會性感染的發(fā)生。因此,移植術(shù)后如何對受者的免疫功能狀態(tài)做出客觀、準(zhǔn)確的評價,是指導(dǎo)臨床免疫抑制藥物合理使用的基礎(chǔ),這樣既可以使腎移植受者的免疫狀態(tài)在免疫排斥和免疫耐受之間保持平衡,確保移植物在受者體內(nèi)長期存活,又可以避免因免疫抑制劑過量應(yīng)用帶來的潛在風(fēng)險,因此腎移植術(shù)后受者體內(nèi)免疫功能的評價是當(dāng)前器官移植領(lǐng)域關(guān)注的焦點(diǎn)之一。紅細(xì)胞(RBC)是血液運(yùn)送氧氣的最主要的媒介,而近年來的研究發(fā)現(xiàn),紅細(xì)胞除了具有攜氧功能之外,還具有免疫功能,是人體內(nèi)數(shù)量最多的天然免疫細(xì)胞。既往的研究認(rèn)為,成熟的無核紅細(xì)胞似乎不具備參與機(jī)體免疫功能的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)。直到1981年Siegel提出“紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)”的概念,學(xué)術(shù)界才認(rèn)識到紅細(xì)胞膜表面表達(dá)了許多免疫分子,這些免疫相關(guān)物質(zhì)參與了黏附、識別、濃縮、殺傷抗原、清除循環(huán)免疫復(fù)合物(circulating immune complex, CIC)等過程。對肺炎球菌和梅毒螺旋體等進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在有補(bǔ)體和紅細(xì)胞參與的情況下,白細(xì)胞的吞噬功能明顯增強(qiáng)；也有研究報(bào)道紅細(xì)胞可以阻止腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的擴(kuò)散,這些研究均提示紅細(xì)胞雖然沒有細(xì)胞核,但是仍然具有免疫調(diào)節(jié)功能。紅細(xì)胞對于維持機(jī)體免疫系統(tǒng)的平衡和穩(wěn)定發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,在體內(nèi)可以與淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞相互作用,協(xié)同參與對免疫細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控。紅細(xì)胞參與對機(jī)體免疫反應(yīng)的調(diào)控主要是通過其表達(dá)的膜表面免疫分子實(shí)現(xiàn)的,其中,補(bǔ)體受體-1(complement receptor 1, CR1/CD35)在紅細(xì)胞免疫黏附功能中具有非常重要的作用,其與C3b具有較強(qiáng)的親和力,可以結(jié)合并參與清除血漿中的循環(huán)物質(zhì),促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞吞噬循環(huán)中的免疫復(fù)合物,并通過二次抗原遞呈的作用間接參與調(diào)控細(xì)胞因子的產(chǎn)生。紅細(xì)胞還可通過產(chǎn)生特異性TNF誘導(dǎo)因子、NK細(xì)胞增強(qiáng)因子等來參與機(jī)體非特異性免疫調(diào)控,及細(xì)胞因子的調(diào)控,盡管其分子機(jī)制尚未完全明確,但有研究證實(shí)紅細(xì)胞可以通過其膜表面CD58、CD59等淋巴細(xì)胞CD2的天然配體分子促進(jìn)與NK細(xì)胞和T細(xì)胞的結(jié)合,清除淋巴細(xì)胞微環(huán)境活性氧物質(zhì),提高NK細(xì)胞殺傷活性和T細(xì)胞抗凋亡能力,并促進(jìn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-1、IL-2等細(xì)胞因子。已有多種疾病的病程進(jìn)展中存在紅細(xì)胞膜表面分子表達(dá)異常,如肝炎、良惡性腫瘤、自身免疫性疾病、糖尿病等。慢性腎衰竭患者由于腎功能的損壞,促紅細(xì)胞生成素分泌減少,容易導(dǎo)致貧血的發(fā)生。腎移植手術(shù)后,隨著腎功能恢復(fù),同時貧血狀況也隨之改善,但是在此過程中,紅細(xì)胞膜表面免疫分子的表達(dá)變化以及紅細(xì)胞免疫功能狀態(tài)等尚未有相關(guān)研究。鑒于此,本研究就紅細(xì)胞免疫分子在腎移植術(shù)后表達(dá)變化及其機(jī)制進(jìn)行了分析探討。首先,通過流式細(xì)胞術(shù)測定腎移植受者紅細(xì)胞膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59的表達(dá),旨在明確腎移植及其術(shù)后不同免疫狀態(tài)下受者紅細(xì)胞膜表面分子表達(dá)變化情況,從而更全面的評估腎移植受者的免疫狀態(tài),以期為臨床免疫抑制治療提供更好的依據(jù)。并利用Transwell和細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)等方法,觀察體外條件下,不同免疫抑制劑對紅細(xì)胞免疫分子表達(dá)的影響,以及紅細(xì)胞與T、B淋巴細(xì)胞的相互作用,通過對培養(yǎng)過程中細(xì)胞因子表達(dá)情況的檢測,對不同免疫狀態(tài)的腎移植受者紅細(xì)胞對T和B淋巴細(xì)胞增殖情況的影響機(jī)制進(jìn)行研究,觀察紅細(xì)胞免疫功能腎移植術(shù)后不同免疫狀態(tài)下的變化,以及紅細(xì)胞在體外對淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)作用的機(jī)制。一、紅細(xì)胞CD35/CD58/CD59在腎移植受者中的表達(dá)變化選擇2013年1月至2014年6月間接受首次同種異體腎移植手術(shù),術(shù)后移植腎功能穩(wěn)定的受者50例為穩(wěn)定組,慢性腎衰竭患者65例為慢性排斥反應(yīng)慢性腎衰竭組(簡稱CRF組),以50例健康體檢人員為對照組。同時,對52例腎移植受者進(jìn)行組織病理學(xué)檢查,選擇腎移植術(shù)后發(fā)生移植腎功能延遲恢復(fù)的受者11例為移植腎功能延遲恢復(fù)組(簡稱DGF組),以及腎移植術(shù)后發(fā)生急性排斥反應(yīng)的受者16例為急性排斥反應(yīng)組(簡稱AR組),留取上述不良事件發(fā)生時的腎移植受者外周抗凝血樣本。采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測各組研究對象的外周血紅細(xì)胞膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59的平均幾何熒光強(qiáng)度(GMFI)表達(dá),觀察腎移植受者術(shù)后發(fā)生腎功能延遲恢復(fù)和排斥反應(yīng)時外周血紅細(xì)胞免疫分子CD35/CD58/CD59的變化,并與對照組和穩(wěn)定組進(jìn)行比較,來探討紅細(xì)胞免疫功能在受者腎移植后不同狀態(tài)的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,CRF組CD35、CD58、CD59的GMFI表達(dá)分別為(25.26±7.92)、(89.94±13.8)、(75.38±16.49)明顯低于對照組,P0.05；穩(wěn)定組CD35 (27.04 ±6.0)、CD59(87.62±20.90)的表達(dá)雖然較CRF組高,但明顯低于對照組,P0.05,穩(wěn)定組CD59的表達(dá)明顯高于CRF組,P0.05；穩(wěn)定組CD58的表達(dá)與對照組無明顯差異,P0.05。DGF組與AR組紅細(xì)胞免疫分子CD35表達(dá)分別為(22.46±5.01)、(24.51±6.58),明顯低于對照組,P0.05,但與穩(wěn)定期對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；DGF組和AR組CD58表達(dá)分別為(73.24±11.11)、(77.42±16.60)明顯低于對照組,P0.05; DGF組和AR組紅細(xì)胞免疫分子CD59表達(dá)分別為(58.66±15.82)、(77.17±28.49),明顯低于對照組,P0.05 AR組雖低于穩(wěn)定組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；DGF組CD59表達(dá)明顯低于AR組,P0.05。該結(jié)果提示,由于腎功能受損,CRF患者紅細(xì)胞表達(dá)的免疫分子均有所下調(diào),紅細(xì)胞免疫功能受損,而腎移植術(shù)后隨著腎功能恢復(fù),紅細(xì)胞表達(dá)的免疫分子有所恢復(fù),但除CD58表達(dá)與正常對照無差別之外,CD35和CD59表達(dá)仍低于正常對照。在腎移植術(shù)后出現(xiàn)DGF時,體內(nèi)出現(xiàn)過度的缺血再灌注損傷,對紅細(xì)胞免疫分子表達(dá)影響明顯,尤其是CD58和CD59,其表達(dá)低于穩(wěn)定組和對照組,并且CD59甚至低于AR組,提示缺血再灌注損傷產(chǎn)生的大量活性氧自由基對紅細(xì)胞表達(dá)免疫膜分子影響明顯。而AR時,由于炎癥的局限性,未能形成全身性的炎癥反應(yīng),因此其表達(dá)變化較小。二、腎移植受者紅細(xì)胞免疫功能與淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性及巨細(xì)胞病毒感染對紅細(xì)胞CD35/CD58/CD59表達(dá)的影響對2013年1月至2014年6月間接受首次同種異體腎移植手術(shù)的受者術(shù)后血清肌酐恢復(fù)情況進(jìn)行監(jiān)測,選擇30例腎移植術(shù)后功能穩(wěn)定的受者為連續(xù)監(jiān)測組,分別于術(shù)前1d、術(shù)后3d、7d、14d各個時間點(diǎn)采集連續(xù)監(jiān)測組受者外周血樣本；收集臨床疑似病毒感染的腎移植受者外周血進(jìn)行間接免疫熒光技術(shù)對其巨細(xì)胞病毒(CMV)早期抗原PP65檢測,以發(fā)現(xiàn)1個或1個以上陽性細(xì)胞/2×105個白細(xì)胞,則定為陽性。選擇外周血CMV-pp65抗原陽性的腎移植受者61例為CMV活動性感染組(簡稱CMV組),采用流式細(xì)胞術(shù)同時檢測其外周血紅細(xì)胞免疫分子CD35/CD58/CD59的表達(dá)和T、B、NK淋巴細(xì)胞的水平。研究發(fā)現(xiàn),健康對照組紅細(xì)胞CD35的表達(dá)與CD59表達(dá)呈正相關(guān),與CD4+T細(xì)胞的百分比呈正相關(guān),與B細(xì)胞的百分比呈負(fù)相關(guān),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腎移植受者術(shù)前1d、術(shù)后3d、7d、14d的紅細(xì)胞免疫分子CD35GMFI表達(dá)分別為(27.00±7.5)、(28.04±7.2)、(25.70±6.83)和(24.19±6.0)均低于對照組,P0.05。受者術(shù)前、術(shù)后3d、7d、14d的紅細(xì)胞免疫分子CD59GMFI表達(dá)分別為(80.44±20.56)、(91.50±23.17)、(85.02±24.92)和(82.67±25.56)均低于對照組,P0.05。受者紅細(xì)胞免疫分子CD58GMFI表達(dá)與對照組比較,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。連續(xù)監(jiān)測組術(shù)后3dCD3+T淋巴細(xì)胞絕對數(shù)(773.5±301)低于對照組,P0.05；術(shù)后3d與術(shù)前1d(2288±723)相比明顯降低,P0.05； NK細(xì)胞絕對數(shù)在術(shù)后3d時降至最低(108.3±40.1),與對照組、術(shù)前1d、術(shù)后14d比較P0.05；B細(xì)胞絕對數(shù)在術(shù)后7d(610.2±215.6)、14d(765.5±269.4)急劇增高,甚至高于術(shù)前和對照組,P0.05。CMV組的紅細(xì)胞免疫分子CD35/CD58/CD59表達(dá)明顯低于對照組,P0.05；非活動性感染組的CD59表達(dá)高于CMV組,P0.05。其中高活動性感染組的紅細(xì)胞CD35、CD59的表達(dá)均低于低活動感染組,P0.05。三、紅細(xì)胞對T、B淋巴細(xì)胞影響的初步探討對2015年7月至2015年12月期間接受同種異體腎移植術(shù)后3個月內(nèi)穩(wěn)定期的受者,以及在B超引導(dǎo)下移植腎穿刺活檢后病理結(jié)果提示發(fā)生排斥反應(yīng)的受者,留取其外周抗凝血標(biāo)本,用密度梯度離心法分離紅細(xì)胞和單個核細(xì)胞(PBMC).分離后的紅細(xì)胞加免疫抑制劑刺激48h與單獨(dú)培養(yǎng)48h的膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59表達(dá)相比沒有明顯差異。將穩(wěn)定期受者紅細(xì)胞、排斥受者紅細(xì)胞分別與健康人的PBMC聯(lián)合培養(yǎng)后,采用流式細(xì)胞術(shù)對培養(yǎng)后的混合細(xì)胞中紅細(xì)胞膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59的表達(dá)和T、B淋巴細(xì)胞的水平進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定紅細(xì)胞組B細(xì)胞比例較排斥組明顯增高,并且CD19表達(dá)的明顯上調(diào),出現(xiàn)強(qiáng)陽性細(xì)胞群。通過用流式細(xì)胞術(shù)對該群細(xì)胞表型分析以及胞內(nèi)標(biāo)記IL-10,結(jié)果顯示該細(xì)胞為分泌IL-10的CD19+的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群,提示穩(wěn)定期受者紅細(xì)胞可以增加外周血Breg細(xì)胞比例。為了明確紅細(xì)胞與誘導(dǎo)Breg之間的關(guān)系,我們利用磁珠分選純化B細(xì)胞和T細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)單獨(dú)與紅細(xì)胞共培養(yǎng)的B細(xì)胞沒有明顯增殖,而加入T細(xì)胞共培養(yǎng)則Breg亞群增加,提示紅細(xì)胞是通過T細(xì)胞誘導(dǎo)Breg產(chǎn)生和B細(xì)胞增殖的。為了對細(xì)胞之間相互調(diào)控的機(jī)制進(jìn)行深入研究,我們利用Transwell小室,將紅細(xì)胞與T細(xì)胞聯(lián)合至于小室上層進(jìn)行培養(yǎng),同時在下室加入B細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞出現(xiàn)增殖,Breg亞群比例增加,提示T細(xì)胞可能通過旁分泌的方式誘導(dǎo)Breg的產(chǎn)生；ELISA檢測結(jié)果顯示,穩(wěn)定紅細(xì)胞組和T細(xì)胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)上清中的IL-10和TGF-β的含量高于排斥紅細(xì)胞組。體外聯(lián)合培養(yǎng)的結(jié)果提示,紅細(xì)胞可以通過促進(jìn)T細(xì)胞分泌IL-10和TGF-β來誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖和Breg的產(chǎn)生。結(jié)論：慢性腎衰竭患者體內(nèi)紅細(xì)胞膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59表達(dá)降低,提示在慢性腎功能衰竭的尿毒癥狀態(tài)損害了紅細(xì)胞免疫功能,移植后,腎功能隨著肌酐的降低逐漸恢復(fù),紅細(xì)胞膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59表達(dá)有所上調(diào),但除了CD58之外,CD35和CD59表達(dá)在腎功能恢復(fù)后其表達(dá)仍低于健康對照組,可能與免疫抑制劑的使用有關(guān)。腎移植手術(shù)后,紅細(xì)胞免疫功能和淋巴細(xì)胞免疫功能均出現(xiàn)紊亂,在術(shù)后隨著血清肌酐的降低、腎功能穩(wěn)定后可逐漸恢復(fù)。腎移植術(shù)后發(fā)生DGF、急性排斥反應(yīng)和巨細(xì)胞病毒感染時,受者紅細(xì)胞膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59表達(dá)下調(diào),提示這些不良事件過程伴隨有紅細(xì)胞免疫功能的變化,與疾病過程有關(guān)。免疫抑制劑西羅莫司、環(huán)孢素和他克莫司在短時間內(nèi)并不影響循環(huán)中紅細(xì)胞表面CD35/CD58/CD59分子的表達(dá)。穩(wěn)定期受者紅細(xì)胞可促進(jìn)健康對照者PBMC中的B細(xì)胞增殖,且可誘導(dǎo)B細(xì)胞向調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群分化,該過程是是通過促進(jìn)T細(xì)胞活化分泌細(xì)胞因子來間接誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖的。采用流式細(xì)胞術(shù)對紅細(xì)胞膜表面免疫分子CD35/CD58/CD59的表達(dá)進(jìn)行檢測,對于評估腎移植受者術(shù)后免疫狀態(tài),早期診斷、預(yù)防排斥反應(yīng)、感染等不良反應(yīng)的發(fā)生,以及指導(dǎo)合理用藥有一定臨床意義。
【關(guān)鍵詞】：腎移植 紅細(xì)胞 T細(xì)胞 B細(xì)胞 巨細(xì)胞病毒
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R699.2
【目錄】：

• 縮略詞表5-8
• 中文摘要8-13
• Abstract13-18
• 前言18-21
• 一、紅細(xì)胞CD35/CD58/CD59在腎移植受者中的表達(dá)變化21-37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-28
• 3 結(jié)果28-34
• 4 討論34-37
• 二、腎移植受者紅細(xì)胞免疫功能與淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性及巨細(xì)胞病毒感染對紅細(xì)胞CD35/CD58/CD59表達(dá)的影響37-59
• （一）腎移植受者紅細(xì)胞CD35/CD58/CD59與T、B淋巴細(xì)胞亞群的變化37-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 2 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 3 結(jié)果40-50
• 4 討論50-52
• （二）腎移植受者巨細(xì)胞病毒感染時紅細(xì)胞CD35/CD58/CD59表達(dá)的變化52-59
• 1 實(shí)驗(yàn)材料52-53
• 2 實(shí)驗(yàn)方法53-55
• 3 結(jié)果55-57
• 4 討論57-59
• 三、紅細(xì)胞對T、B淋巴細(xì)胞影響的初步探討59-73
• 1 實(shí)驗(yàn)材料59-60
• 2 實(shí)驗(yàn)方法60-65
• 3 結(jié)果65-69
• 4 討論69-73
• 結(jié)論73-74
• 參考文獻(xiàn)74-81
• 文獻(xiàn)綜述81-88
• 參考文獻(xiàn)85-88
• 發(fā)表論著（一）88-97
• 發(fā)表論著（二）97-104
• 個人簡歷104-105
• 致謝105

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中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 江洪濤;成功實(shí)施兩例腎移植手術(shù)[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

2 通訊員　　王其玲　記者　　秦軍;成功完成2000例腎移植[N];浙江日報(bào);2006年

3 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院 桂慧中;把握好腎移植時機(jī)[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2008年

4 記者 石小宏;全國首例地震傷員腎移植手術(shù)成功[N];四川日報(bào);2009年

5 中國工程院院士 黎磊石;腎移植規(guī)范有更新[N];健康報(bào);2009年

6 記者 唐湘岳　通訊員 成新平 王鐵石;全國首例雙血型不相容腎移植手術(shù)成功[N];光明日報(bào);2010年

7 記者 李光明 通訊員 殷萍 思思;腎移植患者倒藥獲利200萬[N];法制日報(bào);2014年

8 本報(bào)記者 王峰;腎移植，為腎衰患者留住春天[N];中國消費(fèi)者報(bào);2001年

9 李華虹 方X;腎移植之路坡緩步慢[N];保健時報(bào);2005年

10 楊衛(wèi)國;一超體重者成功接受雙腎移植[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王彥斌;CYP3A5和MDR1與腎移植術(shù)后受者CNI劑量及濃度關(guān)系研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

2 侯言彬;腎移植患者心理體驗(yàn)的研究[D];中南大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔祥瑞;紅細(xì)胞表面分子在腎移植術(shù)后免疫功能狀態(tài)評價中的臨床價值[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

2 辛大森;腎移植術(shù)后股骨頭壞死發(fā)病特點(diǎn)及相關(guān)危險因素研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

3 韓平;40例腎移植患者圍術(shù)期麻醉管理的回顧性分析[D];山東大學(xué);2012年

4 陳敏靈;腎移植術(shù)后空腹血糖、血脂變化規(guī)律與影響因素分析[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

5 王志鵬;丙型肝炎病毒感染對腎移植術(shù)后影響的臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 段智梅;腎移植術(shù)后肺部感染的29例臨床分析[D];山東大學(xué);2013年

7 王麗敏;腎移植術(shù)后重癥肺部感染44例臨床分析[D];吉林大學(xué);2006年

8 朱姝娟;腎移植患者術(shù)后抑郁的影響因素及心理干預(yù)效果評價[D];中南大學(xué);2011年

9 肖瑩;圍手術(shù)期保溫技術(shù)的應(yīng)用對腎移植患者的保護(hù)作用[D];吉林大學(xué);2008年

10 周琴飛;腎移植術(shù)后患者心理狀態(tài)、生活質(zhì)量及其相關(guān)因素[D];中南大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：紅細(xì)胞表面分子在腎移植術(shù)后免疫功能狀態(tài)評價中的臨床價值，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：502839