本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對阿霉素?fù)p傷足細(xì)胞mTOR的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討大鼠BMSCs對阿霉素?fù)p傷足細(xì)胞m TOR的影響。方法:1、利用密度梯度離心法結(jié)合貼壁分離法從SD大鼠骨髓中提取BMSCs,經(jīng)體外傳代、擴(kuò)增至P3,并利用流式細(xì)胞儀鑒定其表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD45、CD90,同時運(yùn)用成軟骨和成脂誘導(dǎo)方法鑒定其功能。2、利用過篩法和IV型膠原酶消化法從SD大鼠腎臟中提取足細(xì)胞,經(jīng)體外培養(yǎng),并通過免疫熒光法檢測其表面特有的蛋白nephrin和podocin對其進(jìn)行鑒定。3、體外實(shí)驗(yàn),分為:正常組足細(xì)胞;阿霉素組足細(xì)胞+阿霉素(2ug/ml);干細(xì)胞組足細(xì)胞+BMSCs(共培養(yǎng)24h)+阿霉素(2ug/ml)。各實(shí)驗(yàn)組干預(yù)0h、3h、24h后利用Western bolt技術(shù)檢測各組足細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白nephrin及m TOR信號通路相關(guān)蛋白m TOR、p-m TOR、raptor、rictor的表達(dá)情況。結(jié)果:1、顯微鏡下觀察BMSCs呈梭形、多角形成纖維細(xì)胞樣形態(tài),大小基本一致。BMSCs在分別加入成軟骨和成脂誘導(dǎo)劑下成功誘導(dǎo)出成軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。利用流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面的抗原標(biāo)志物提示CD29、CD90呈強(qiáng)陽性,CD34和CD45呈陰性表達(dá)。細(xì)胞純度可達(dá)98%以上。2、利用過篩法可以成功分離出腎小球,用IV型膠原酶消化后種植在培養(yǎng)瓶中能從腎小球中爬出成鵝卵石樣細(xì)胞,利用免疫熒光法檢測其表面可以表達(dá)出足細(xì)胞特有的蛋白nephrin和podocin。3、Western bolt結(jié)果顯示:在0小時和3小時時,正常組、阿霉素組、干細(xì)胞組nephrin和rictor的表達(dá)無明顯差異;在24小時時,干細(xì)胞組和阿霉素組的nephrin的表達(dá)均比正常組少,但干細(xì)胞組比阿霉素組的表達(dá)多,同時干細(xì)胞組和阿霉素組的rictor的表達(dá)均比正常組多,但干細(xì)胞組比阿霉素組的表達(dá)少。m TOR、p-m TOR、raptor蛋白在0小時時,正常組、阿霉素組、干細(xì)胞組的表達(dá)無明顯差異,但是在3小時、24小時時,干細(xì)胞組和阿霉素組的表達(dá)均比正常組多,但干細(xì)胞組比阿霉素組的表達(dá)少,且24小時時的表達(dá)量均大于3小時時的表達(dá)量。結(jié)論:1、利用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法能成功提取、培養(yǎng)出BMSCs,并且其純度高、活性高、增殖能力強(qiáng)及多向分化潛能,可用于實(shí)驗(yàn)研究。2、利用過篩法和IV型膠原酶消化法能成功提取、培養(yǎng)出符合實(shí)驗(yàn)要求的足細(xì)胞。3、AMD足細(xì)胞的損傷機(jī)制與足細(xì)胞m TOR過度激活有關(guān),從而導(dǎo)致足細(xì)胞的功能紊亂。大鼠BMSCs可能通過抑制m TOR活性,保護(hù)阿霉素?fù)p傷足細(xì)胞,使nephrin蛋白的表達(dá)增加。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 阿霉素 足細(xì)胞 mTOR p-mTOR nephrin
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 第一部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取、培養(yǎng)及鑒定材料與設(shè)備12-23
• 引言12
• 材料與設(shè)備12-14
• 方法14-19
• 結(jié)果19-21
• 討論21-22
• 結(jié)論22-23
• 第二部分 大鼠原代足細(xì)胞的提取、培養(yǎng)及鑒定材料與設(shè)備23-30
• 引言23
• 材料與設(shè)備23-25
• 方法25-27
• 結(jié)果27-28
• 討論28-29
• 結(jié)論29-30
• 第三部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對阿霉素?fù)p傷足細(xì)胞m TOR的影響材料與設(shè)備30-42
• 引言30
• 材料與設(shè)備30-33
• 方法33-37
• 結(jié)果37-40
• 討論40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述46-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 致謝53

【參考文獻(xiàn)】

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1 賈苗;張益民;賴德源;;大鼠足細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2010年23期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅流濤;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對阿霉素大鼠足細(xì)胞骨架F-actin的影響及機(jī)制探討研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號：489974