本文關(guān)鍵詞：游離脂肪酸激活大鼠腎小球系膜細胞NLRP3炎癥小體信號及作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:糖尿病腎病(DN)是糖尿病的嚴重微血管并發(fā)癥,已成為西方國家終末期腎病的主要原因。近年來研究表明固有免疫介導(dǎo)的炎癥是糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。固有免疫系統(tǒng)是機體抵抗病原體的第一道防線,它通常參與炎癥的啟動和擴展,通過模式識別受體激活以識別“自己”和“異己”分子抗原。模式識別受體可通過損傷相關(guān)分子模式和病原相關(guān)分子模式識別危險信號,啟動炎癥反應(yīng),以應(yīng)答環(huán)境中的感染和組織損傷。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(即NLRP3)炎癥小體是固有免疫系統(tǒng)的一員,可被內(nèi)源性和外源性危險信號激活,繼而觸發(fā)固有免疫,導(dǎo)致胱天蛋白酶Caspase-1激活,促進促炎細胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的成熟和分泌,放大促炎反應(yīng)。越來越多證據(jù)表明NLRP3炎癥小體在各種炎癥性疾病中起著重要作用,促炎細胞因子在炎癥過程中起重要調(diào)節(jié)作用。血漿游離脂肪酸升高可以導(dǎo)致脂毒性的發(fā)生,具有脂毒性的游離脂肪酸可刺激組織釋放炎癥因子,并與這些炎癥因子共同作用,造成機體代謝器官長期處于低度炎癥狀態(tài)。然而游離脂肪酸是否在腎小球系膜細胞激活NLRP3炎癥小體并參與腎臟炎癥的發(fā)生尚不清楚。因此,本研究通過觀察NLRP3炎癥小體信號通路在棕櫚酸以及活性氧(ROS)抑制劑NAC作用下腎小球系膜細胞的表達,旨在探討高脂介導(dǎo)的NLRP3炎癥小體信號通路在腎臟炎癥反應(yīng)中的作用及相關(guān)機制,找到以NLRP3炎癥小體信號通路為治療靶點的新思路。方法:(1)細胞培養(yǎng)及分組:體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞,以棕櫚酸(PA)作為刺激因子,活性氧抑制劑NAC作為阻斷劑,分別設(shè)置以下三組:①正常對照組(NC組):培養(yǎng)基含5.6 mmol/L葡萄糖;②棕櫚酸組(HPA組):設(shè)定棕櫚酸濃度梯度3個組,HPA1組:培養(yǎng)基含0.05 mmol/L棕櫚酸;HPA2組:培養(yǎng)基含0.1 mmol/L棕櫚酸;HPA3組:培養(yǎng)基含0.15 mmol/L棕櫚酸;③高棕櫚酸+NAC組(NAC+HPA組):0.15 mmol/L棕櫚酸培養(yǎng)基內(nèi)預(yù)先加入10μmol/L NAC阻斷活性氧的產(chǎn)生,以觀察活性氧在棕櫚酸激活NLRP3炎癥小體信號中的作用。(2)各組細胞分別培養(yǎng)6h、9h、12h后,使用蛋白免疫印跡法和RT-PCR分別檢測各組NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA的表達。(3)統(tǒng)計學(xué)分析:數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析,以均數(shù)±標準差(xˉ±s)表示,各組間比較使用單因素方差分析,兩兩比較使用q檢驗,組內(nèi)比較使用獨立樣本均數(shù)t檢驗,檢驗標準a=0.05,P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:(1)棕櫚酸刺激系膜細胞NLRP3炎癥小體信號分子的表達變化:與正常對照組相比,不同作用濃度和時間的棕櫚酸組均可上調(diào)NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表達(P0.05),且呈一定的濃度和時間依賴性,其中NLRP3以0.15mmol/L棕櫚酸作用9h表達最強;Caspase-1、IL-1β以0.15mmol/L棕櫚酸作用12h表達最強。(2)NAC干預(yù)阻斷活性氧后,棕櫚酸作用的腎小球系膜細胞NLRP3炎癥小體信號分子的表達變化:與單純高棕櫚酸組相比,預(yù)先加入NAC阻斷氧化應(yīng)激可阻止棕櫚酸誘導(dǎo)的NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表達增強(P0.05)。結(jié)論:棕櫚酸可能通過氧化應(yīng)激機制誘導(dǎo)腎小球系膜細胞NLRP3炎癥小體信號的活化,這可能是游離脂肪酸介導(dǎo)腎臟炎癥反應(yīng)的機制之一。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 NLRP3炎癥小體 棕櫚酸 氧化應(yīng)激 炎癥
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-28
• 結(jié)果28-38
• 討論38-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-52
• 英漢縮略詞對照表52-54
• 致謝54-55
• 炎癥小體與腎臟疾病研究進展（綜述）55-65
• 參考文獻61-65

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本文編號：480720