本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍聯(lián)合吉非替尼抑制膀胱癌的作用及其機理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究二甲雙胍單用對膀胱癌細胞的抑制作用及機制,評價不同給藥方式對小鼠膀胱癌生長的影響;之后,進一步探討表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)的代表藥物吉非替尼與二甲雙胍聯(lián)用的體內(nèi)、外抗膀胱癌藥效及藥物作用機制。方法:MTT法、細胞集落形成實驗分別檢測藥物對膀胱癌細胞增殖、克隆形成的影響;western blot檢測細胞內(nèi)AMPK(Adenosine 5‘-monophosphate(AMP)-activated protein kinase)、EGFR信號通路相關(guān)蛋白的變化。采用原位小鼠膀胱癌模型檢測藥物體內(nèi)抗癌活性,經(jīng)灌胃、膀胱灌注給藥二甲雙胍,比較其藥物效果;實驗過程對小鼠進行尾部采血,用乳酸試劑盒檢測血清乳酸濃度。實驗結(jié)束后取小鼠膀胱組織進行免疫組化,比較各組小鼠HE(hematoxylinandeosin)、Ki-67的變化。用同樣的小鼠模型,采用膀胱灌注給藥方式對二甲雙胍與吉非替尼聯(lián)用的抗癌效果進行評價。結(jié)果:用二甲雙胍處理多種膀胱癌細胞的MTT實驗表明二甲雙胍呈劑量依賴抑制膀胱癌細胞生長,而細胞克隆形成實驗發(fā)現(xiàn),二甲雙胍在低濃度(0.5m M)能促進膀胱癌細胞集落形成,當濃度為4m M時,二甲雙胍對膀胱癌細胞集落形成的抑制能力顯著增加;模擬膀胱灌注給藥方式的研究結(jié)果表明,二甲雙胍能有效抑制膀胱癌細胞集落形成。藥物作用機制方面,western blot結(jié)果表明二甲雙胍在膀胱癌細胞中主要通過激活A(yù)MPK信號通路,降低下游靶蛋白活性來發(fā)揮抗膀胱癌作用;在不同膀胱癌細胞中,二甲雙胍與AMPK抑制劑Compound C聯(lián)用,MTT實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)Compound C減弱二甲雙胍對膀胱癌細胞增殖的抑制作用。另一方面,二甲雙胍抑制與細胞生長、增殖密切關(guān)聯(lián)的AKT、ERK蛋白磷酸化水平,當二甲雙胍與AKT、ERK特異性抑制劑分別聯(lián)用后,MTT結(jié)果表明兩藥聯(lián)用協(xié)同抑制膀胱癌細胞增殖,聯(lián)用指數(shù)(CI,compusyn index)值均小于1,western blot也證實兩藥聯(lián)用進一步降低AKT或ERK蛋白磷酸化水平。利用原位同種膀胱癌模型對藥物體內(nèi)活性進行評價,對二甲雙胍進行不同方式給藥,研究發(fā)現(xiàn)膀胱灌注給藥能顯著抑制小鼠膀胱癌生長并未觀察到明顯的毒性反應(yīng)。將二甲雙胍與吉非替尼聯(lián)用于多種膀胱癌的MTT、clonogenic實驗表明兩藥聯(lián)用能協(xié)同抑制腫瘤細胞生長,藥物作用機制方面,一方面二甲雙胍通過激活A(yù)MPK信號通路增強吉非替尼抗膀胱癌生長的效果;另一方面,二甲雙胍和吉非替尼通過共同抑制AKT/ERK蛋白磷酸化從而發(fā)揮協(xié)同抗膀胱癌作用。藥物體內(nèi)活性評價亦采用原位同種膀胱癌模型,與體外抗膀胱腫瘤效果一致。結(jié)論:1、體外和體內(nèi)研究表明二甲雙胍能抑制膀胱癌生長,二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。2、二甲雙胍通過激活A(yù)MPK信號通路以及降低AKT、ERK蛋白磷酸化水平發(fā)揮抗膀胱癌作用;二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用共同抑制AKT/ERK蛋白磷酸化而發(fā)揮協(xié)同抗膀胱癌效果。
【關(guān)鍵詞】：二甲雙胍 吉非替尼 原位同種膀胱癌模型 灌注給藥
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1. 引言10-13
• 2. 材料與方法13-26
• 2.1 實驗材料13-16
• 2.2 細胞實驗方法16-22
• 2.3 動物實驗方法22-25
• 2.4 統(tǒng)計學分析25-26
• 3. 結(jié)果及討論26-56
• 3.1 二甲雙胍單用抗膀胱癌實驗結(jié)果26-40
• 3.2 二甲雙胍單用抗膀胱癌實驗結(jié)果討論40
• 3.3 二甲雙胍單用抗膀胱癌實驗小結(jié)40-41
• 3.4 二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用抗膀胱癌實驗結(jié)果41-54
• 3.5 二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用抗膀胱癌實驗結(jié)果討論54-55
• 3.6 二甲雙胍和吉非替尼聯(lián)用抗膀胱癌實驗小結(jié)55-56
• 4. 結(jié)論56-57
• 參考文獻57-63
• 附錄 1：英文縮略詞索引63-65
• 附錄 2：綜述65-79
• 參考文獻72-79
• 攻讀碩士學位期間的主要成果79-80
• 致謝80

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1 青云;英國科學家辨別出與膀胱癌有關(guān)的基因[J];中國處方藥;2004年08期

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4 丁虹彬，余雪軒;培養(yǎng)膀胱癌細胞的新方法[J];南京醫(yī)學院學報;1994年01期

5 張曉峰;劉訓勤;;一種新型膀胱癌快速診斷裝置[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年10期

6 孫宏志,凡杰,唐孝達;自穩(wěn)定反義IGF1R基因片段對膀胱癌細胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2000年05期

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8 漆少廷,徐錫坤,王心如;膀胱癌的分子生物學研究進展[J];國外醫(yī)學.泌尿系統(tǒng)分冊;2000年04期

9 章小平,楊紅枚,魯功成;流式細胞儀在膀胱癌多藥耐受研究中的應(yīng)用[J];臨床泌尿外科雜志;2000年09期

10 楊莉,汪少娟,楊業(yè)金,陳忠,吳燕麗;抗腫瘤藥對膀胱癌細胞產(chǎn)生的免疫抑制因子作用的影響[J];藥物流行病學雜志;2000年03期

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1 張永春;谷江;孫發(fā);石家齊;;傳統(tǒng)醫(yī)學在膀胱癌治療中的意義[A];2010年貴州省泌尿外科學術(shù)會議論文集[C];2010年

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本文編號：473212