發(fā)布時(shí)間：2017-06-22 21:03

  本文關(guān)鍵詞：ROCK1介導(dǎo)慢性腎臟病引起的蛋白質(zhì)能量消耗發(fā)病機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、探討慢性腎臟病激活ROCK1增加肌肉分解代謝促進(jìn)肌肉萎縮的新機(jī)制。2、探究藥物抑制ROCK1能否逆轉(zhuǎn)慢性腎臟病所致的肌肉萎縮。方法:1、健康雄性8周齡C57BL6小鼠30只,體質(zhì)量20~25g,分為4組:(1)正常對(duì)照組(CTL),(2)法舒地爾組(Fasudil,F),(3)慢性腎臟病組(chronic kidney disease,CKD),(4)慢性腎臟病+法舒地爾組(CKD+F);配對(duì)喂養(yǎng)野生型與基因敲除小鼠,8周齡,雄性,共24只,分為四組:(1)ROCK1~(+/+)假手術(shù)組,5只,(2)ROCK1~(-/-)假手術(shù)組,5只,(3)ROCK1~(+/+)CKD組,7只(4)ROCK1~(-/-)CKD組,7只。正常飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后,CKD與CKD+F組,ROCK1~(+/+)CKD與ROCK1~(-/-)CKD組行腎臟5/6切除術(shù),術(shù)后2周后予高蛋白飲食促進(jìn)CKD模型成立。術(shù)后8周后測(cè)血肌酐、尿素氮。F組和CKD+F組予法舒地爾50mg/(kg·d)腹腔注射,持續(xù)6周。處死留取靜脈血和肌肉。2、用含10%胎牛血清(FBS)和1%P-S的DMEM培育C2C12細(xì)胞,鋪滿六孔板面積約80%時(shí)換用含2%馬血清(HS)的DMEM。至細(xì)胞分化成條狀后,根據(jù)實(shí)驗(yàn)相應(yīng)加入M-Fv-Casp3、AP20187及Fasudil(100μg/ml),分別處理48、24、24小時(shí)后刮取細(xì)胞留用。3、形態(tài)學(xué)觀察:抗層黏蛋白免疫熒光染色:測(cè)肌肉橫截面積及肌肉中ROCK1的表達(dá);Western blot、免疫共沉淀、ELISA:檢測(cè)PTEN、ROCK1、Rho A、PI3K、Akt的活性及p-MYPT、p-GSK3β、GAPDH的含量;RT-PCR:檢測(cè)肌肉萎縮蛋白(Atrogin-1/MAFbx)和肌環(huán)脂蛋白(MuRF-1)mRNA的表達(dá)變化;同位素法:測(cè)趾長(zhǎng)伸肌和比目魚(yú)肌的蛋白降解率。4、所有計(jì)數(shù)結(jié)果用SPSS 19.0軟件行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1、CKD抑制PI3K的活性但Akt活性下降更為顯著,且PTEN被激活:CKD時(shí)肌肉中的PI3K和Akt的活性均受抑制(P0.05,P0.01),但Akt活性的下降更為顯著(P0.01)。PTEN的活性較對(duì)照組上升2.3倍(P0.05)。因此認(rèn)為PTEN活性的升高是介導(dǎo)Akt活性下降的另一重要因素。2、ROCK1在CKD小鼠的骨骼肌中被激活:CKD小鼠的骨骼肌中ROCK1剪切片段升高,ROCK1活性升高2.6倍(P0.01),Rho A GTP酶的活性較對(duì)照組無(wú)顯著差異。提示CKD小鼠的肌肉中ROCK1通過(guò)剪切被激活。3、ROCK1全身敲除可延緩CKD導(dǎo)致的肌肉萎縮:ROCK1~(+/+)假手術(shù)組與ROCK1~(-/-)假手術(shù)組小鼠的肌纖維橫截面積分布率無(wú)顯著差異,而ROCK1~(-/-)CKD組小鼠的肌纖維橫截面積分布率相較于ROCK1~(+/+)CKD組顯著右移。ROCK1~(+/+)假手術(shù)組與ROCK1~(-/-)假手術(shù)組小鼠肌肉蛋白降解率的差異不顯著(P0.05),而ROCK1~(-/-)CKD組小鼠的肌肉蛋白降解率相較于ROCK1~(+/+)CKD組顯著下降(P0.05)。對(duì)比于ROCK1~(+/+)CKD組,Atrogin-1和MuRF-1的mRNA水平在ROCK1~(-/-)CKD組小鼠中顯著降低(P0.01),而該組的Akt活性較高,PTEN活性較弱(P0.01)。推測(cè)小鼠CKD時(shí)激活ROCK1,繼而激活PTEN,引起Akt活性下降,而ROCK1基因敲除可抑制該現(xiàn)象。4、激活的ROCK1通過(guò)PTEN抑制Akt的活性:C2C12細(xì)胞用Caspase-3激活ROCK1后PTEN活性顯著升高(P0.01),Akt活性顯著下降。Fasudil可抑制PTEN活性(P0.05),促進(jìn)Akt激活。推測(cè)激活的ROCK1升高了PTEN的活性從而抑制Akt的活性。5、ROCK1抑制劑法舒地爾可延緩CKD小鼠的肌肉萎縮:CKD組小鼠的肌力較對(duì)照組顯著下降,法舒地爾則可改善小鼠CKD引起的肌力降低(P0.05)。脛骨前肌、趾長(zhǎng)伸肌和比目魚(yú)肌稱重可得,CKD明顯降低了小鼠的肌肉重量,該癥狀經(jīng)法舒地爾干預(yù)后可得緩解(P0.05),體質(zhì)量經(jīng)法舒地爾干預(yù)后有所回升(P0.05)。法舒地爾可增加CKD小鼠肌纖維橫截面積(P0.05),使肌纖維橫截面積分布率較CKD組右移。與此同時(shí),法舒地爾干預(yù)后,磷酸化Akt的水平較CKD組顯著回升(P0.05),Atrogin-1和MuRF-1 mRNA表達(dá)下降(P0.01)。由此可得ROCK1抑制劑對(duì)CKD所致肌肉萎縮的治療作用。結(jié)論:1、慢性腎臟病時(shí)ROCK1的激活介導(dǎo)了PTEN活化,抑制Akt的活性從而增加Atrogin-1和MuRF-1的表達(dá),促進(jìn)肌肉萎縮。2、法舒地爾可延緩慢性腎臟病所致的肌肉萎縮,為臨床治療提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：慢性腎臟病 ROCK1 肌肉萎縮 法舒地爾
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 中英文縮略詞對(duì)照表9-10
• 前言10-14
• 實(shí)驗(yàn)裝置與方法14-20
• 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞14-15
• 二、實(shí)驗(yàn)器材與方法15-19
• 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19-20
• 結(jié)果20-25
• 一、CKD抑制PI3K的活性但AKT活性下降更為顯著，且PTEN被激活20-21
• 二、ROCK1在CKD小鼠的骨骼肌中被激活21-22
• 三、ROCK1全身敲除可拮抗CKD導(dǎo)致的肌肉萎縮22-23
• 四、激活的ROCK1通過(guò)PTEN抑制AKT的活性23-24
• 五、ROCK1抑制劑法舒地爾可延緩CKD小鼠的肌肉萎縮24-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-33
• 綜述 慢性腎臟病與肌肉萎縮33-48
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 在讀期間已發(fā)表論文48-49
• 致謝49

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3 張明;孫曉川;;法舒地爾的藥理作用及其臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年04期

4 張愛(ài)華;全正翔;劉福中;;法舒地爾對(duì)急性缺血性腦卒中患者血液流變學(xué)的影響[J];中南藥學(xué);2008年03期

5 趙克勤;夏友華;嚴(yán)忠文;周學(xué)海;;法舒地爾治療急性缺血性腦卒中的臨床觀察[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2009年06期

6 崔學(xué)軍;楊少輝;宋洪波;邵建芳;;法舒地爾治療急性缺血性腦血管病60例[J];中國(guó)新藥與臨床雜志;2009年04期

7 張永珍;王軍;李海峰;;法舒地爾治療椎基底動(dòng)脈供血不足性眩暈[J];中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2009年17期

8 林福軍;陳玉蘭;;法舒地爾對(duì)急性動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死的療效及對(duì)血清CRP的影響[J];中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析;2009年12期

9 陳鳳慧;肖麗萍;繳克華;;法舒地爾治療后循環(huán)供血不足的療效觀察[J];河北醫(yī)藥;2010年07期

10 武多嬌;張怡;高平進(jìn);朱鼎良;;法舒地爾抗動(dòng)脈粥樣硬化作用及其機(jī)制[J];中國(guó)臨床藥學(xué)雜志;2010年02期

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1 葉紅偉;高琴;王曉梅;康品方;于影;李正紅;;乙醛脫氫酶2在法舒地爾心肌保護(hù)中的作用探討[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2011年

2 趙青;;法舒地爾臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

3 李琴;黃先菊;郭蓮軍;;甲磺酸法舒地爾對(duì)局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

4 章楊龍;聶福根;;法舒地爾對(duì)壓力超負(fù)荷性大鼠左室重構(gòu)的影響[A];江西省第四次中西醫(yī)結(jié)合心血管學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

5 姜純國(guó);黃慧;劉佳;王艷勛;徐作軍;;法舒地爾對(duì)肺纖維化的保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

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7 張子新;余陸嬌;張立敏;李莎;;法舒地爾對(duì)糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的心臟保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)心血管病學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2013年

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2 瞿星光;法舒地爾對(duì)內(nèi)毒素引起的急性腎損傷大鼠影響及機(jī)制[D];武漢大學(xué);2015年

3 姜純國(guó);法舒地爾對(duì)肺纖維化的保護(hù)作用和吡非尼酮治療肺纖維化的副作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 劉愛(ài)軍;法舒地爾對(duì)PDGF誘導(dǎo)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

5 王娜;RhoA/ROCK信號(hào)通路在心肌肥厚和心力衰竭中的作用及法舒地爾的干預(yù)效應(yīng)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

6 馬志紅;Rho激酶信號(hào)通路對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響及法舒地爾的心血管保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

7 劉煥龍;ROCK抑制劑法舒地爾對(duì)脂多糖致大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

8 鄧林;Rho激酶抑制劑法舒地爾抑制人腦膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2010年

9 李琴;甲磺酸法舒地爾Rho激酶抑制劑對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

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1 李世云;法舒地爾聯(lián)合羅格列酮對(duì)脂多糖誘導(dǎo)人冠脈內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1和VCAM-1表達(dá)的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

2 馬宗侖;Rho激酶抑制劑法舒地爾對(duì)微血管心絞痛患者的療效觀察[D];青島大學(xué);2016年

3 李艷;法舒地爾對(duì)UUO大鼠模型IKKβ、IκBα、NF-κBP65及Ⅲ型膠原表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

4 余日臻;ROCK1介導(dǎo)慢性腎臟病引起的蛋白質(zhì)能量消耗發(fā)病機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

5 江金W，

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