本文關(guān)鍵詞：系膜細(xì)胞活化模型的建立及其對(duì)單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討人腎臟系膜細(xì)胞(Human mesangial cells, HMCs)的活化最佳條件和HMCs活化的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志,以及活化后的HMCs對(duì)人單核巨噬細(xì)胞(Human monocyte macrophages cells, HMMCs)產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)。方法：1.人HMCs的活化研究及活化后的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志研究：用lOng/ml、 20ng/ml、50ng/ml的重組人血小板源性生長(zhǎng)因子(Recombinant Human Platelet Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB)分別刺激HMCs 2h,6h,12h.24h 48h. 72h,實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)技術(shù)(Real-time Quantitative PCR Detecting System, qPCR)尋找并確定最佳刺激濃度和時(shí)間；細(xì)胞計(jì)數(shù)(Cell Counting K-8, CCK-8)檢測(cè)HMCs活化后的增殖能力；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)(Cell Scratch Test)測(cè)定HMCs活化后的趨化及遷徙能力；免疫熒光染色技術(shù)(Immunofluorescence Staining)檢測(cè)活化后的HMCs的Desmin、a-SMA、PDGFR-β、Transgelin Tensin表達(dá)情況,并利用qPCR技術(shù)檢測(cè)HMCs處于活化高表達(dá)狀態(tài)下可以持續(xù)的時(shí)間。2.活化的人腎系膜細(xì)胞對(duì)人單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)：用qPCR方法檢測(cè)PDGF-BB刺激后的HMCs是否可以分泌誘導(dǎo)HMMCs活化的細(xì)胞因子以及有無(wú)分泌HMMCs活化的分子標(biāo)志；將PDGF-BB誘導(dǎo)的的HMCs與HMMCs置于Transwell系統(tǒng)中進(jìn)行共培養(yǎng),選取2h、6h、12h、24h、48h、72h時(shí)間節(jié)點(diǎn),研究活化后的HMCs對(duì)HMMCs的生物學(xué)效應(yīng)；CCK-8檢測(cè)共培養(yǎng)后HMMCs的增殖能力,細(xì)胞劃傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)共培養(yǎng)后HMMCs的趨化和遷徙能力。結(jié)果：1.人HMCs的活化以及活化后的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志：(1) qPCR技術(shù)檢測(cè)不同濃度刺激下的不同時(shí)間點(diǎn)的HMCs活化后的細(xì)胞因子IL-1、IL-6、CCL-2、 PDGFR-β、Transgelin、Tensin mRNA表達(dá)情況結(jié)果顯示：當(dāng)使用濃度為20ng/ml的PDGF-BB刺激HMCs時(shí),效果最為明顯,且于刺激48h的時(shí)候觀察細(xì)胞因子分泌情況效果最佳并且最為顯著,72h時(shí)觀察反而有一個(gè)回落趨勢(shì),說(shuō)明HMCs活化于48h的時(shí)候出現(xiàn)頂峰。(2)不同濃度的PDGF-BB刺激HMCs后細(xì)胞的增殖能力：細(xì)胞計(jì)數(shù)和CCK-8均顯示：加入PDGF-BB刺激的HMCs相比較于空白對(duì)照組,均在20ng/ml濃度的PDGF-BB刺激下增殖最為明顯(p0.05)。(3)活化后的HMCs的的遷徙能力變化：分別于六孔板內(nèi)劃傷20ng/ml的PDGF-BB刺激48h后的HMCs和對(duì)照組,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞最后剩余的傷痕面積明顯少于對(duì)照組,面積計(jì)算有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(4)細(xì)胞活化表型的蛋白質(zhì)學(xué)改變：免疫熒光染色顯示,活化表型Desmin、a-SMA、PDGFR-β、Transgelin Tensin表達(dá)量與對(duì)照組相比均有增強(qiáng),NF-kB的核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)也明顯強(qiáng)于對(duì)照組。(5)HMCs處于活化高表達(dá)狀態(tài)下可以持續(xù)的時(shí)間HMCs于48h的時(shí)候處于活化高表達(dá)的最高峰,以48h為基點(diǎn),qPCR檢測(cè)技術(shù)顯示這種活化狀態(tài)一直到在此之后的48h才逐漸趨于沒(méi)有。2.活化的人腎系膜細(xì)胞與人單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)：(1) PDGF-BB刺激HMCs細(xì)胞可以分泌促使HMMCs活化的細(xì)胞因子TNF和IL-4,而不會(huì)分泌HMMCs活化的分子標(biāo)志CCL-1和CCL-15和CCL-17。(2)活化的HMCs和HMMCs共培養(yǎng)：共培養(yǎng)狀態(tài)下的HMMCs不分泌CCL-17(抑炎型),而會(huì)分泌CCL-15(M1型)和CCL-1(調(diào)節(jié)型)并在24h的時(shí)候達(dá)到最高。(3)與活化的HMCs共培養(yǎng)后的HMMCs細(xì)胞的增殖能力和遷徙趨化能力都明顯高于未共培養(yǎng)的HMMCs (P0.05)。結(jié)論：1.PDGF-BB刺激HMCs并可以致其活化的最佳濃度和最佳時(shí)間分別是20ng/ml和刺激48h,在此條件下,HMCs的增殖和遷徙能力都達(dá)到最高點(diǎn)(p0.05),免疫熒光也表明各種分子標(biāo)志和細(xì)胞表型都在此時(shí)表達(dá)量最高。此種活化狀態(tài)在逐漸變?nèi)醯那闆r下仍然可以維持大約48h,充足用于刺激并活化HMMCs。2.活化的HMCs可以分泌誘導(dǎo)HMMCs活化的細(xì)胞因子而不會(huì)分泌HMMCs活化的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志,可以排除后期共培養(yǎng)時(shí)的假陽(yáng)性結(jié)果。共培養(yǎng)24h HMMCs的細(xì)胞表型表達(dá)量最高,活化后的HMCs只會(huì)刺激HMMCs產(chǎn)生M1型巨噬細(xì)胞(促炎)和調(diào)節(jié)型巨噬細(xì)胞,而不會(huì)刺激HMMCs產(chǎn)生M2型巨噬細(xì)胞(抑炎)。
【關(guān)鍵詞】：人 系膜細(xì)胞 單核巨噬細(xì)胞 活化 交互作用
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分 系膜細(xì)胞活化模型的建立12-40
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-32
• 討論32-35
• 小結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 第二部分 活化的人腎系膜細(xì)胞對(duì)人單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)40-60
• 前言40
• 材料與方法40-46
• 結(jié)果46-54
• 討論54-56
• 小結(jié)56-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 文獻(xiàn)綜述60-75
• 參考文獻(xiàn)68-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文75-76
• 致謝76

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：系膜細(xì)胞活化模型的建立及其對(duì)單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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