本文關(guān)鍵詞：前列腺癌特異性雙功能MR分子探針的構(gòu)建及其體外活性鑒定的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1.培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞系PC-3和LNCAP,并分別檢測兩種細(xì)胞表面HER2抗原的表達(dá)情況;2.構(gòu)建p QE30-t BID重組表達(dá)載體,表達(dá)并純化目的蛋白t BID;3.構(gòu)建前列腺癌特異性雙功能MR分子探針t BID-Gold Mag-Anti HER2,分別檢測探針與兩種前列腺癌細(xì)胞結(jié)合的特異性及其對前列腺癌細(xì)胞靶向殺傷的能力,并評估其MR特異性成像的可行性。方法:1.常規(guī)培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞系PC-3和LNCAP,在光鏡下分別觀察兩種細(xì)胞的形態(tài)以及生長狀況。用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測兩種細(xì)胞表面HER2的表達(dá)情況。2.根據(jù)t BID的基因序列設(shè)計(jì)特異性上、下游引物,利用普通PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因t BID,經(jīng)過雙酶切、連接以及轉(zhuǎn)化構(gòu)建重組表達(dá)載體p QE30-t BID,將其轉(zhuǎn)化到表達(dá)載體BL21(DE3)中,加入IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),行SDS-PAGE凝膠電泳觀察蛋白t BID的表達(dá)情況,鎳親和層析柱純化目的蛋白后用Western Blot鑒定分析。3.利用金磁納米微粒中膠體金可以與蛋白質(zhì)類物質(zhì)相互黏附結(jié)合的特性,分別將抗HER2抗體和活性促凋亡蛋白t BID偶聯(lián)在其表面,構(gòu)建分子探針t BID-Gold Mag-Anti HER2。4.利用流式細(xì)胞術(shù)和掃描電鏡分別驗(yàn)證分子探針t BID-Gold Mag-Anti HER2與兩種前列腺癌細(xì)胞PC-3和LNCAP靶向結(jié)合的能力,并采用細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測分子探針對兩種前列腺癌細(xì)胞的靶向促凋亡作用。5.將兩種前列腺癌細(xì)胞分別與分子探針t BID-Gold Mag-Anti HER2作用后行MRI掃描,觀察各細(xì)胞的MRI信號,并分別測量其信號強(qiáng)度,用方差分析比較各組間的信號差異,P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,從而探討該探針應(yīng)用于HER2陽性的前列腺癌細(xì)胞MR成像的價(jià)值。結(jié)果:1.在光鏡下觀察人前列腺癌PC-3細(xì)胞呈卵圓形貼壁生長;LNCAP細(xì)胞呈梭形貼壁生長;PC-3細(xì)胞的生長速度明顯快于LNCAP細(xì)胞。2.普通PCR技術(shù)擴(kuò)增后得到分子大小約411 bp的目的基因片段,行菌液PCR鑒定以及重組質(zhì)粒的酶切鑒定,表明重組質(zhì)粒中已含有t BID的基因序列,重組表達(dá)載體p QE30-t BID構(gòu)建成功。將其轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)后,對誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的大腸桿菌的裂解上清樣品進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳分析以及考馬斯亮藍(lán)染色分析,結(jié)果顯示:與未誘導(dǎo)組相比,IPTG誘導(dǎo)后轉(zhuǎn)化入p QE30-t BID的大腸桿菌在約15 k D處可見與預(yù)期分子量大小一致的蛋白條帶出現(xiàn)。Western Blot鑒定證實(shí)該蛋白即為目的蛋白t BID。3.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示PC-3細(xì)胞HER2表達(dá)為陽性,而LNCAP細(xì)胞HER2表達(dá)為陰性。4.將抗HER2抗體與t BID蛋白分別與金磁納米微粒偶聯(lián),構(gòu)建分子探針t BID-Gold Mag-Anti HER2。流式細(xì)胞術(shù)和掃描電鏡結(jié)果均表明該分子探針可與前列腺癌PC-3細(xì)胞特異性結(jié)合,而不能與LNCAP細(xì)胞結(jié)合。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示探針可與PC-3細(xì)胞特異性結(jié)合,并使其發(fā)生早期凋亡,而不能與LNCAP細(xì)胞特異性結(jié)合,且對其無明顯促凋亡作用。5.將前列腺癌PC-3細(xì)胞和LNCAP細(xì)胞分別與分子探針作用后行MRI掃描,T2WI顯示PC-3細(xì)胞與分子探針作用組的信號強(qiáng)度明顯減低,而其余各組的信號強(qiáng)度均無明顯減低。PC-3細(xì)胞與分子探針作用組與其余各組之間的信號強(qiáng)度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其余各組彼此之間的信號強(qiáng)度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:本課題以前列腺癌PC-3細(xì)胞表面特異性高表達(dá)的HER2為靶點(diǎn),以抗HER2抗體為親和組件,以活性促凋亡蛋白t BID為殺傷組件,以金磁納米微粒為MR信號組件,成功構(gòu)建雙功能MR分子探針t BID-Gold Mag-Anti HER2。經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該探針可特異性靶向前列腺癌PC-3細(xì)胞并促使其凋亡。與探針靶向作用后行MRI掃描,PC-3細(xì)胞可在MR上特異性成像。由此,本課題研究構(gòu)建的MR雙功能分子探針有望為前列腺癌的特異性診斷與靶向性治療的研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 分子影像學(xué) 人表皮生長因子受體2 細(xì)胞凋亡 截短型BID 原核表達(dá) 金磁納米微粒
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25;R445.2
【目錄】：

• 縮略語表6-9
• 中文摘要9-12
• 英文摘要12-16
• 前言16-19
• 文獻(xiàn)回顧19-33
• 實(shí)驗(yàn)一 前列腺癌細(xì)胞系的培養(yǎng)及其HER2的表達(dá)33-40
• 1 材料33-35
• 1.1 細(xì)胞系33
• 1.2 主要試劑33-34
• 1.3 主要儀器設(shè)備34
• 1.4 主要溶液的配制34-35
• 2 方法35-37
• 2.1 前列腺癌細(xì)胞系PC-3 及LNCAP的培養(yǎng)35-36
• 2.2 前列腺癌PC-3 細(xì)胞和LNCAP細(xì)胞HER2的表達(dá)36-37
• 3 結(jié)果37-38
• 3.1 前列腺癌細(xì)胞系PC-3 及LNCAP的培養(yǎng)與觀察37
• 3.2 前列腺癌PC-3 細(xì)胞和LNCAP細(xì)胞HER2的表達(dá)情況37-38
• 4 討論38-40
• 實(shí)驗(yàn)二 活性促凋亡蛋白tBID的表達(dá)和純化40-53
• 1 材料40-43
• 1.1 菌種及質(zhì)粒40
• 1.2 主要試劑40-41
• 1.3 主要儀器設(shè)備41-42
• 1.4 主要溶液的配制42-43
• 2 方法43-47
• 2.1 細(xì)菌感受態(tài)的制備43-44
• 2.2 引物的設(shè)計(jì)與合成44
• 2.3 目的基因tBID的PCR擴(kuò)增44-45
• 2.4 pQE30-tBID重組質(zhì)粒的構(gòu)建45-46
• 2.5 目的蛋白tBID的誘導(dǎo)表達(dá)46-47
• 2.6 目的蛋白tBID的純化47
• 3 結(jié)果47-51
• 3.1 目的基因tBID PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定47-48
• 3.2 pQE30-tBID重組質(zhì)粒的構(gòu)建48-50
• 3.3 目的蛋白tBID的誘導(dǎo)表達(dá)及純化50-51
• 4 討論51-53
• 實(shí)驗(yàn)三 tBID-GoldMag-Anti HER2分子探針的構(gòu)建及其對前列腺癌細(xì)胞的靶向性殺傷和MR特異性成像53-65
• 1 材料53-55
• 1.1 細(xì)胞系53
• 1.2 主要試劑53-54
• 1.3 主要儀器設(shè)備54
• 1.4 主要溶液的配制54-55
• 2 方法55-59
• 2.1 tBID-GoldMag-Anti HER2分子探針的構(gòu)建55-56
• 2.2 tBID-GoldMag-Anti HER2與前列腺癌細(xì)胞的特異性結(jié)合56-57
• 2.3 tBID-GoldMag-Anti HER2促前列腺癌細(xì)胞凋亡57-58
• 2.4 tBID-GoldMag-Anti HER2對前列腺癌細(xì)胞的特異性MR成像58-59
• 3 結(jié)果59-63
• 3.1 tBID-GoldMag-Anti HER2與前列腺癌細(xì)胞的特異性結(jié)合59-61
• 3.2 tBID-GoldMag-Anti HER2促前列腺癌細(xì)胞凋亡61-62
• 3.3 tBID-GoldMag-Anti HER2對前列腺癌細(xì)胞的特異性MR成像62-63
• 4 討論63-65
• 小結(jié)65-66
• 參考文獻(xiàn)66-78
• 個(gè)人簡歷和研究成果78-80
• 致謝80-81

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1 李緒斌;杜湘珂;霍天龍;劉霞;張森;;乳腺癌特異性磁共振分子探針的制備及體外實(shí)驗(yàn)[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年02期

2 袁洪衛(wèi);毒蕈堿乙酰膽堿受體顯像的分子探針[J];國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊);1996年03期

3 仇文衛(wèi);湯杰;;化學(xué)小分子探針在藥物發(fā)現(xiàn)中的應(yīng)用[J];化學(xué)教學(xué);2009年09期

4 劉杰昊;楊曉峰;王瑋;閆三華;羅俊茜;張自強(qiáng);;腫瘤靶向特異性光學(xué)分子探針的結(jié)構(gòu)與設(shè)計(jì)策略[J];中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2014年06期

5 劉萌;王榮福;張春麗;閆平;于明明;郭鳳琴;;脂質(zhì)體介導(dǎo)對反義分子探針腫瘤靶向作用影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];腫瘤學(xué)雜志;2008年08期

6 鹿蓉;姚振威;;分子探針在疾病診療中的應(yīng)用與展望[J];上海醫(yī)藥;2014年13期

7 杜紹財(cái),陳蘋,劉金祥,陶其敏;生物素標(biāo)記HBVDNA分子探針臨床應(yīng)用研究[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1989年05期

8 楊芳;吉民;顧寧;;以納米分子探針為基礎(chǔ)的分子影像技術(shù)在腫瘤早期檢測中的應(yīng)用[J];中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2009年02期

9 陳婧;江新青;;腫瘤靶向性MR分子探針的標(biāo)記及研究進(jìn)展[J];國際醫(yī)學(xué)放射學(xué)雜志;2011年06期

10 李貴平;黃寶丹;汪兵;張輝;郭琳瑯;;肺癌特異性靶向小分子多肽的核素分子探針的制備[J];放射免疫學(xué)雜志;2011年04期

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1 沈偉;劉國玉;史冠峰;路新泉;;對分子探針的認(rèn)識[A];2009中華醫(yī)學(xué)會影像技術(shù)分會第十七次全國學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

2 樊蓉;韋偉;賈少微;;新型分子探針~(99)Tc~m-SQ168-TPPTS動物體內(nèi)的生物學(xué)行為[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2011年

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5 王榮福;劉萌;張春麗;閆平;于明明;郭鳳琴;;脂質(zhì)體對反義寡核苷酸分子探針體內(nèi)外特異識別靶細(xì)胞組織不同影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];首屆全國腫瘤核醫(yī)學(xué)新技術(shù)研討會論文集[C];2007年

6 葛介超;趙文文;張洪艷;汪鵬飛;;基于硅量子點(diǎn)的光學(xué)分子探針的設(shè)計(jì)及應(yīng)用研究[A];中國化學(xué)會第27屆學(xué)術(shù)年會第04分會場摘要集[C];2010年

7 唐敏;曾文彬;曹亞;;新型丹磺酰小分子探針檢測腫瘤細(xì)胞凋亡的初步研究[A];中國病理生理學(xué)會第十三屆腫瘤、第十四屆免疫專業(yè)委員會學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

8 李貴平;黃寶丹;汪兵;;肺癌特異性靶向小分子多肽的核素分子探針制備[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2011年

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1 麗文;用分子探針探查阿爾茨海默病[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

2 衣曉峰 金鷗;分子探針為乳癌基因描繪“顯像圖”[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

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1 劉沛;光學(xué)核酸分子探針信號放大策略用于生化分析的研究[D];湖南大學(xué);2014年

2 王麗娟;構(gòu)建和鑒定靶向穿膜的多功能分子探針iCREKA[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

3 田穎;~(18)F標(biāo)記預(yù)設(shè)計(jì)錨蛋白重復(fù)蛋白靶向HER2的PET顯像研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

4 南豆豆;靶向于beta-淀粉樣蛋白沉積的分子探針的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

5 孫延龍;基于活性的化學(xué)小分子探針的設(shè)計(jì)與合成及其抗腫瘤活性研究[D];中國海洋大學(xué);2011年

6 周殿明;核酸分子探針與生物傳感新方法的研究[D];湖南大學(xué);2014年

7 羅湘建;高等真菌來源化學(xué)小分子探針Grifolin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2010年

8 朱亮;以CXCR4為靶點(diǎn)的磁共振分子探針的構(gòu)建及惡性腫瘤分子靶向成像研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

9 祁世波;親和體分子探針的制備及其應(yīng)用于腫瘤影像的研究[D];天津大學(xué);2012年

10 徐健;胃癌血管生成分子探針的構(gòu)建及活體MR成像研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

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1 沈靜;基于MMP-2為靶點(diǎn)的腦膠質(zhì)瘤磁共振分子探針的構(gòu)建及其生物學(xué)檢測[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 黃海嘯;脂肪前體細(xì)胞褐色分化的小分子探針[D];南京大學(xué);2016年

3 黃偉耀;點(diǎn)擊化學(xué)~(18)氟標(biāo)記腫瘤靶向肽T7正電子分子探針合成及其初步評價(jià)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 吳曉鳳;RNAi技術(shù)應(yīng)用于制備診治卵巢癌的MR成像分子探針[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：463787