本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)腎癌細(xì)胞的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的檢測(cè)NLRP3在腎癌組織和相應(yīng)的正常腎組織中的蛋白表達(dá)水平,探討白藜蘆醇(RSV)對(duì)腎癌786-O細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的作用以及NLRP3炎癥小體信號(hào)通路和去乙酰化酶Sirt1在此過程中的作用。方法1.Western blot方法檢測(cè)腎癌組織和癌旁正常組織中NLRP3的蛋白表達(dá)水平。2.將786-O細(xì)胞隨機(jī)分為CON對(duì)照組、RSV處理組,將RSV處理組分別用25μM、50μM、100μM RSV處理12h、24h、48h,用CCK-8的方法檢測(cè)RSV處理后786-O細(xì)胞的增殖情況;倒置顯微鏡下觀察經(jīng)過50μM RSV處理后,786-O腎癌細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上的改變;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)50μM RSV對(duì)786-O腎癌細(xì)胞的遷移能力的影響;Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)50μM RSV對(duì)786-O腎癌細(xì)胞的侵襲能力的影響;AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)50μM RSV對(duì)786-O腎癌細(xì)胞凋亡情況的影響;Western blot檢測(cè)50μM RSV作用于786-O腎癌細(xì)胞12h、24h、48h后凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(dá)情況。3.將腎癌786-O細(xì)胞隨機(jī)分為CON對(duì)照組、LPS+ATP處理組、LPS+ATP+RSV處理組(RSV處理組),除CON對(duì)照組之外,另兩組均用LPS處理786-O細(xì)胞5.5h,隨后加入ATP處理0.5h,RSV處理組于LPS加入前使用50μM RSV預(yù)處理腎癌786-O細(xì)胞0.5h,且全程含有RSV。利用Real-time PCR的方法檢測(cè)LPS處理后各組786-O細(xì)胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、Sirt1的RNA表達(dá)水平。同時(shí),用小干擾RNA沉默RSV處理組786-O細(xì)胞中Sirt1基因,檢測(cè)沉默Sirt1基因以后后786-O細(xì)胞中NLRP3、Sirt1的RNA表達(dá)情況。結(jié)果1.與對(duì)照組相比,25μM、50μM、100μM RSV處理786-O細(xì)胞12h、24h、48h后,細(xì)胞的增殖能力均顯著下降,其中25μM RSV處理12h、24h、48h后的細(xì)胞增殖的抑制率分別為10.22±4.02%、23.81±5.19%、31.45±6.15%,50μM RSV處理12h、24h、48h后的細(xì)胞增殖的抑制率分別為19.05±4.89%、44.85±3.38%、52.54±6.55%,100μM RSV處理12h、24h、48h后的細(xì)胞增殖的抑制率分別為27.47±4.84%、53.55±13.03%、67.02±10.78%。根據(jù)IC50最終選擇50μM RSV作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的藥物濃度。50μM RSV處理后,在倒置顯微鏡下可以觀察到786-O細(xì)胞的細(xì)胞核濃集,細(xì)胞形狀由長(zhǎng)梭形或者不規(guī)則形變?yōu)樾A形,細(xì)胞邊緣由清晰變模糊,生長(zhǎng)狀態(tài)變差。與對(duì)照組相比,相同時(shí)間內(nèi)50μM RSV處理組細(xì)胞遷移的距離顯著小于對(duì)照組細(xì)胞遷移的距離;50μM RSV處理后,通過基質(zhì)膠到達(dá)微孔膜底層的細(xì)胞數(shù)目明顯減少,與對(duì)照組的39.23±3.64相比,RSV處理后微孔膜底層的細(xì)胞數(shù)目?jī)H為11.21±4.19,兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);50μM RSV處理后786-O細(xì)胞凋亡的程度顯著增加,對(duì)照組細(xì)胞凋亡率(UR象限+LR象限)較低,為3.56%,其中早期凋亡率2.08%,晚期凋亡率1.46%,RSV處理組細(xì)胞凋亡率(UR象限+LR象限)明顯升高,可達(dá)15.27%,其中早期凋亡率3.74%,晚期凋亡率11.53%;50μM RSV處理12h、24h、48h后凋亡相關(guān)蛋白Bax的蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比升高,并且隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)786-O細(xì)胞內(nèi)的Bax的蛋白表達(dá)水平逐漸增加,其中處理48h的蛋白表達(dá)量升高最明顯。2.與癌旁正常組織相比,腎癌組織中的NLRP3蛋白表達(dá)水平明顯增高(P0.05)。體外實(shí)驗(yàn)中與對(duì)照組相比,LPS+ATP處理組NLRP3、Caspase-1、IL-1β的mRNA表達(dá)水平顯著升高,用RSV預(yù)處理后,NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表達(dá)均被抑制,且與LPS+ATP處理組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),此外Sirt1的蛋白表達(dá)水平升高(P0.01);同時(shí)凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(dá)水平升高,說明786-O細(xì)胞凋亡增加;沉默Sirt1基因后,RSV降低786-O細(xì)胞內(nèi)NLRP3的作用消失,與RSV處理組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),同時(shí)Bax的表達(dá)水平與RSV處理組相比顯著下降,說明沉默Sirt1對(duì)癌細(xì)胞具有保護(hù)作用。結(jié)論綜上所述,RSV處理后腎癌786-O細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力受到明顯抑制,癌細(xì)胞的凋亡增加。在RSV促凋亡的過程中,NLRP3炎癥小體信號(hào)通路及其下游分子起重要作用,同時(shí),去乙�；窼irt1參與了NLRP3炎癥小體的活化過程,NLRP3和Sirt1在RSV促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡過程中的作用值得進(jìn)一步探討。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 腎癌 炎癥 NLRP3 Sirt1
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說明10-11
• 前言11-17
• 研究現(xiàn)狀、成果11-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、白藜蘆醇對(duì)腎癌 786-O細(xì)胞的影響17-34
• 1.1 對(duì)象和方法17-26
• 1.1.1 細(xì)胞系17
• 1.1.2 常規(guī)試劑和耗材17-18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)用抗體18
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)所需主要試劑以及主要溶液的配制18-21
• 1.1.5 主要儀器設(shè)備21
• 1.1.6 實(shí)驗(yàn)方法21-26
• 1.2 結(jié)果26-31
• 1.2.1 CCK-8 法檢測(cè)RSV對(duì) 786-O細(xì)胞增殖的影響26-27
• 1.2.2 白藜蘆醇對(duì) 786-O細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響27-28
• 1.2.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì) 786-O細(xì)胞遷移能力的影響28-29
• 1.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì) 786-O細(xì)胞侵襲能力的影響29-30
• 1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì) 786-O細(xì)胞凋亡的影響30
• 1.2.6 白藜蘆醇對(duì) 786-O細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)的影響30-31
• 1.3 討論31-33
• 1.4 小結(jié)33-34
• 二、白藜蘆醇對(duì)腎癌 786-O細(xì)胞作用機(jī)制的探討34-50
• 2.1 對(duì)象和方法34-41
• 2.1.1 組織以及細(xì)胞系34
• 2.1.2 常規(guī)試劑和耗材34-35
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)用抗體35
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需主要試劑以及主要溶液的配制35-38
• 2.1.5 主要儀器設(shè)備38
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)方法38-41
• 2.2 結(jié)果41-46
• 2.2.1 腎癌組織與癌旁正常組織中NLRP3的蛋白表達(dá)水平41-42
• 2.2.2 LPS和ATP共處理 786-O細(xì)胞引發(fā)炎癥模型42-43
• 2.2.3 白藜蘆醇對(duì) 786-O細(xì)胞炎癥模型中相關(guān)分子表達(dá)水平的影響43-44
• 2.2.4 白藜蘆醇對(duì) 786-O細(xì)胞炎癥模型Sirt1蛋白表達(dá)水平的影響44
• 2.2.5 沉默Sirt1基因后白藜蘆醇對(duì) 786-O炎癥模型NLRP3蛋白表達(dá)水平的影響44-46
• 2.3 討論46-49
• 2.4 小結(jié)49-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-60
• 綜述 NLRP3炎癥小體與腫瘤發(fā)生關(guān)系的研究進(jìn)展60-67
• 綜述參考文獻(xiàn)63-67
• 致謝67-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷68

  本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)腎癌細(xì)胞的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：445820