發(fā)布時(shí)間：2017-06-12 06:08

  本文關(guān)鍵詞：精原干細(xì)胞動(dòng)態(tài)標(biāo)記物的初步篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：精原干細(xì)胞移植對(duì)男性不育的治療具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值,尤其對(duì)青春期前接受大劑量化療致生精功能嚴(yán)重受損的非梗阻性無(wú)精子癥患者,具有獨(dú)特的臨床應(yīng)用價(jià)值。只要在非梗阻性無(wú)精子癥患者睪丸內(nèi)找到精原干細(xì)胞,就有可能促使其增殖分化獲得精子;或通過(guò)特異性標(biāo)志物分選,體外獲得純度較高的精原干細(xì)胞用于增殖培養(yǎng)或移植。然而,如何確定所獲得細(xì)胞是精原干細(xì)胞,成為此項(xiàng)工作的首要條件。精原干細(xì)胞在增殖和分化的過(guò)程中細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)會(huì)表達(dá)許多蛋白質(zhì),這些蛋白質(zhì)如果有較好的特異性和敏感性,作為精原干細(xì)胞標(biāo)志物,將對(duì)分離及鑒定精原干細(xì)胞發(fā)揮重要作用。我們將不同年齡階段小鼠精原干細(xì)胞采用復(fù)合酶消化、免疫磁珠分選技術(shù)分離純化出后,通過(guò)雙向凝膠電泳及蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)動(dòng)態(tài)觀測(cè)各年齡階段精原干細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)的差異,運(yùn)用生物信息學(xué)蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選并確定差異性蛋白質(zhì)或發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)。目的:利用i TRAQ蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)觀測(cè)各年齡階段精原干細(xì)胞(SSCs)蛋白的表達(dá),進(jìn)一步分析SSCs標(biāo)志物表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,運(yùn)用生物信息學(xué)蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選并發(fā)現(xiàn)新的標(biāo)志物。方法:以健康雄性C57BL/6小鼠為研究對(duì)象,按照年齡段不同分為8組,無(wú)菌提取各組小鼠睪丸組織,采用復(fù)合酶消化、免疫磁珠分選的方法純化SSCs后提取蛋白,利用雙向電泳及i TRAQ標(biāo)記蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)并結(jié)合蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)各組蛋白質(zhì)進(jìn)行分析鑒定。結(jié)果:質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)共得到譜圖248510張,通過(guò)Mascot軟件進(jìn)行分析,共鑒定到1132種蛋白。以蛋白豐度差異倍數(shù)達(dá)到1.2倍以上,且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)P?0.05視為存在差異性蛋白,8組共檢測(cè)到差異蛋白298種。鑒定到目前已知的SSCs標(biāo)志物9種(PCNA、GFRA1、CDH1、Annexin A7、UCHL1、VASA、CD49f、CD29、PLZf),通過(guò)各組對(duì)比獲得在不同年齡段內(nèi)表達(dá)變化趨勢(shì),其中GFRA1、CD49f、CD29在SSCs中的變化趨勢(shì)與以往文獻(xiàn)一致,并篩選出10種蛋白質(zhì)(P63、CD71、CD98、K19、ACE、K18、K15、K17、SH2、SH3)作為SSCs標(biāo)志物進(jìn)一步研究的對(duì)象。結(jié)論:SSCs內(nèi)的蛋白隨著機(jī)體年齡的變化表達(dá)存在差異,i TRAQ蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)可以對(duì)SSCs蛋白質(zhì)組學(xué)信息進(jìn)行分析與比較,獲得各年齡階段差異性表達(dá)蛋白,為進(jìn)一步分析和研究這些差異性蛋白的功能與作用提供了新的方法。
【關(guān)鍵詞】：精原干細(xì)胞 蛋白質(zhì)組學(xué) 生物標(biāo)記物 同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R698.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-18
• 材料與方法18-25
• 結(jié)果25-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 綜述45-57
• 綜述參考文獻(xiàn)52-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 馬良宏;田稼;裴秀英;王燕蓉;李培軍;;應(yīng)用iTRAQ質(zhì)譜分析技術(shù)對(duì)小鼠精原干細(xì)胞標(biāo)志物進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究與篩選[J];中華男科學(xué)雜志;2015年03期

2 王洪;李澤惠;邱學(xué)德;;精原干細(xì)胞標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年07期

3 WANG Fang;LIU Chao;ZHANG Shan-shan;LIU Wei-shuai;HUA Jin-lian;;Transplantation of Goat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells (gMSCs) Help Restore Spermatogenesis in Endogenous Germ Cells-Depleted Mouse Models[J];Journal of Integrative Agriculture;2013年03期

4 王丹;張振韜;施青青;黃曉梅;朱才業(yè);鄭蒙蒙;李偉;徐劍蓉;王克華;李碧春;;雞Stra8基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及亞細(xì)胞定位的研究[J];中國(guó)家禽;2013年08期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 馬良宏;精原干細(xì)胞移植治療因大劑量化療所致不育的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：精原干細(xì)胞動(dòng)態(tài)標(biāo)記物的初步篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：443414