發(fā)布時間：2017-06-10 21:16

  本文關(guān)鍵詞：西羅莫司抑制腎移植后AGEs誘導(dǎo)動脈粥樣硬化形成的作用及其機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)誘導(dǎo)VSMCs向成骨樣細胞表型轉(zhuǎn)分化的相關(guān)分子機制及腎移植術(shù)后西羅莫司對AGEs誘導(dǎo)的VSMCs向成骨樣細胞表型轉(zhuǎn)分化的作用及相關(guān)分子機制。。方法:體外分離和培養(yǎng)原代SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞(VSMCs),進行細胞傳代至第4~6代,采用光學(xué)顯微鏡觀察細胞形態(tài)及間接免疫熒光染色法測定α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達以鑒定細胞是否具有VSMCs特性。取第5代SD大鼠胸主動脈VSMCs為體外實驗對象,用200 mg/L的AGEs或BSA分別作用VSMCs細胞不同時間(0h~12d);此外,部分細胞以2.0ug的pc DNA3.1或整合素鏈激酶(ILK)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24h,或以抗AGE受體(RAGE)抗體預(yù)處理12h后,再予200 mg/L的AGEs或BSA處理9d,收集細胞,用蛋白質(zhì)印跡法檢測SD大鼠胸主動脈VSMCs上α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、骨橋蛋白(OPN)、ILK的表達變化,并以甲-酚酞絡(luò)合酮方法檢測該細胞中鈣離子濃度的變化。同樣進行體外分離和培養(yǎng)SD大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞(VSMCs),以第5代大鼠主動脈VSMCs為體外實驗對象,根據(jù)處理方式的不同將細胞分為:西羅莫司組(西羅莫司處理)、AGEs組(AGEs處理)、西羅莫司+AGEs組(西羅莫司和AGEs共處理)及對照組(溶劑處理)。SD大鼠胸主動脈VSMCs經(jīng)10nm西羅莫司和或200mg/L AGEs處理9d后,收集細胞s,采用蛋白質(zhì)印跡法檢測VSMCs中α-SMA、OPN、堿性磷酸酶(ALP)、增殖細胞核抗原(PCNA)和整合素鏈激酶(ILK)的表達;并以甲-酚酞絡(luò)合酮方法檢測細胞鈣離子濃度。結(jié)果:光學(xué)顯微鏡下顯示第4~6代SD大鼠胸主動脈VSMCs的細胞形態(tài)與原代細胞無明顯差別;間接免疫熒光染色結(jié)果也顯示其α-SMA的表達強度與原代細胞相似。體外實驗結(jié)果表明:AGEs作用后SD大鼠胸主動脈VSMCs中α-SMA的表達呈時間依賴性減少;同時,OPN表達呈時間依賴性增加;且鈣離子濃度也具有AGEs濃度依賴性增加趨勢(P0.05)。此外,與對照組相比,以AGEs處理SD大鼠胸主動脈VSMCs6h后,該細胞中ILK的表達顯著增加,在12h達高峰,24h始開始下降(P0.05);與轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒載體(pc DNA3.1)的SD大鼠胸主動脈VSMCs相比,以野生型ILK質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞上調(diào)ILK表達后,可使該細胞中α-SMA的表達明顯下降;而OPN表達則顯著增加,進一步以AGEs作用此類細胞后,則使α-SMA表達進一步降低,OPN表達進一步增加。而以抗RAGE中和抗體預(yù)處理細胞后,可抑制AGEs誘導(dǎo)的ILK表達增加(P0.05)。我們實驗還顯示AGEs可抑制SD大鼠胸主動脈VSMCs中a-SMA表達;誘導(dǎo)OPN、PCNA和ILK的表達上調(diào)、并使細胞中ALP表達及鈣離子濃度明顯增加(P0.05);而與AGEs組相比,西羅莫司預(yù)處理細胞后則可抑制AGEs介導(dǎo)的上述效應(yīng)(P0.05)。結(jié)論:AGEs可能通過與其受體——RAGE結(jié)合后激活I(lǐng)LK相關(guān)細胞內(nèi)信號通路進而引起VSMCs向成骨樣細胞表型轉(zhuǎn)分化;而西羅莫司可能通過抑制ILK表達進而抑制AGEs誘導(dǎo)的VSMCs發(fā)生向成骨樣細胞表型轉(zhuǎn)分化以及抑制AGEs誘導(dǎo)的VSMCs增殖,從而抑制腎移植術(shù)后動脈粥樣硬化的發(fā)生/進展,并改善腎移植術(shù)后心血管疾病(CVD)的發(fā)生率。
【關(guān)鍵詞】：腎移植術(shù)后 動脈粥樣硬化 晚期糖基化終末產(chǎn)物 大鼠胸主動脈平滑肌細胞 成骨樣細胞 轉(zhuǎn)分化 西羅莫司 整合素鏈激酶
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R699.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 第一部分：晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）誘導(dǎo)VSMCs向成骨樣細胞表型轉(zhuǎn)分化的相關(guān)分子機制研究9-38
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-26
• 結(jié)果26-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-38
• 第二部分：西羅莫司對AGEs誘導(dǎo)的VSMCs向成骨樣細胞表型轉(zhuǎn)分化作用的影響及相關(guān)分子機制研究38-54
• 中文摘要38-39
• 英文摘要39-40
• 前言40-41
• 材料和方法41-43
• 結(jié)果43-49
• 討論49-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-54
• 綜述54-67
• 參考文獻62-67
• 附錄1 縮略語67-69
• 附錄2 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況69-70
• 致謝70

【共引文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：西羅莫司抑制腎移植后AGEs誘導(dǎo)動脈粥樣硬化形成的作用及其機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：439951