發(fā)布時間：2025-01-17 16:50

　　目的:慢性腎臟�。–hroinc kidney disease,CKD）已經(jīng)成為了危害人類健康的全世界公共衛(wèi)生和健康問題。近年來,我國慢性腎臟病發(fā)病率呈現(xiàn)出上升的趨勢。反復(fù)的檢查和治療不僅給患者增加了身體上的痛苦,更是帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)和心理上的壓力,降低了生活質(zhì)量。腎間質(zhì)纖維化是公認(rèn)的慢性腎臟病發(fā)展至終末期腎臟病的標(biāo)志。以往研究已證實(shí),腎小管上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）,是促成腎間質(zhì)纖維化（Renal interstitial fibrosis,RIF）進(jìn)程的重要原因之一。EMT即參與機(jī)體正常的生長,也與很多疾病過程相關(guān),在其中發(fā)揮了重要作用。如胚胎發(fā)育,慢性炎癥疾病,組織重塑,癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移以及多種纖維化疾病。生長抑制因子家族（Inhibitor Of Growth Family Members,INGs）是一組抑癌基因,包括ING1^ING5這5個家族成員,其中生長抑制因子4（Inhibitor Of Growth Family Members,ING4）作為INGs的重要一員,對腫瘤細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :ING4與腎小管間質(zhì)纖維化的關(guān)系研究
    1 前言
    2 實(shí)驗材料與方法
        2.1 實(shí)驗材料
            2.1.1 實(shí)驗動物
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及設(shè)備
            2.1.4 主要試劑的配制
            2.1.5 引物的設(shè)計和合成
        2.2 實(shí)驗方法
            2.2.1 建立動物模型
            2.2.2 HE染色
            2.2.3 Masson染色
            2.2.4 免疫組化染色
            2.2.5 q RT-PCR
            2.2.6 Western blot
            2.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實(shí)驗結(jié)果
        3.1 構(gòu)建大鼠UUO模型
            3.1.1 HE染色檢測大鼠腎組織病理學(xué)變化
            3.1.2 Masson染色檢測大鼠腎組織纖維化情況
        3.2 大鼠UUO模型中EMT參與腎間質(zhì)纖維化
        3.3 腎間質(zhì)纖維化組織中HIF-1α表達(dá)升高,ING4 表達(dá)下降
            3.3.1 免疫組化法檢測大鼠腎組織中的ING4和HIF-1α
            3.3.2 大鼠腎組織中ING4、HIF-1αm RNA轉(zhuǎn)錄水平
            3.3.3 大鼠腎組織中ING4、HIF-1α蛋白表達(dá)水平
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :ING4與低氧誘導(dǎo)的人腎小管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的關(guān)系研究
    1 前言
    2 實(shí)驗材料與方法
        2.1 實(shí)驗材料
            2.1.1 細(xì)胞株
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及設(shè)備
            2.1.4 主要試劑的配制
            2.1.5 引物名稱及序列
            2.1.6 ING4過表達(dá)質(zhì)粒載體及序列
        2.2 實(shí)驗方法
            2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.2.2 細(xì)胞傳代
            2.2.3 細(xì)胞計數(shù)
            2.2.4 細(xì)胞凍存
            2.2.5 MTT實(shí)驗
            2.2.6 免疫熒光染色
            2.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.8 q RT-PCR
            2.2.9 Western blot
            2.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實(shí)驗結(jié)果
        3.1 低氧促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化
            3.1.1 低氧條件下HK2細(xì)胞形態(tài)變化
            3.1.2 MTT檢測細(xì)胞活力的變化
            3.1.3 HK2 細(xì)胞E-cad,N-cad和 vimentin蛋白表達(dá)水平
            3.1.4 免疫熒光檢測HK2 細(xì)胞中N-cad表達(dá)
            3.1.5 HK2 細(xì)胞中collagen I和 collagen IV的 m RNA轉(zhuǎn)錄水平
        3.2 ING4參與低氧誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化
        3.3 過表達(dá)ING4 抑制EMT及腎間質(zhì)纖維化
            3.3.1 ING4過表達(dá)質(zhì)粒效果的驗證
            3.3.2 過表達(dá) ING4 對 HK2 細(xì)胞中 collagen I 和 collagen IV m RNA 水平的影響
            3.3.3 過表達(dá) ING4 對 HK2 細(xì)胞中 E-cad、N-cad 和 vimentin 蛋白表達(dá)的影響
            3.3.4 過表達(dá)ING4對HK2 細(xì)胞中N-cad表達(dá)的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :ING4抑制低氧誘導(dǎo)的腎小管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的機(jī)制研究
    1 前言
    2 實(shí)驗材料與方法
        2.1 實(shí)驗材料
            2.1.1 細(xì)胞株
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及設(shè)備
            2.1.4 主要試劑的配制
            2.1.5 引物名稱及序列
            2.1.6 ING4過表達(dá)質(zhì)粒載體及序列
        2.2 實(shí)驗方法
            2.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.2 細(xì)胞加藥
            2.2.3 免疫熒光染色
            2.2.4 q RT-PCR
            2.2.5 Western blot
            2.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實(shí)驗結(jié)果
        3.1 過表達(dá)ING4對HK2中HIF-1α、Snail表達(dá)的影響
            3.1.1 HK2 細(xì)胞中HIF-1α、Snail的 m RNA轉(zhuǎn)錄水平
            3.1.2 HK2 細(xì)胞中HIF-1α、Snail的蛋白表達(dá)水平
            3.1.3 免疫熒光檢測HK2 細(xì)胞中HIF-1α表達(dá)情況
        3.2 有或無HIF-1α激活劑時,過表達(dá)ING4對HK2 細(xì)胞collagen I和 collagenIV轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3 有或無HIF-1α激活劑時,過表達(dá)ING4 對腎小管EMT的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究自我創(chuàng)新性評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4028284