第一部分正常男性精子中Clusterin的起源和定位 目的：哺乳動(dòng)物精液中的clusterin是一種具有異源二聚體結(jié)構(gòu)的分泌型蛋白，主要由附睪和精囊分泌。當(dāng)前認(rèn)為clusterin主要存在于異常精子表面，與精子活力下降、精子聚集以及男性不育等相關(guān)。然而，關(guān)于人類正常精子中clusterin的相關(guān)研究較少。本實(shí)驗(yàn)旨在系統(tǒng)地研究人類正常精子中clusterin的起源和定位問(wèn)題。 方法：收集8名男性的正常新鮮精液標(biāo)本，采用非連續(xù)密度梯度離心法分離純化出高活力的正常精子。分別采用western免疫印跡法和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)clusterin在正常精子中的表達(dá)和定位；運(yùn)用western免疫印跡法和免疫組化方法研究clusterin在人類睪丸中的分布特點(diǎn)。 結(jié)果：本研究發(fā)現(xiàn)，天然的clusterin定位于正常精子的質(zhì)膜內(nèi)部。它起源于睪丸曲細(xì)精管中的晚期生精細(xì)胞，與分泌型clusterin有著相似的分子量和異源二聚體結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：人類正常精子中的clusterin可能在精子發(fā)生的終末階段由自身合成。Clusterin在正常精子表面不同以往的分布和起源特點(diǎn)表明，與異常精子表面?zhèn)鹘y(tǒng)的分泌型c...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1免疫印跡法檢測(cè)在不同蛋白處理方式下人類精子中clusterin的表達(dá)特點(diǎn)

本：按上述方法提取的疏水膜蛋白和親水性胞質(zhì)蛋白，分別經(jīng)非還原性或還原性上樣緩沖液煮沸后，用免疫印跡法檢測(cè)對(duì)比其表達(dá)特點(diǎn)。如圖所示，還原劑處理后的疏水膜蛋白中檢測(cè)到分子量約為40KDa的clusterin蛋白條帶（圖1，第1泳道），未用還原劑處理的疏水膜蛋白中檢測(cè)到分子量約80KD....

圖2采用免疫熒光染色法檢測(cè)clusterin在人類精子中的定位a-b：經(jīng)分離純化但未滲透化處理的精子，一抗孵育；c-d：經(jīng)分離純化且滲透

子量約為40kDa和80kDa的蛋白條帶（圖1，第7-8泳道）。2.免疫熒光法檢測(cè)clusterin在正常精子中的定位：（1）percoll提純的精子標(biāo)本：如圖2a-b所示，精子膜表面未檢測(cè)到明顯的熒光信號(hào)。經(jīng)滲透化處理后，精子頭部，尤其是頂體后區(qū)出現(xiàn)了明顯的熒光染色（圖2c....

圖3免疫印跡法檢測(cè)人睪丸組織中clusterin蛋白的表達(dá)情況

3．采用免疫印跡法檢測(cè)人睪丸組織中clusterin的表達(dá)：經(jīng)還原劑處理的睪丸蛋白樣品中，通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)到三種分子量的蛋白條帶，分別為40KDa、50KDa以及60KDa（圖3，第1泳道）；未經(jīng)還原劑處理的睪丸蛋白中僅檢測(cè)到分子量分別為80KDa及大于130KDa的蛋白條帶（....

圖4clusterin在人睪丸中定位的免疫組化分析

27圖4clusterin在人睪丸中定位的免疫組化分析a-c：clusterin一抗孵育，紅色箭頭指明了典型的管周肌樣細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、未成熟的精子以及間質(zhì)細(xì)胞；精原細(xì)胞中沒(méi)有陽(yáng)性表達(dá)（綠色箭頭）d：正常IgG替代一抗孵育，作為對(duì)照組。放大倍數(shù)：a為100倍，b和d為....

本文編號(hào)：4026332