第一部分正常男性精子中Clusterin的起源和定位 目的：哺乳動物精液中的clusterin是一種具有異源二聚體結構的分泌型蛋白，主要由附睪和精囊分泌。當前認為clusterin主要存在于異常精子表面，與精子活力下降、精子聚集以及男性不育等相關。然而，關于人類正常精子中clusterin的相關研究較少。本實驗旨在系統(tǒng)地研究人類正常精子中clusterin的起源和定位問題。 方法：收集8名男性的正常新鮮精液標本，采用非連續(xù)密度梯度離心法分離純化出高活力的正常精子。分別采用western免疫印跡法和免疫熒光技術檢測clusterin在正常精子中的表達和定位；運用western免疫印跡法和免疫組化方法研究clusterin在人類睪丸中的分布特點。 結果：本研究發(fā)現(xiàn)，天然的clusterin定位于正常精子的質膜內部。它起源于睪丸曲細精管中的晚期生精細胞，與分泌型clusterin有著相似的分子量和異源二聚體結構。 結論：人類正常精子中的clusterin可能在精子發(fā)生的終末階段由自身合成。Clusterin在正常精子表面不同以往的分布和起源特點表明，與異常精子表面?zhèn)鹘y(tǒng)的分泌型c...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1免疫印跡法檢測在不同蛋白處理方式下人類精子中clusterin的表達特點

本：按上述方法提取的疏水膜蛋白和親水性胞質蛋白，分別經(jīng)非還原性或還原性上樣緩沖液煮沸后，用免疫印跡法檢測對比其表達特點。如圖所示，還原劑處理后的疏水膜蛋白中檢測到分子量約為40KDa的clusterin蛋白條帶（圖1，第1泳道），未用還原劑處理的疏水膜蛋白中檢測到分子量約80KD....

圖2采用免疫熒光染色法檢測clusterin在人類精子中的定位a-b：經(jīng)分離純化但未滲透化處理的精子，一抗孵育；c-d：經(jīng)分離純化且滲透

子量約為40kDa和80kDa的蛋白條帶（圖1，第7-8泳道）。2.免疫熒光法檢測clusterin在正常精子中的定位：（1）percoll提純的精子標本：如圖2a-b所示，精子膜表面未檢測到明顯的熒光信號。經(jīng)滲透化處理后，精子頭部，尤其是頂體后區(qū)出現(xiàn)了明顯的熒光染色（圖2c....

圖3免疫印跡法檢測人睪丸組織中clusterin蛋白的表達情況

3．采用免疫印跡法檢測人睪丸組織中clusterin的表達：經(jīng)還原劑處理的睪丸蛋白樣品中，通過免疫印跡法檢測到三種分子量的蛋白條帶，分別為40KDa、50KDa以及60KDa（圖3，第1泳道）；未經(jīng)還原劑處理的睪丸蛋白中僅檢測到分子量分別為80KDa及大于130KDa的蛋白條帶（....

圖4clusterin在人睪丸中定位的免疫組化分析

27圖4clusterin在人睪丸中定位的免疫組化分析a-c：clusterin一抗孵育，紅色箭頭指明了典型的管周肌樣細胞、Sertoli細胞、未成熟的精子以及間質細胞；精原細胞中沒有陽性表達（綠色箭頭）d：正常IgG替代一抗孵育，作為對照組。放大倍數(shù)：a為100倍，b和d為....

本文編號：4026332