發(fā)布時間：2024-06-10 18:14

　　目的:探討Toll樣受體4(TLR4)/Nod樣受體蛋白3(NLRP3)炎癥復合體是否介導了對比劑(CM)引起的腎小管上皮細胞炎癥和損傷。方法:本研究運用碘普羅胺作用于大鼠腎小管上皮細胞NRK-52E建立損傷模型。應用CCK-8法測定細胞存活率;Western blot測定TLR4、NLRP3、凋亡相關斑點樣蛋白(ASC)、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平;ELISA法檢測炎癥因子白細胞介素1β(IL-1β)和IL-18的水平;Hoechst 33258核染色法檢測凋亡率;JC-1染色法測定線粒體膜電位。用小干擾RNA沉默NLRP3表達。結果:CM可降低NRK-52E細胞的存活率并上調cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05);此外,CM可上調細胞TLR4/NLRP3炎癥復合體的表達并促進炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌(P<0.05)。沉默NLRP3可以對抗CM誘導的炎癥因子分泌;TLR4抑制劑TAK-242及沉默NLRP3能減輕CM引起的細胞凋亡和線粒體功能損傷。結論:TLR4/NLRP3炎癥復合體參與了CM致急性腎...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 損傷模型的建立及實驗分組
        2.3 CCK-8法測定細胞存活率
        2.4 Western blot檢測TLR4、NLRP3、ASC、caspase-1和cleaved caspase-3的蛋白水平
        2.5 ELISA法檢測炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌水平
        2.7 Hoechst 33258核染色熒光顯微鏡照相法測定凋亡細胞的數(shù)量
        2.8 JC-1染色熒光顯微鏡照相法檢測線粒體膜電位 (mitochondrial membrane potential, MMP)
    2.6 siRNA沉默NLRP3的表達
    3 統(tǒng)計學處理
結果
    1CM降低NRK-52E細胞的存活率并上調cleaved caspase-3的蛋白水平
    2 CM上調NRK-52E細胞TLR4及NLRP3炎癥復合體的表達
    3 CM促進NRK-52E細胞炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌
    4 siRNA下調NRK-52E細胞內NLRP3的表達
    5 沉默NLRP3對抗CM誘導的炎癥因子IL-1β和IL-18的分泌
    6 TAK-242及沉默NLRP3能減輕CM引起的NRK-52E細胞凋亡
    7 TAK-242及沉默NLRP3能減輕CM誘導的NRK-52E細胞線粒體功能損傷
討論



本文編號：3991713