本文關(guān)鍵詞：腎臟缺血再灌注期間乙醛脫氫酶2的表達(dá)變化以及miR-146a對(duì)其調(diào)控機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:器官移植的缺血過(guò)程不可避免,再灌注又會(huì)給器官帶來(lái)的二次損傷,這是各種臨床治療方法的矛盾所在,其復(fù)雜的發(fā)生機(jī)制使其進(jìn)一步研究處于瓶頸。ALDH2是目前發(fā)現(xiàn)的在人體中具有重要作用的一種酶,其在多種器官I(mǎi)R中的保護(hù)作用已被證實(shí)。而在腎臟IR中的作用有待證實(shí)。另有研究發(fā)現(xiàn),mi R-146a可通過(guò)對(duì)ALDH2的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,在心臟、小腸的IR損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。因此,我們希望通過(guò)本實(shí)驗(yàn)初步探討ALDH2在腎臟IR中的作用,以及mi R-146a對(duì)ALDH2的調(diào)控作用及其可能的調(diào)控機(jī)制。為進(jìn)一步研究ALDH2在腎臟I/R中的作用提供理論依據(jù)。方法:第一部分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn),采用雄性C57BL/6J(H-2Kb)小鼠,8-10周齡,夾閉雙腎腎蒂30min制作缺血再灌注損傷模型,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)下腔靜脈取血及雙腎,HE染色觀(guān)察腎臟病理?yè)p傷情況,檢測(cè)血液肌酐水平,RT-PCR檢測(cè)ALDH2及mi R-146a表達(dá),Western Blot檢測(cè)ALDH2蛋白表達(dá)。第二部分為體外實(shí)驗(yàn),采用雄性C57BL/6J(H-2Kb)小鼠,8-10周齡。分離提純小鼠腎小管上皮細(xì)胞及腹腔巨噬細(xì)胞,石蠟油法模擬I/R損傷,10u M H2O2模擬氧化應(yīng)激狀態(tài),各時(shí)間點(diǎn)Trizol法提取細(xì)胞RNA,RT-PCR檢測(cè)ALDH2及mi R-146a表達(dá)。結(jié)果:小鼠腎臟熱缺血IR后3h,ALDH2表達(dá)迅速上調(diào),隨后逐漸下降,IR后12h恢復(fù)到接近假手術(shù)組水平。mi R-146a在IR后3小時(shí)表達(dá)顯著升高,隨后上調(diào)幅度逐漸縮小,至IR后72小時(shí),mi R-146a表達(dá)仍為對(duì)照組的3.7±0.7倍。腎臟缺血再灌注后1h,ALDH 2蛋白迅速減少,并于3h降至最低,隨后逐漸升高,12h蛋白水平仍明顯低于對(duì)照組,24h達(dá)到頂峰后逐漸下降。與假手術(shù)組相比,IR 1h、3h、6h、12h組ALDH-2蛋白表達(dá)顯著減少(P0.01或P0.001);IR 24h、72h組ALDH-2蛋白表達(dá)顯著增加(P0.001)。TEC:IR后3h,ALDH-2表達(dá)顯著升高,隨后逐漸降低,刺激后24小時(shí)ALDH-2表達(dá)仍顯著高于對(duì)照組;IR后3h,mi R-146a表達(dá)顯著降低;隨后逐漸升高,刺激后24小時(shí)mi R-146a表達(dá)顯著升高,約為對(duì)照組的4.2±0.8倍;H2O2刺激后3h,ALDH-2表達(dá)顯著升高,隨后逐漸降低,刺激后24小時(shí)ALDH-2表達(dá)仍顯著高于對(duì)照組;H2O2刺激后6h內(nèi),mi R-146a表達(dá)無(wú)明顯變化,刺激后24小時(shí)mi R-146a表達(dá)顯著升高,約為對(duì)照組的2.7±0.7倍。MΦ:IR后3h ALDH-2表達(dá)水平即顯著升高,刺激后24小時(shí)ALDH-2表達(dá)約為對(duì)照組的4.2±0.8倍;IR后,原代MΦ的mi R-146a表達(dá)水平無(wú)顯著變化;H2O2刺激后6h,ALDH-2表達(dá)水平顯著升高,刺激后24小時(shí)約為對(duì)照組的5.2±0.9倍;H2O2刺激后3h,mi R-146a表達(dá)即開(kāi)始上調(diào),刺激后24小時(shí)mi R-146a表達(dá)約為對(duì)照組的5.7±1.2倍。結(jié)論:我們的研究結(jié)果表明在構(gòu)建的小鼠腎臟I/R模型中,腎臟組織ALDH2 m RNA表達(dá)迅速升高,ALDH2蛋白早期降低,隨后逐漸升高;mi R-146a體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示在I/R早期表達(dá)迅速上調(diào);體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),I/R后及H2O2刺激后ALDH2表達(dá)均迅速上調(diào),而mi R-146a表達(dá)在早期降低,6h后逐漸升高,與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致;mi R-146a有望成為腎臟I/R損傷的早期診斷標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：乙醛脫氫酶2 mi R-146a 缺血再灌注 腎移植 腎小管上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表10-11
• 前言11-12
• 第一部分 小鼠腎臟缺血再灌注期間ALDH2及miR-146a的表達(dá)12-25
• 1 材料與方法13-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2 結(jié)果19-23
• 2.1 小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型制作成功19-21
• 2.2 小鼠腎臟IR后ALDH2與miR-146a表達(dá)上調(diào)21-22
• 2.3 小鼠腎臟IR后ALDH2蛋白表達(dá)有明顯變化22-23
• 3 討論23-25
• 第二部分 小鼠原代腎小管上皮細(xì)胞及腹腔巨噬細(xì)胞缺血再灌注期間ALDH2及miR-146a的表達(dá)25-31
• 1 材料與方法25-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 1.3 統(tǒng)計(jì)方法28
• 2 結(jié)果28-30
• 2.1 小鼠原代TEC在IR及H_2O_2刺激后ALDH2表達(dá)上調(diào)28-29
• 2.2 小鼠原代Mφ在IR及H_2O_2刺激后ALDH2表達(dá)上調(diào)29
• 2.3 小鼠原代TEC在IR及H_2O_2刺激后miR-146a表達(dá)上調(diào)29-30
• 2.4 小鼠原代Mφ在IR及H_2O_2刺激后miR-146a表達(dá)上調(diào)30
• 3 討論30-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述36-42
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 致謝42-44
• 在學(xué)期間參與的科研課題與研究成果44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45-46

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  本文關(guān)鍵詞：腎臟缺血再灌注期間乙醛脫氫酶2的表達(dá)變化以及miR-146a對(duì)其調(diào)控機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：391283