研究背景腎纖維化,包括腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化,是慢性腎臟病的普遍特征。許多病理因素,例如慢性持續(xù)感染,缺氧,控制不佳的高血壓和糖尿病等,均可以引發(fā)進(jìn)行性和不可逆的腎纖維化。其中糖尿病腎病(DN)主要表現(xiàn)為腎小球硬化,其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全明確。高血糖、遺傳背景、血流動(dòng)力學(xué)異常等因素均能引起代謝改變、血管活性物質(zhì)異常,無(wú)法精確解析腎纖維化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。因此,積極探索腎纖維化的相關(guān)發(fā)病機(jī)制,并據(jù)此研發(fā)新的治療策略一直是研究者努力的目標(biāo)與方向,其中,缺氧被認(rèn)為是一個(gè)關(guān)鍵因素。最近的研究已經(jīng)強(qiáng)調(diào)了腎內(nèi)低氧作為慢性腎臟疾病的一個(gè)潛在機(jī)制。本研究采用單細(xì)胞層層組裝技術(shù)(LBL)成功地構(gòu)建了體外3D缺氧微環(huán)境,以研究miR-382和細(xì)胞自噬在腎纖維化中的作用。目的1、基于單細(xì)胞LBL技術(shù)平臺(tái),構(gòu)建腎系膜細(xì)胞的3D缺氧微環(huán)境培養(yǎng)體系。2、明確缺氧微環(huán)境對(duì)腎系膜細(xì)胞miR-382以及相關(guān)信號(hào)通路的影響。3、明確miR-382誘導(dǎo)腎纖維化的相關(guān)機(jī)制。內(nèi)容和方法1、利用單細(xì)胞LBL組織工程手段構(gòu)建腎系膜細(xì)胞的3D缺氧微環(huán)境培養(yǎng)體系。2、采用qRT-PCR法和免疫熒光分析比較研究在2D、3D培養(yǎng)條件下...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 利用單細(xì)胞LBL組裝技術(shù)構(gòu)建3D缺氧微環(huán)境
    引言
    1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與試劑
        1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)中相關(guān)溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        2.1 單純2D細(xì)胞和3D RMCs細(xì)胞球的培養(yǎng)
        2.2 腎組織工程LBL材料的制備和3D缺氧微環(huán)境的構(gòu)建
        2.3 HA-EDA和HA材料的結(jié)構(gòu)表征和細(xì)胞毒性檢測(cè)
        2.4 透射電鏡觀察3D RMCs球體細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 HA-EDA材料和多細(xì)胞RMCs球體的表征
        3.2 單細(xì)胞LBL組裝后3D RMCs球體的形成
    4 討論
    5 結(jié)論
第二章 利用單細(xì)胞LBL組裝技術(shù)構(gòu)建3D缺氧微環(huán)境研究miR-382和細(xì)胞自噬在腎纖維化中的作用
    引言
    1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與試劑
        1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)相關(guān)溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        2.1 免疫熒光染色和共聚焦激光掃描顯微鏡觀察
        2.2 蛋白質(zhì)的提取
        2.3 Western blot實(shí)驗(yàn)步驟
        2.4 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)方法
        2.5 流式分析
        2.6 胞漿和胞核蛋白及全蛋白的提取
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 3D RMCs球體缺氧微環(huán)境促使miR-382高表達(dá)和PTEN的低表達(dá)
        3.2 3D RMCs球體缺氧微環(huán)境促使TGF-β1和Fn基因高水平表達(dá)
        3.3 3DM細(xì)胞逃離3D RMCs球體的缺氧微環(huán)境,形成CD24陽(yáng)性細(xì)胞
    4 討論
    5 結(jié)論
中英文對(duì)照縮略詞表
全文小結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3889175