原始生殖細(xì)胞(Primordial germ cells,PGCs)是最早期的生殖細(xì)胞,它最終產(chǎn)生雄性和雌性生殖細(xì)胞。精子發(fā)生(Spermatogenesis)是雄性生殖一個(gè)復(fù)雜的細(xì)胞分化過程,它主要包括三個(gè)主要階段,即精原細(xì)胞的有絲分裂,精母細(xì)胞的減數(shù)分裂,精子細(xì)胞經(jīng)過變態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榫印Ｓ汕蛐尉蛹?xì)胞變態(tài)產(chǎn)生精子的過程,稱為精子形成。原始生殖細(xì)胞形成障礙會(huì)導(dǎo)致出生后生殖腺中生殖細(xì)胞的減少甚至缺失,精子發(fā)生障礙將導(dǎo)致少、弱、畸形精子癥和無精子癥。多種原因都會(huì)引起生殖細(xì)胞形成和精子發(fā)生障礙,而較為常見的原因之一是基因突變。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)評(píng)估,不孕不育已經(jīng)威脅到全球約15%的育齡夫婦,也就是每6⁷對(duì)夫婦中有1對(duì)夫婦存在生殖障礙。我國(guó)近期調(diào)查結(jié)果顯示國(guó)內(nèi)不孕癥患者約占已婚夫婦人數(shù)的10%,而且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。其中男性不育患者已經(jīng)占據(jù)人類不孕不育患者的一半左右。男性不育癥的原因很多,主要原因包括生殖細(xì)胞形成異常和精子發(fā)生障礙等�；蛲蛔儠�(huì)導(dǎo)致這兩種問題的出現(xiàn),進(jìn)而導(dǎo)致精子功能缺陷從而引起雄性不育。雖然輔助生殖技術(shù)能幫助部分男性不育患者解決問題,但是對(duì)于基因突變導(dǎo)...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
實(shí)驗(yàn)材料與方法
    一.實(shí)驗(yàn)材料
        (一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        (二)主要儀器設(shè)備
        (三)實(shí)驗(yàn)主要試劑與耗材
        (四)實(shí)驗(yàn)主要試劑及配制
    二.實(shí)驗(yàn)步驟與方法
        (一)Kit^w/Kit^wv小鼠ntESCs的建立及鑒定
        (二)TALENs修復(fù)Kit^w/Kit^wv ntESC Kit基因
        (三)修復(fù)前后Kit^w/Kit^wv ntESC體內(nèi)生殖細(xì)胞分化
        (四) Kit^w/Kit^wv ntESCs的PGCLCs分化及鑒定
        (五) 修復(fù)后Kit^w/Kit^wv ntESCs分化來源的PGCLCs的精子發(fā)生檢測(cè)
        (六)修復(fù)后Kit^w/Kit^wv ntESCs分化來源的精子功能檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與結(jié)果
    一.Kit^w/Kit^wv小鼠TTFS來源的NTESCS建立及多能性檢測(cè)
        (一)Kit^w/Kit^wv ntESCs系的建立
        (二)Kit^w/Kit^wv ntESCs基因組完整性及多能性檢測(cè)
    二.Kit^w/Kit^wv NTESCS W位點(diǎn)的基因修復(fù)及體內(nèi)生殖細(xì)胞特化的檢測(cè)
        (一)利用TALENs對(duì)Kit^w/Kit^wv nt ESCs W位點(diǎn)進(jìn)行基因修復(fù)
        (二)修復(fù)后Kit^w/Kit^wv ntESCs多能性檢測(cè)
        (三)修復(fù)前后Kit^w/Kit^wv ntESCs體內(nèi)生殖細(xì)胞分化能力的檢測(cè)
    三.修復(fù)前后Kit^w/Kit^wv NTESCS體外生殖細(xì)胞分化及檢測(cè)
        (一)Kit^w/Kit^wv ntESCs向EpiLCs的分化及檢測(cè)
        (二)EpiLCs向PGCLCs的分化及檢測(cè)
    四.修復(fù)后Kit^w/Kit^wv PGCLCS移植入Kit^w/Kit^wv小鼠睪丸中產(chǎn)生精子
    五.RFP標(biāo)記的修復(fù)后Kit^w/Kit^wv PGCLCS睪丸移植后產(chǎn)生健康子代
        (一)構(gòu)建RFP標(biāo)記的PGCLCs
        (二)PGCLCs^RFP睪丸移植得到具有功能的配子
    六.不帶標(biāo)記的修復(fù)后Kit^w/Kit^wv PGCLCS白消安造模小鼠睪丸移植得到健康子代
討論
    一.PGCLCS分化培養(yǎng)基中細(xì)胞因子起到最關(guān)鍵作用
    二.利用NTESCS作為生殖細(xì)胞的分化資源具有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)
    三.TALENS基因修復(fù)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)及問題
    四.ESC及IPSC分化為原始生殖細(xì)胞體系建立的必要性
    五.ESC及IPSC分化來源的子代的檢測(cè)
    六.利用人類多能干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞進(jìn)行生殖細(xì)胞特化的可行性
    七.建立體外減數(shù)分裂系統(tǒng)的必要性和可行性
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 生殖細(xì)胞體外基因編輯的研究進(jìn)展
    一.生殖細(xì)胞體內(nèi)分化的進(jìn)程
        (一)PGCs命運(yùn)調(diào)控相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子
        (二)PGCs特化相關(guān)信號(hào)通路
    二.生殖細(xì)胞體外分化的研究進(jìn)展
        (一)生殖細(xì)胞分化在小鼠中的研究進(jìn)展
        (二)人類胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞生殖細(xì)胞分化的進(jìn)展
    三.生殖細(xì)胞體外基因編輯研究進(jìn)展
        (一)基因編輯技術(shù)的發(fā)展
        (二)基因編輯技術(shù)在生殖細(xì)胞中的應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號(hào)：3871562