原始生殖細胞(Primordial germ cells,PGCs)是最早期的生殖細胞,它最終產(chǎn)生雄性和雌性生殖細胞。精子發(fā)生(Spermatogenesis)是雄性生殖一個復雜的細胞分化過程,它主要包括三個主要階段,即精原細胞的有絲分裂,精母細胞的減數(shù)分裂,精子細胞經(jīng)過變態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榫�。由球形精子細胞變態(tài)產(chǎn)生精子的過程,稱為精子形成。原始生殖細胞形成障礙會導致出生后生殖腺中生殖細胞的減少甚至缺失,精子發(fā)生障礙將導致少、弱、畸形精子癥和無精子癥。多種原因都會引起生殖細胞形成和精子發(fā)生障礙,而較為常見的原因之一是基因突變。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)評估,不孕不育已經(jīng)威脅到全球約15%的育齡夫婦,也就是每6⁷對夫婦中有1對夫婦存在生殖障礙。我國近期調(diào)查結(jié)果顯示國內(nèi)不孕癥患者約占已婚夫婦人數(shù)的10%,而且發(fā)病率呈上升趨勢。其中男性不育患者已經(jīng)占據(jù)人類不孕不育患者的一半左右。男性不育癥的原因很多,主要原因包括生殖細胞形成異常和精子發(fā)生障礙等�；蛲蛔儠䦟е逻@兩種問題的出現(xiàn),進而導致精子功能缺陷從而引起雄性不育。雖然輔助生殖技術(shù)能幫助部分男性不育患者解決問題,但是對于基因突變導...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
實驗材料與方法
    一.實驗材料
        (一)實驗動物
        (二)主要儀器設(shè)備
        (三)實驗主要試劑與耗材
        (四)實驗主要試劑及配制
    二.實驗步驟與方法
        (一)Kit^w/Kit^wv小鼠ntESCs的建立及鑒定
        (二)TALENs修復Kit^w/Kit^wv ntESC Kit基因
        (三)修復前后Kit^w/Kit^wv ntESC體內(nèi)生殖細胞分化
        (四) Kit^w/Kit^wv ntESCs的PGCLCs分化及鑒定
        (五) 修復后Kit^w/Kit^wv ntESCs分化來源的PGCLCs的精子發(fā)生檢測
        (六)修復后Kit^w/Kit^wv ntESCs分化來源的精子功能檢測
實驗內(nèi)容與結(jié)果
    一.Kit^w/Kit^wv小鼠TTFS來源的NTESCS建立及多能性檢測
        (一)Kit^w/Kit^wv ntESCs系的建立
        (二)Kit^w/Kit^wv ntESCs基因組完整性及多能性檢測
    二.Kit^w/Kit^wv NTESCS W位點的基因修復及體內(nèi)生殖細胞特化的檢測
        (一)利用TALENs對Kit^w/Kit^wv nt ESCs W位點進行基因修復
        (二)修復后Kit^w/Kit^wv ntESCs多能性檢測
        (三)修復前后Kit^w/Kit^wv ntESCs體內(nèi)生殖細胞分化能力的檢測
    三.修復前后Kit^w/Kit^wv NTESCS體外生殖細胞分化及檢測
        (一)Kit^w/Kit^wv ntESCs向EpiLCs的分化及檢測
        (二)EpiLCs向PGCLCs的分化及檢測
    四.修復后Kit^w/Kit^wv PGCLCS移植入Kit^w/Kit^wv小鼠睪丸中產(chǎn)生精子
    五.RFP標記的修復后Kit^w/Kit^wv PGCLCS睪丸移植后產(chǎn)生健康子代
        (一)構(gòu)建RFP標記的PGCLCs
        (二)PGCLCs^RFP睪丸移植得到具有功能的配子
    六.不帶標記的修復后Kit^w/Kit^wv PGCLCS白消安造模小鼠睪丸移植得到健康子代
討論
    一.PGCLCS分化培養(yǎng)基中細胞因子起到最關(guān)鍵作用
    二.利用NTESCS作為生殖細胞的分化資源具有多項優(yōu)勢
    三.TALENS基因修復技術(shù)的優(yōu)勢及問題
    四.ESC及IPSC分化為原始生殖細胞體系建立的必要性
    五.ESC及IPSC分化來源的子代的檢測
    六.利用人類多能干細胞和誘導多能干細胞進行生殖細胞特化的可行性
    七.建立體外減數(shù)分裂系統(tǒng)的必要性和可行性
參考文獻
文獻綜述 生殖細胞體外基因編輯的研究進展
    一.生殖細胞體內(nèi)分化的進程
        (一)PGCs命運調(diào)控相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子
        (二)PGCs特化相關(guān)信號通路
    二.生殖細胞體外分化的研究進展
        (一)生殖細胞分化在小鼠中的研究進展
        (二)人類胚胎干細胞和誘導多能干細胞生殖細胞分化的進展
    三.生殖細胞體外基因編輯研究進展
        (一)基因編輯技術(shù)的發(fā)展
        (二)基因編輯技術(shù)在生殖細胞中的應用
    參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號：3871562