發(fā)布時間：2017-05-20 14:09

  本文關鍵詞：腎上腺髓質素基因轉染聯合缺氧培養(yǎng)提高骨髓間充質干細胞抗凋亡能力，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究腎上腺髓質素(ADM)基因轉染及缺氧培養(yǎng)對骨髓間充干細胞(BMSCs)凋亡及凋亡相關基因Bax、Bcl-2、Caspase-3表達的影響。方法:以貼壁法分離SD大鼠BMSCs。用X-gal染色測含半乳糖苷酶基因的重組腺病毒(Ad-Lac Z)對BMSCs的轉染率,即含腎上腺髓質素基因的重組腺病毒(Ad-ADM)對BMSCs的轉染率。BMSCs缺氧培養(yǎng)0、3、6、9、12 h后用RT-PCR測定Bax、Bcl-2、Caspase-3 m RNA的表達;用western blot測定Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達以確定最佳缺氧時間;BMSCs加入不同濃度ADM(空白組、1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml)缺氧6 h,RT-PCR測定Bax、Bcl-2、Caspase-3 m RNA的表達,western blot測定Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達以確定最佳的ADM濃度;BMSCs分為對照組,空載體組(Ad-Lac Z組),Ad-ADM組、ADM組(100 ng/ml)。在缺氧、無血清條件下培養(yǎng)BMSCs,RT-PCR測定ADM及ADM受體(CRLR/RAMP-2)m RNA的表達,RT-PCR測定Bax、Bcl-2、Caspase-3 m RNA的表達;用western blot測定Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達、TUNEL法測定細胞凋亡。結果:1.Ad-ADM對BMSCs的轉染率與病毒感染復數(MOI)具有量效關系,MOI為150時細胞的轉染率達94%。2.無血清培養(yǎng)條件下缺氧培養(yǎng)0、3、6、9、12 h后,在m RNA及蛋白水平上BMSCs表達Bax、Bcl-2相比0 h增加(P0.05),缺氧6h時Bax/Bcl-2比值達到最小(P0.05),Caspase-3表達最低(P0.05)。3.在缺氧培養(yǎng)基礎上加入不同濃度ADM后,BMSCs在m RNA及蛋白質水平上Bax表達減少、Bcl-2表達增加、Bax/Bcl-2比值下降(P0.05),Caspase-3表達減少(P0.05)。4.在缺氧培養(yǎng)基礎上BMSCs轉染Ad-ADM后,Ad-ADM組ADM、CRLR、RAMP-2 m RNA表達增加(P0.05),在m RNA及蛋白質水平上BMSCs表達Bax減少、Bcl-2增加、Bax/Bcl-2比值下降(P0.05),Caspase-3表達減少(P0.05),細胞凋亡率下降(P0.05)。結論:1.Ad-ADM對BMSCs具有較高的轉染率。2.短時間的缺氧培養(yǎng)(6h)可以提高BMSCs的抗凋亡能力。3.腎上腺髓質素能提高BMSCs的抗凋亡能力,并且其作用具有腎上腺髓質素濃度依賴性。4.腎上腺髓質素基因轉染BMSCs后ADM、CRLR、RAMP-2的表達增加。5.腎上腺髓質素基因轉染聯合缺氧培養(yǎng)可進一步提高BMSCs的抗凋亡能力。
【關鍵詞】：骨髓間充質干細胞 腎上腺髓質素基因轉染 凋亡 缺氧培養(yǎng)
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料和方法10-30
• 1 材料10-12
• 2 方法12-30
• 2.1 骨髓間充質干細胞原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)12-14
• 2.2 293A細胞的復蘇、培養(yǎng)、凍存14-16
• 2.3 攜帶目的基因的腺病毒的擴增、滴度測定16-18
• 2.4 攜帶目的基因的腺病毒對骨髓間充質干細胞轉染率的測定18-20
• 2.5 RT-PCR測定各目的基因的m RNA表達20-24
• 2.6 western blot測定各蛋白的表達情況24-27
• 2.7 TUNEL法測定細胞凋亡27-29
• 2.8 統(tǒng)計分析29-30
• 結果30-45
• 討論45-47
• 結論47-48
• 參考文獻48-51
• 綜述51-57
• 參考文獻55-57
• 致謝57-58

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

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中國博士學位論文全文數據庫 前1條

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  本文關鍵詞：腎上腺髓質素基因轉染聯合缺氧培養(yǎng)提高骨髓間充質干細胞抗凋亡能力，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：381848