已有研究證實(shí),不同進(jìn)展期前列腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力存在顯著差異。為了揭示產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因,我們對(duì)兩株不同階段的前列腺癌細(xì)胞系PC3與LNCAP進(jìn)行比較和研究。發(fā)現(xiàn)Dab2基因在這兩株細(xì)胞中表達(dá)存在顯著差異,并且細(xì)胞的侵襲和遷移能力隨著Dab2基因表達(dá)升高而增強(qiáng)。我們還找到一組受Dab2調(diào)控的遷移相關(guān)基因,如遷移抑制基因Mmp9以及Rhob;遷移促進(jìn)基因Fscn1,Pfn2及Wasp等,這些基因可能與Dab2相互作用而構(gòu)成一個(gè)作用網(wǎng)絡(luò)來調(diào)控前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。Dab2基因?qū)C3細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響并不是通過影響細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞增值來實(shí)現(xiàn)的,它有著自己獨(dú)特的機(jī)制。在機(jī)制研究中我們發(fā)現(xiàn)miR-145能直接靶向作用于Dab2,并抑制Dab2的表達(dá),進(jìn)而抑制PC3細(xì)胞的遷移和侵襲能力。Dab2基因CpG島甲基化分析結(jié)果顯示,PC3細(xì)胞Dab2基因Cp G島1甲基化水平顯著高于LNCAP細(xì)胞。

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
緒論
1.引言
2. 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 抗體
        2.1.3 常用相關(guān)試劑
        2.1.4 自配試劑配方
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 Dab2過表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 Dab2 shRNA載體的構(gòu)建
        2.2.4 病毒包裝
        2.2.5 病毒感染目的細(xì)胞
        2.2.6 病毒感染目的細(xì)胞后的功能學(xué)研究
            2.2.6.1 流式細(xì)胞分析
            2.2.6.2 劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.2.6.3 Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 收集細(xì)胞抽RNA及Real-time PCR檢測(cè)
        2.2.8 miRNA的抽提及Real-time PCR檢測(cè)
        2.2.9 蛋白質(zhì)的抽提及western blot分析
        2.2.10 ab2 DNA的啟動(dòng)子區(qū)域甲基化分析
3 結(jié)果
    3.1 PC3與LNCAP細(xì)胞的Dab2表達(dá)水平差異顯著
    3.2 PC3細(xì)胞的侵襲能力顯著強(qiáng)于LNCAP細(xì)胞
    3.3 Dab2表達(dá)水平的敲低顯著影響PC3細(xì)胞的遷移和侵襲能力
        3.3.1 PC3與PC3-Dab2-shRNA細(xì)胞Dab2的表達(dá)量分析
        3.3.2 PC3與PC3-Dab2-shRNA細(xì)胞的遷移和侵襲能力分析
        3.3.3 PC3細(xì)胞與PC3-Dab2-shRNA細(xì)胞內(nèi)遷移相關(guān)基因檢測(cè)
        3.3.4 PC3與PC3-Dab2-shRNA細(xì)胞周期、增值、凋亡分析
    3.4 Migr1-Dab2轉(zhuǎn)染后LNCAP細(xì)胞的侵襲能力顯著提高
        3.4.1 LNCAP細(xì)胞與LNCAP-migr1-Dab2細(xì)胞Dab2表達(dá)量的分析
        3.4.2 LNCAP細(xì)胞與LNCAP-migr1-Dab2細(xì)胞侵襲能力分析
    3.5 miR-145能靶向調(diào)控Dab2的表達(dá)并影響前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能
        3.5.1 miR-145與Dab2基因的直接相互作用分析
        3.5.2 miR-145導(dǎo)入PC3細(xì)胞后Dab2基因的表達(dá)分析
        3.5.3 PC3細(xì)胞導(dǎo)入miR-145后細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.5.4 PC3細(xì)胞導(dǎo)入miR-145后Transwell實(shí)驗(yàn)
    3.6 LNCAP與PC3細(xì)胞中Dab2基因CpG島甲基化分析
        3.6.1 LNCAP細(xì)胞加入 5-AZA處理后Dab2基因的檢測(cè)
        3.6.2 PC3細(xì)胞與LNCAP細(xì)胞中Dab2基因啟動(dòng)子甲基化分析
4.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3813715