本文關(guān)鍵詞：抑制HIF-1α降解對糖尿病大鼠缺氧及血管生成因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構(gòu)建糖尿病大鼠模型,給予HIF-1α降解抑制劑(L-mimosine)處理,觀察腎臟缺氧及血管生成因子相關(guān)因子基因和蛋白表達變化,評估L-mimosine對糖尿病腎臟的保護性作用。方法:使用鏈脲菌素(STZ)腹腔注射誘導(dǎo)構(gòu)建SD大鼠糖尿病模型。設(shè)正常對照組(N組)、糖尿病組(D組)、L-mimosine治療組(L組)。L組于糖尿病鼠成模8周后隔日腹腔注射L-mimosine(50mg/kg),于12周、16周后采血觀察血糖、尿量以及24小時尿蛋白變化,同時處死大鼠,取腎臟組織,采用缺氧探針評估缺氧情況,免疫組化/熒光、western bloting和RT-PCR檢測缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、血紅素加氧酶-1(HO-1)、脯氨酸羥化酶2(PHD2)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、促血管生成素-1(Ang-1)、促血管生成素-2(Ang-2)的表達變化。結(jié)果:1.兩個糖尿病模型組血糖、尿蛋白水平均明顯高于N組(P0.05),但L組尿蛋白明顯低于D組(P0.01)。2.腎臟病理顯示兩個糖尿病模型組腎重指數(shù)明顯增加,可見不同程度腎小球增大,部分球囊擴張、系膜基質(zhì)增多、腎小管擴張,腎小管上皮細胞顆粒和空泡變性等,但L組病理改變相對減輕。3.腎組織缺氧探針免疫組化顯示各個組均可見陽性染色,N組主要分布在髓質(zhì)及皮髓交界,模型組擴大皮質(zhì)區(qū);兩個糖尿病模型組的陽性著染面積明顯高于N組(P0.01),其中L組陽性著染面積較D組明顯減輕(P0.01)。4.免疫組化熒光及蛋白印跡顯示:1HIF-1α主要表達于腎小管、腎小球細胞核及部分腎小管胞漿;兩個糖尿病模型組腎組織HIF-1α均顯著上調(diào)(P0.01),其中L組腎組織HIF-1α上調(diào)明顯高于D組(P0.01),但16周較12周時下調(diào)(P0.01)。2HO-1主要表達于腎小管上皮細胞胞漿;兩個糖尿病模型組腎組織HO-1均顯著上調(diào)(P0.05),其中L組上調(diào)明顯高于D組(P0.01), 但16周較12周下調(diào)(P0.01)。3PHD2主要表達于腎小管上皮細胞;兩個糖尿病組PHD2蛋白表達均上調(diào)(P0.01),其中L組上調(diào)高于D組(P0.01)。4VEGF突出表達于腎小管上皮細胞及部分腎小球;兩個糖尿病模型組VEGF表達顯著上調(diào)(P0.01),其中L組較D組有所上調(diào)。5Ang-1突出表達于腎小球、腎小管及腎臟小血管;兩個糖尿病模型組Ang-1表達均明顯上調(diào)(P0.05),L組Ang-1蛋白表達明顯高于D組(P0.05)。6Ang-2主要表達于腎小管、部分腎小球胞漿及胞核,以及腎臟小血管;兩個糖尿病模型組腎組織Ang-2表達明顯上調(diào)(P0.05),但兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.RT-PCR結(jié)果顯示:1兩個糖尿病模型組腎組織HIF-1αm RNA表達均較N組上調(diào),但僅L組存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且16周較12周下調(diào)(P0.05)。2兩個糖尿病模型組腎組織HO-1m RNA表達均上調(diào),但僅16周L組有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3兩個糖尿病模型組腎組織PHD2m RNA表達均上調(diào)(P0.05),其中L組的表達高于D組,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4兩個糖尿病模型組腎組織VEGF m RNA表達均上調(diào),且L組高于D組,但均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5兩個糖尿病模型組腎組織Ang-1m RNA表達均上調(diào),但僅L組升高存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),且L組明顯高于D組(P0.05)。6兩個糖尿病模型組腎組織Ang-2m RNA表達均上調(diào),且L組高于D組,但均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6.指標相關(guān)性分析:1缺氧探針面積與尿蛋白呈正相關(guān)(r=0.808,P0.05),HIF-1α、HO-1與缺氧探針面積(r=-0.726,r=-0.826,P0.05)、蛋白尿(r=-0.882,P0.01;r=-0.793,P0.05)與呈負相關(guān)。2缺氧探針面積與Ang-1、Ang-2、VEGF(r=-0.757,r=-0.818,r=-0.791,P0.05)呈負相關(guān)。HIF-1α、HO-1與Ang-1(r=0.960,P0.01;r=0.793,P0.05)、Ang-2(r=0.739,P0.05;r=0.941,P0.01)、VEGF(r=0.962,P0.05;r=0.872,P0.01)呈正相關(guān)。結(jié)論:1.L-mimosine可改善1型糖尿病鼠腎缺氧狀態(tài);2.L-mimosine改善1型糖尿病鼠腎缺氧作用可能與上調(diào)HIF-1α、HO-1因子表達相關(guān);3.L-mimosine可以顯著上調(diào)1型糖尿病鼠腎Ang-1的表達,有助改善糖尿病腎臟微血管病變。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 缺氧 L-含羞草素 低氧誘導(dǎo)因子 血管生成因子
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中英縮略詞對照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 第一部分 抑制 HIF-1α 的降解對糖尿病大鼠缺氧的影響13-58
• 前言13-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-50
• 討論50-53
• 實驗不足53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-58
• 第二部分 抑制 HIF-1α 的降解對血管生成相關(guān)因子的影響58-83
• 引言58
• 材料與方法58-60
• 結(jié)果60-77
• 討論77-79
• 不足之處79
• 結(jié)論79-80
• 參考文獻80-83
• 綜述83-92
• 參考文獻89-92
• 致謝92-93
• 作者簡介93

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