背景:腎胺酶(Renalase)是一種最近發(fā)現(xiàn)的分泌性黃素蛋白,在急性和慢性腎臟疾病的動(dòng)物模型中均具有抗凋亡和抗炎作用,可減輕腎臟損傷。然而,Renalase對(duì)糖尿病腎臟疾病(Diabetic kidney disease,DKD)的腎臟保護(hù)作用還有待證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)擬評(píng)估腎胺酶對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)作用及其分子機(jī)制。方法:收集我院接受腎活組織檢查的糖尿病腎病患者和其他無(wú)明顯腎損傷DKD患者的臨床資料,包括患者基本信息(年齡、性別)、腎臟損傷情況、相關(guān)臨床指標(biāo)、監(jiān)測(cè)動(dòng)脈收縮壓和舒張壓,并檢測(cè)血尿素氮、血清肌酐以及腎小球?yàn)V過率估算值。從兩組病人的腎活檢標(biāo)本中提取總RNA,評(píng)估腎胺酶在糖尿病腎病的腎臟表達(dá)水平。取10周齡的db/db糖尿病小鼠和db/m小鼠分為兩組:實(shí)驗(yàn)組(db/db小鼠)、對(duì)照組(db/m小鼠)。兩組小鼠于16周齡時(shí)接受安樂死,取腎臟組織提取總RNA和蛋白,檢測(cè)小鼠腎臟中Renalase mRNA和蛋白的表達(dá)水平。評(píng)估Renalase在人和小鼠的腎臟中的表達(dá)水平是否相似。取10周大的同窩雄性db/db背景的Renalase基因敲除小鼠和db/m小鼠分為以下四組:db/db-Ren...

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫詞表
1.引言
2.實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 主要材料及試劑
    2.2 臨床實(shí)驗(yàn)
        2.2.1 研究對(duì)象
        2.2.2 研究分組
    2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.3.2 Renalase敲除小鼠的培育
        2.3.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.3.4 血壓測(cè)定
        2.3.5 取材與保存
    2.4 體外實(shí)驗(yàn)
        2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.2 細(xì)胞分組
        2.4.3 轉(zhuǎn)染
    2.5 血清肌酐測(cè)定
        2.5.1 原理
        2.5.2 步驟
        2.5.3 臨床意義
    2.6 尿白蛋白測(cè)定
        2.6.1 原理
        2.6.2 步驟
        2.6.3 臨床意義
    2.7 尿8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)測(cè)定
        2.7.1 原理
        2.7.2 步驟
        2.7.3 臨床意義
    2.8 p21測(cè)定
        2.8.1 原理
        2.8.2 步驟
        2.8.3 臨床意義
    2.9 血清兒茶酚胺(Catecholamine,CA)的測(cè)定
        2.9.1 原理
        2.9.2 步驟
        2.9.3 臨床意義
    2.10 血清和尿液中Renalase的測(cè)定
        2.10.1 原理
        2.10.2 步驟
    2.11 促分裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)的測(cè)定
        2.11.1 原理
        2.11.2 步驟
    2.12 eGFR測(cè)定
    2.13 腎組織石蠟包埋
        2.13.1 原理
        2.13.2 步驟
    2.14 腎組織PAS染色(過碘酸雪夫染色,糖原染色)
        2.14.1 原理
        2.14.2 步驟
        2.14.3 腎損傷評(píng)估
    2.15 Western blot檢測(cè)蛋白
        2.15.1 原理
        2.15.2 提取蛋白質(zhì)
        2.15.3 蛋白質(zhì)定量
        2.15.4 蛋白質(zhì)變性
        2.15.5 Western Blot
    2.16 RT-PCR檢測(cè)目的基因表達(dá)
        2.16.1 原理
        2.16.2 步驟
    2.17 統(tǒng)計(jì)分析
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 Renalase在糖尿病腎病患者和db/db小鼠中的表達(dá)顯著降低
    3.2 Renalase敲除加重db/db小鼠的腎損傷
    3.3 Renalase敲除后促進(jìn)P21表達(dá)并加重腎小球系膜纖維化
    3.4 Renalase抑制高糖誘導(dǎo)的系膜纖維化基因和P21的表達(dá)
討論
全文小結(jié)
    主要結(jié)論
    本論文創(chuàng)新性
    本論文的不足之處
    本論文的臨床觀點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
學(xué)術(shù)論文和成果



本文編號(hào)：3796734