本文關(guān)鍵詞：HDGF在陰莖鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義HIF1A多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤的關(guān)系，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 陰莖鱗狀細(xì)胞癌(Penile squamous cell carcinoma, PSCC)占陰莖癌的絕大多數(shù),常見(jiàn)于40-60歲有包皮過(guò)長(zhǎng)或者包莖的患者,其確切病因和機(jī)制尚不完全明確。肝癌衍生生長(zhǎng)因子(Hepatoma derived growth factor, HDGF)已被證實(shí)可作為多種類型惡性腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、預(yù)后的可靠指標(biāo),但其在PSCC中的作用仍然未有相關(guān)的研究報(bào)道。 目的 本研究中,我們通過(guò)免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry, IHC)的方法檢測(cè)PSCC組織中HDGF.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A (Vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A)和Ki-67的表達(dá),研究HDGF、VEGF-A、Ki-67表達(dá)與PSCC臨床病理特征之間的關(guān)系,分析HDGF表達(dá)與、/EGF-A和Ki-67表達(dá)之間的關(guān)系,探討HDGF以及VEGF-A和Ki-67表達(dá)在PSCC進(jìn)展過(guò)程中的意義。 方法 2004年6月至2011年2月期間,54例PSCC患者在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院泌尿外科接受手術(shù)治療,術(shù)后經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋的PSCC組織標(biāo)本被納入本次回顧性研究。對(duì)于每個(gè)PSCC石蠟標(biāo)本做三個(gè)連續(xù)的厚度為4μm的組織切片,由非生物素聚合辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HDGF、VEGF-A和Ki-67的表達(dá)。PSCC組織切片經(jīng)過(guò)一系列二甲苯槽脫蠟,然后通過(guò)一系列濃度梯度的酒精槽水化。此后,在微波爐中加熱15分鐘(Minute, min),以10mM檸檬酸鹽緩沖液(pH=6.0)進(jìn)行抗原修復(fù)。進(jìn)而由含甲醇稀釋的3.0%過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性,持續(xù)15min。用10%山羊血清孵育并阻斷組織切片中非特異性抗原位點(diǎn)。隨后,在4℃條件下用稀釋的一抗孵育PSCC組織切片過(guò)夜,IDGF抗體應(yīng)用的稀釋比例為1：100,VEGF-A抗體應(yīng)用的稀釋比例為1：100和Ki-67抗體應(yīng)用的稀釋比例為1：100。一抗的檢測(cè)由二抗試劑盒和DAB試劑盒完成。最后PSCC組織切片用蘇木精復(fù)染,鹽酸酒精分化,梯度濃度的乙醇脫水,并用甘油明膠和一個(gè)蓋玻片封片。為了進(jìn)一步評(píng)估HDGF、VEGF-A和Ki-67的表達(dá),每一個(gè)組織切片隨機(jī)選取超過(guò)五個(gè)獨(dú)立的放大倍數(shù)400倍的視野。在不了解PSCC|臨床病理資料的情況下完成PSCC組織切片HDGF、VEGF-A和Ki-67表達(dá)的免疫組織化學(xué)染色的評(píng)估。如以往報(bào)道所述HDGF和Ki-67的表達(dá)主要在細(xì)胞核區(qū)域,而VEGF-A主要積累在細(xì)胞質(zhì)區(qū)域,并采用既往文獻(xiàn)報(bào)道的方法進(jìn)行評(píng)估。記錄每個(gè)放大倍數(shù)400倍的視野中HDGF、VEGF-A、Ki-67表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞的比例(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／該總細(xì)胞),計(jì)算每個(gè)組織切片中HDGF、VEGF-A、Ki-67表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞的比例,進(jìn)一步分析HDGF的表達(dá)與VEGF-A、Ki-67表達(dá)之間的關(guān)系。此外分析HDGF、VEGF-A、Ki-67表達(dá)與PSCC的臨床病理特征和疾病預(yù)后的相關(guān)性。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析由SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件(The Statistical Package for Social Sciences version16.0, SPSS16.0)完成。應(yīng)用Pearson卡方檢驗(yàn)比較HDGF、VEGF-A、Ki-67表達(dá)與PSCC臨床病理特征、PSCC患者預(yù)后的關(guān)系。將HDGF表達(dá)和病程長(zhǎng)短轉(zhuǎn)化為分類變量后,構(gòu)建Logistic回歸模型進(jìn)一步評(píng)估其作為預(yù)后指標(biāo)的意義。雙尾P0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示HDGF和Ki-67主要表達(dá)在細(xì)胞核,VEGF-A主要累積在細(xì)胞質(zhì)中。HDGF、VEGF-A、Ki-67的表達(dá),大于中位數(shù)被分類為高表達(dá),而小于中位數(shù)的HDGF、VEGF-A、Ki-67表達(dá)被分類為低表達(dá)。PSCC組織切片HDGF表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,28例(51.9%)PSCC患者高表達(dá)HDGF,26例(48.1%)PSCC患者低表達(dá)HDGF。而后,統(tǒng)計(jì)HDGF的表達(dá)與PSCC臨床病理特征的關(guān)系。HDGF的表達(dá)與年齡(P=0.284)、病程長(zhǎng)短(P=0.180)、腫瘤直徑(P=0.984)、PSCC細(xì)胞類型(P=0.645)、腫瘤細(xì)胞分級(jí)(P=0.884)、淋巴結(jié)受累情況(P=0.513)和吸煙情況(P=0.150)無(wú)明顯的相關(guān)性。PSCC組織切片VEGF-A表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,29例(53.7%)PSCC患者高表達(dá)VEGF-A,25例(46.3%)PSCC患者低表達(dá)VEGF-A。而后,統(tǒng)計(jì)VEGF-A的表達(dá)與PSCC I臨床病理特征的關(guān)系。VEGF-A的表達(dá)與PSCC細(xì)胞類型有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.030),但是VEGF-A的表達(dá)與年齡(P=0.184)、病程長(zhǎng)短(P=0.951)、腫瘤直徑(P=0.816)、腫瘤細(xì)胞分級(jí)(P=0.109)、淋巴結(jié)受累情況(P=0.492)和吸煙情況(P=0.991)無(wú)明顯的相關(guān)性。PSCC組織切片Ki-67表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,26例(48.1%)PSCC患者高表達(dá)Ki-67,28例(51.9%)PSCC患者低表達(dá)Ki-67。而后,統(tǒng)計(jì)Ki-67的表達(dá)與PSCC I臨床病理特征的關(guān)系。Ki-67的表達(dá)與PSCC細(xì)胞類型有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.020)。但是Ki-67的表達(dá)與年齡(P=0.266)、病程長(zhǎng)短(P=0.761)、腫瘤直徑(P=0.984)、腫瘤細(xì)胞分級(jí)(P=0.145)、淋巴結(jié)受累情況(P=0.627)和吸煙情況(P=0.422)無(wú)明顯的相關(guān)性。28例高表達(dá)HDGF的PSCC患者中,19例(67.9%)PSCC患者高表達(dá)VEGF-A,9例(32.1%)PSCC患者低表達(dá)VEGF-A;26例低表達(dá)HDGF的PSCC患者中,10例(38.5%)PSCC患者高表達(dá)VEGF-A,16例(61.5%)PSCC患者低表達(dá)、/EGF-A。PSCC中,HDGF表達(dá)與VEGF-A表達(dá)密切相關(guān)(P=0.030)。28例高表達(dá)HDGF的PSCC患者中,11例(39.3%)PSCC患者高表達(dá)Ki-67,17例(60.7%)PSCC患者低表達(dá)Ki-67；26例低表達(dá)HDGF的PSCC患者中,15例(57.7%)PSCC患者高表達(dá)Ki-67,11例(42.3%)PSCC患者低表達(dá)Ki-67。PSCC中,HDGF表達(dá)與Ki-67表達(dá)無(wú)密切相關(guān)性(P=0.176)。首先,我們探討年齡、腫瘤大小、腫瘤細(xì)胞分級(jí)、淋巴結(jié)受累情況、吸煙狀況、病程長(zhǎng)短、HDGF表達(dá)、VEGF-A表達(dá)和Ki-67表達(dá)等臨床病理特征與PSCC患者的生存率之間的關(guān)聯(lián)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)病程大于六個(gè)月的患者的存活率比病程小于六個(gè)月的患者的存活率低(43.3%vs70.8%,P=0.043)。HDGF高表達(dá)較HDGF低表達(dá)的患者也顯示出較差的生存率(39.3%vs73.1%,P=0.013)。其余的臨床病理特征,如年齡(P=0.542)、腫瘤大小(P=0.625)、腫瘤細(xì)胞分級(jí)(P=0.826)、淋巴結(jié)受累情況(P=0.750)、腫瘤細(xì)胞類型(P=0.445)、吸煙狀況(P=0.434)、VEGF-A (P=0.542)和Ki-67(P=0.761)的表達(dá),與PSCC患者生存率無(wú)顯著相關(guān)性。為了進(jìn)一步評(píng)估和確定與PSCC生存率密切相關(guān)的臨床病理特征,我們建立Logistic回歸方程篩選潛在的獨(dú)立預(yù)后因素OHDGF表達(dá)和PSCC病程兩個(gè)與預(yù)后顯著相關(guān)的因素被納入Logistic回歸。結(jié)果證實(shí),HDGF高表達(dá)是預(yù)鋇(?)PSCC患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的指標(biāo)(P=0.028)。 結(jié)論 1.HDGF的異常表達(dá)與PSCC的預(yù)后密切相關(guān)(P0.05)。HDGF將作為一個(gè)可靠的、有應(yīng)用前景的評(píng)估PSCC預(yù)后的指標(biāo)和靶向治療靶點(diǎn)。 2. VEGF-A的表達(dá)與PSCC的細(xì)胞類型相關(guān)(P0.05),但與PSCC預(yù)后無(wú)顯著的相關(guān)性。HDGF可調(diào)節(jié)PSCC VEGF-A的表達(dá)。 3.Ki-67的表達(dá)與PSCC的細(xì)胞類型相關(guān)(P0.05),但與PSCC預(yù)后無(wú)明顯的相關(guān)性。PSCC中,HDGF表達(dá)與Ki-67的表達(dá)無(wú)相關(guān)性。 4. PSCC的病程可能為PSCC預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。 目的 缺氧誘導(dǎo)因子-la (Hypoxia inducible factor-la, HIF1A)在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。文獻(xiàn)報(bào)道HIF1A基因多態(tài)性可能導(dǎo)致各種癌癥的患病風(fēng)險(xiǎn)。早期研究證實(shí)HIF1AP582S和A588T多態(tài)性存在于腎癌、尿路上皮癌和前列腺癌,但是HIF1AP582S和A588T多態(tài)性影響腎癌、尿路上皮癌和前列腺癌易感性的結(jié)論仍不一致。因此,我們進(jìn)行了全面系統(tǒng)的薈萃分析評(píng)估HIF1AP582S和A588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤(Urinary Cancers, UC)易感性的關(guān)系。 方法 我們系統(tǒng)地檢索PubMed在線數(shù)據(jù)庫(kù),檢索探討HIF1AP582S和A588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的病例-對(duì)照研究,時(shí)間截止到2012年11月25日,未進(jìn)行語(yǔ)種限制設(shè)定。檢索詞為：(hypoxia-inducible factor-1或hypoxia-inducible factor或HIF-1或HIF1A或HIF)和(polymorphism或variant或SNP或mutation)和(kidney或renal或urothelial或transitional cell carcinoma或bladder或prostatic或prostate)。篩選標(biāo)題、摘要和全文之后,11個(gè)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的病例-對(duì)照研究列入薈萃分析。另外人工檢索研究的參考文獻(xiàn)。我們通過(guò)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的表格提取每個(gè)病例-對(duì)照研究的信息,具體包括：第一作者姓名、出版年份、進(jìn)行研究的國(guó)家、種族、研究對(duì)象的性別、癌癥類型、不同基因型在病例組和對(duì)照組的頻率、檢測(cè)HIF1A P582S和／或A588T多態(tài)性的實(shí)驗(yàn)方法、哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg Equilibrium, HWE)等。課題組通過(guò)討論解決薈萃分析研究中的分歧。 HIF1A P582S和A588T多態(tài)性各基因型和等位基因頻率在高加索人和亞洲對(duì)照組人群的差異進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。我們采用Cochrane公司開(kāi)發(fā)的RevMan5.0軟件評(píng)估HIF1AP582S和A588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的關(guān)系。在探討HIF1AP582S多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的研究中,我們應(yīng)用顯性模型(TT+CT vs CC),隱性模型(TT vs CT+CC)和等位基因模型(T vs C)研究二者的關(guān)系。而在探討HIF1AA588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的研究中,由于部分病例-對(duì)照研究HIF1AA588T多態(tài)性AA基因型頻率甚低,本薈萃分析未進(jìn)行相關(guān)的隱性模型(AA vs AG+GG)統(tǒng)計(jì),我們應(yīng)用顯性模型(AA+AG vs GG)和等位基因模型(A vs G)研究二者的關(guān)系。而后我們依據(jù)HWE、癌癥類型和種族的不同進(jìn)行亞組分析。計(jì)算薈萃分析的OR值和95%可信區(qū)間評(píng)估HDF1AP582S和A588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的相關(guān)程度。P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。異質(zhì)性檢驗(yàn)是由Q檢驗(yàn)實(shí)現(xiàn),P0.10被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。如果存在異質(zhì)性(P0.10),薈萃分析應(yīng)用隨機(jī)效應(yīng)模型(the Dersimonian-Laird method);否則薈萃分析應(yīng)用固定效應(yīng)模型(the Mantel-Haenszel method)。敏感性分析通過(guò)排除對(duì)照組不符合HWE的病例-對(duì)照研究進(jìn)行亞組薈萃分析實(shí)現(xiàn),以評(píng)估薈萃分析結(jié)果的穩(wěn)定性。發(fā)表偏倚由倒漏斗圖評(píng)估,非對(duì)稱漏斗圖表明可能存在發(fā)表偏倚。漏斗圖的不對(duì)稱性由STATA12.1軟件進(jìn)行Begg's檢驗(yàn)評(píng)價(jià)。P0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果 11個(gè)病例-對(duì)照研究,5195名腫瘤患者和5786名對(duì)照納入探討HIF1AP582S多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的薈萃分析。9個(gè)病例-對(duì)照研究,3482名腫瘤患者和4304名對(duì)照納入探討HIF1AA588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的薈萃分析。 在探討HIF1A P582S多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的薈萃分析中,1106名高加索人對(duì)照和1803名亞洲人對(duì)照被納入薈萃分析。高加索人種C和T等位基因的頻率分別為80.74%,19.26%；亞洲人種C和T等位基因的頻率分別為95.90%和4.10%。高加索人種CC、CT和TT基因型的頻率分別為69.17%,23.15%,7.69%,而亞洲人種為91.90%,7.99%和0.11%。高加索人種和亞洲人種之間HIF1AP582S多態(tài)性等位基因和基因型的頻率分布明顯不同(P0.05)。我們對(duì)11項(xiàng)病例-對(duì)照研究的結(jié)果進(jìn)行薈萃分析探討HIF1A P582S多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的關(guān)系。薈萃分析結(jié)果表明二者之間無(wú)顯著相關(guān)性,顯性模型(TT+CT vs CC:OR=1.10,95%CI=0.83-1.45,Pheterogeneity=0.00,P=0.52),隱性模型(TT vs CT+CC: OR=1.17,95%CI=0.67-2.05,Pheterogeneity=0.02,P=0.57)和等位基因模型(T vs C:OR=1.13,95%CI=0.90-1.41,Pheterogeneity=0.00,P=0.30).我們基于種族、癌癥類型、HWE狀態(tài)的差異進(jìn)行亞組薈萃分析。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),高加索人種TT基因型患泌尿系統(tǒng)腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)較CC或CT基因型高1.60倍(TT vs CT+CC:OR=1.60,95%CI:1.09-2.33,Pheterogeneity=0.11,P=0.02),而其余亞組的薈萃分析結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 在探討HIF1A A588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的薈萃分析中,1041名高加索人對(duì)照和1800名亞洲人對(duì)照被納入薈萃分析。高加索人種AA+AG和GG基因型的頻率分別為6.72%,93.28%；亞洲人種的基因型頻率分別為6.11%和93.89%；基因型分布無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。高加索人種A和G等位基因的頻率分別為3.84%和96.16%；亞洲人種的基因型頻率分別為2.61%和97.39%；等位基因分布具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。我們基于9項(xiàng)病例-對(duì)照研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行了薈萃分析探討HIF1A A588T多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性的關(guān)系。薈萃分析結(jié)果表明二者之間無(wú)顯著相關(guān)性,顯性模型(AA+AG vs GG:OR=1.40.95%CI=0.76-2.58,Pheterogeneity=0.00,P=0.28)和等位基因模型(A vs G:OR=1.57,95%CI=0.89-2.76,Pheterogeneity=0.00,P=0.12).基于種族、癌癥類型、HWE狀態(tài)的差異,我們進(jìn)行亞組薈萃分析。研究結(jié)果表明A等位基因攜帶者患前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)比非A等位基因攜帶者高1.45倍(AA+AG vs GG:OR=1.45.95%CI=1.00-2.12,Pheterogeneity=0.50,P=0.05)；等位基因模型(A vs G:OR=1.41,95%CI=1.03-1.93,Pheterogeneity=0.22,P=0.03),符合HWE的研究(A vs G:OR=1.45,95%CI=1.00-2.11,Pheterogeneity=0.33,P=0.05)。HIF1A A588T多態(tài)性與亞洲人種泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性相關(guān)(A vs G:OR=1.46,95%CI=1.01-2.12,Pheterogeneity=0.49,P=0.04),其余亞組薈萃分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 顯著的異質(zhì)性存在于部分薈萃分析中(P0.10)。敏感性分析通過(guò)排除對(duì)照組不符合HWE的病例-對(duì)照研究進(jìn)行亞組薈萃分析實(shí)現(xiàn),敏感性分析結(jié)果：HIF1A P582S多態(tài)性與高加索人種(對(duì)照組符合HWE)泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性無(wú)關(guān),隱性模型(TT vs CT+CC:OR=1.57,95%CI=0.22-11.14,P_(heterogeneity)=0.04,P=0.65)；而其余亞組薈萃分析未檢測(cè)到顯著性差異。通過(guò)倒漏斗圖評(píng)估潛在的發(fā)表偏倚,結(jié)果表明沒(méi)有明顯不對(duì)稱,Begg's檢驗(yàn)結(jié)果亦顯示沒(méi)有發(fā)表偏倚(P0.05)。 結(jié)論 1.高加索人種與亞洲人種中,HIF1A P582S多態(tài)性基因型和等位基因分布頻率具有明顯差異,HIF1A A588T多態(tài)性基因型分布頻率無(wú)顯著差異,HIF1AA588T多態(tài)性等位基因分布頻率具有明顯差異。 2.HIF1AP582S多態(tài)性增加高加索人種泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性風(fēng)險(xiǎn)。 3.HIF1AA588T多態(tài)性增加亞洲人種泌尿系統(tǒng)腫瘤易感性風(fēng)險(xiǎn)。 4.HIFlAA588T多態(tài)性增加前列腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)。
【關(guān)鍵詞】：陰莖鱗狀細(xì)胞癌 肝癌衍生生長(zhǎng)因子 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 Ki-67 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 基因 多態(tài)性 腫瘤 薈萃分析
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.27
【目錄】：

• 目錄4-5
• CATALOGUE5-6
• 第一部分 HDGF在陰莖鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義6-45
• 中文摘要6-10
• ABSTRACT10-14
• 符號(hào)說(shuō)明14-15
• 前言15-19
• 材料與方法19-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 圖表32-38
• 參考文獻(xiàn)38-45
• 第二部分 HIF1A多態(tài)性與泌尿系統(tǒng)腫瘤的關(guān)系45-86
• 中文摘要45-49
• ABSTRACT49-54
• 符號(hào)說(shuō)明54-55
• 前言55-59
• 資料與方法59-61
• 結(jié)果61-66
• 討論66-70
• 結(jié)論70-71
• 圖表71-79
• 參考文獻(xiàn)79-86
• 致謝86-87
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄87-89
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的專利89-90
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表90-91
• 英文論文-191-109
• 英文論文-2109-128

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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3 石慧;吳玉t

本文編號(hào)：377216