本文關鍵詞：LncRNA在前列腺增生性炎性萎縮向前列腺癌惡性轉化過程中差異表達的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用微陣列基因芯片技術檢測前列腺癌(PCa)、前列腺增生性炎性萎縮(PIA)和癌旁非癌組織中差異表達的m RNA和lnc RNA。觀察前列腺惡性轉化過程中基因表達的動態(tài)變化,進而發(fā)現可能存在的前列腺非可控性炎癥至惡性癌變過程中的特征分子網絡,為PIA→PCa發(fā)病模式提供分子層面的新證據,以期為臨床前列腺癌的預防、診療,以及發(fā)病機制提供新理論及新方案。方法:收集2013年8月至2014年8月我院前列腺切除術后臨床組織標本共20例,通過改進標本獲取方式,運輸途徑,破碎方法三方面因素,建立從離體組織標本提取高質量總RNA的方法。隨后在此方法基礎上,通過冰凍切片結合手工顯微切割技術在同一前列腺組織標本中分離出PCa、PIA及癌旁非癌組織各區(qū)域的純凈細胞群。采用lnc RNA+m RNA表達譜芯片分析三者間的基因表達差異(生物學重復3次),通過生物信息學的方法篩選出具有顯著表達差異的m RNA和lnc RNA,并對結果進行Pathway分析等初步的生物信息學分析,反向Cis-預測lnc RNA的靶基因,在發(fā)生顯著變化的炎癥和/或癌癥通路上建立lnc RNA與靶基因的基因網絡圖。結果:1.前列腺癌根治術后獲取的離體組織標本,在30min內放入液氮凍存,經液氮研磨或冰凍切片均可以提取到高質量的總RNA(RIN7.5)。2.手工顯微切割獲取的組織,可通過Trizol法提取到滿足高通量微陣列技術要求的高質量RNA,但HE染色會降低RNA的完整性。3.基因表達譜芯片的結果顯示:人前列腺癌組織與癌旁非癌組織對照相比,有2610個m RNA表達有差異,其中上調689個,下調1921個;同時有2176個lnc RNA表達有差異,其中上調688個,下調1488個。人前列腺增生性炎性萎縮組織與癌旁非癌組織相比,有592個m RNA表達有差異,其中上調183個,下調409個;同時有575個lnc RNA表達有差異,其中上調160個,下調415個。人前列腺癌組織與前列腺增生性炎性萎縮組織相比,有1007個m RNA表達有差異,其中上調115個,下調892個;有773個lnc RNA表達有差異,其中上調105個,下調668個。在3種組織類型的共同比較中,有113個m RNA的表達存在顯著線性差異,其中上調8個,下調105個;有106個lnc RNA的表達也存在顯著線性差異,其中上調11個,下調95個。4.Pathway分析顯示,差異基因顯著富集在了22條信號通路上,其中有9條通路與炎癥和/或癌癥密切相關,這些通路在疾病的進展中發(fā)生了顯著的變化。結論:1.冰凍切片并HE染色結合“排除法”手工顯微切割技術,可經濟、有效地鑒定分離出目的細胞亞群,且通過Trizol法提取的總RNA能夠滿足高通量微陣列技術的質量要求。2.基因表達譜芯片是一種高通量篩選m RNA和lnc RNA表達差異的理想的技術手段。3.人前列腺癌組織,前列腺增生性炎性萎縮組織與癌旁非癌組織,三者在基因表達層面均存在顯著差異。眾多的差異分子發(fā)生交互作用,并與多種炎癥和/或癌癥相關的信號轉導通路緊密相連,預示著lnc RNA很可能在非可控性炎癥介導的惡性轉化中起著重要作用。lnc RNA可能成為前列腺癌全新的腫瘤標記物和潛在的治療靶點。
【關鍵詞】：前列腺癌 前列腺增生性炎性萎縮 炎癥 基因芯片 長鏈非編碼RNA
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料和方法14-23
• 2.1 實驗材料14
• 2.1.1 組織標本14
• 2.2 主要儀器和試劑14-16
• 2.2.1 主要儀器14-15
• 2.2.2 主要試劑15-16
• 2.3 研究方法16-22
• 2.3.1 高質量總RNA的提取16-17
• 2.3.1.1 實驗分組16
• 2.3.1.2 實驗器皿及試劑準備16
• 2.3.1.3 前列腺組織標本的取材16
• 2.3.1.4 總RNA提取16-17
• 2.3.1.5 RNA濃度、純度及完整性檢測17
• 2.3.2 PCa/PIA的鑒定及分離17-20
• 2.3.2.1 冰凍切片并H&E染色17-18
• 2.3.2.2 標本的病理觀察及PCa/PIA的診斷18-19
• 2.3.2.3 手工顯微切割分離PIA/PCa及癌旁非癌組織19
• 2.3.2.4 提取均一的總RNA19-20
• 2.3.3 基因表達分析20-22
• 2.3.3.1 芯片制備20-21
• 2.3.3.2 芯片數據分析21-22
• 2.4 統(tǒng)計分析22-23
• 第3章 結果23-37
• 3.1 RNA質量控制23-26
• 3.1.1 大體觀察結果23
• 3.1.2 紫外分光光度計掃描結果23
• 3.1.3 甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳結果23-24
• 3.1.4 Agilent 2100樣品質檢結果24-26
• 3.2 鏡下組織學表現26-29
• 3.2.1 正常前列腺上皮的鏡下表現26-27
• 3.2.2 PIA組織的病理表現27-28
• 3.2.3 PCa組織的病理表現28-29
• 3.3 芯片結果29-37
• 3.3.1 基因表達譜雜交圖29-30
• 3.3.2 基因表達譜散點圖30-31
• 3.3.3 基因表達差異31-32
• 3.3.4 聚類分析32
• 3.3.5 KEGG分析32-34
• 3.3.6 以m RNA為入口的反向lnc RNA預測34-36
• 3.3.7 選取基因36-37
• 第4章 討論37-42
• 4.1 炎癥、PIA和PCa三者間的關系37-38
• 4.2 高通量微陣列技術的應用38-39
• 4.3 芯片結果和腫瘤的關系39-42
• 第5章 結論42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-49
• 攻讀學位期間的研究成果49-50
• 綜述50-56
• 參考文獻54-56

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 YANG Li;WEI Gang;TANG Kun;NARDINI Christine;HAN Jing-Dong J.;;Understanding human diseases with high-throughput quantitative measurement and analysis of molecular signatures[J];Science China(Life Sciences);2013年03期

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3 孫穎浩;;前列腺癌診治進展[J];上海醫(yī)學;2011年07期

中國碩士學位論文全文數據庫 前1條

1 呂驥;PlncRNA-1通過與雄激素受體相互作用調節(jié)前列腺癌細胞增殖和凋亡[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

  本文關鍵詞：LncRNA在前列腺增生性炎性萎縮向前列腺癌惡性轉化過程中差異表達的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：375912