男性不育主要與遺傳缺陷,環(huán)境毒物和具有生殖毒性的醫(yī)學(xué)治療等有關(guān)。男性不育的病因是精子產(chǎn)生或精子運(yùn)輸異常,其中精原干細(xì)胞功能受損導(dǎo)致精子發(fā)生異常是主要原因。白消安（Busulfan）早期主要作為傳統(tǒng)化療藥,目前廣泛應(yīng)用于慢性髓性白血病患者造血干細(xì)胞移植的預(yù)處理,它雖然能提高患者生存率,但會通過損傷睪丸并減少精子數(shù)量導(dǎo)致男性不育。因此,研究白消安損傷睪丸機(jī)理,并尋找新的方法減少其副作用是十分必要的。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）在正常生理?xiàng)l件下的主要作用是維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài),但是,持續(xù)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激會引起癌癥、炎癥、神經(jīng)退行性疾病和代謝性疾病等。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在發(fā)育、代謝和免疫等方面的重要作用已在多種細(xì)胞類型中得到證實(shí)。干細(xì)胞具有自我更新和分化成各種細(xì)胞的能力。干細(xì)胞存在于各個組織中,參與發(fā)育、組織更新以及某些疾病過程。精原干細(xì)胞是精子發(fā)生和雄性生殖的關(guān)鍵。雖然有研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起的凋亡可能與某些環(huán)境毒物有關(guān),但是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在精原干細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制還未闡明。褪黑素是由松果體合成的一種吲哚類激素,它具有抗氧化、抗炎和抗腫瘤等作用。褪黑素能與特定的... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻(xiàn)綜述
    第一章 褪黑素在精原干細(xì)胞和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的研究進(jìn)展
        1.1 精原干細(xì)胞與雄性生殖
            1.1.1 精原干細(xì)胞
            1.1.2 精子發(fā)生
            1.1.3 雄性生殖調(diào)控
        1.2 褪黑素
            1.2.1 褪黑素的特點(diǎn)
            1.2.2 褪黑素的作用
            1.2.3 褪黑素的受體及信號通路
            1.2.4 褪黑素與雄性生殖
            1.2.5 褪黑素在干細(xì)胞中的應(yīng)用
        1.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            1.3.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的分子機(jī)制
            1.3.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與雄性生殖
            1.3.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在干細(xì)胞中的作用
        小結(jié)
試驗(yàn)研究
    第二章 白消安對小鼠睪丸和精原干細(xì)胞的影響
        2.1 材料
            2.1.1 試驗(yàn)材料
            2.1.2 試驗(yàn)試劑
            2.1.3 試驗(yàn)儀器
        2.2 方法
            2.2.1 主要試劑配制方法
            2.2.2 睪丸形態(tài)學(xué)分析
            2.2.3 睪丸石蠟切片制作
            2.2.4 小鼠睪丸組織切片HE染色
            2.2.5 提取睪丸組織總RNA
            2.2.6 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
            2.2.7 實(shí)時熒光定量PCR
            2.2.8 小鼠睪丸組織的蛋白樣提取
            2.2.9 Westernblotting檢測
            2.2.10 小鼠睪丸組織切片特異性蛋白免疫熒光染色分析
            2.2.11 小鼠精原干細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
            2.2.12 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞凋亡檢測
            2.2.13 細(xì)胞免疫熒光染色
            2.2.14 數(shù)據(jù)處理
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 白消安造成小鼠睪丸損傷和生殖細(xì)胞退化
            2.3.2 白消安引起睪丸中生殖細(xì)胞凋亡
            2.3.3 白消安造成小鼠精原干細(xì)胞凋亡
            2.3.4 白消安引起小鼠睪丸發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 褪黑素緩解白消安引起的小鼠睪丸損傷和精原干細(xì)胞凋亡機(jī)理
        3.1 材料
            3.1.1 試驗(yàn)材料
            3.1.2 試驗(yàn)試劑
            3.1.3 試驗(yàn)儀器
        3.2 方法
            3.2.1 主要溶液的配制
            3.2.2 試驗(yàn)分組及處理
            3.2.3 精子吉姆薩染色
            3.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
            3.2.5 EdU細(xì)胞增殖檢測
            3.2.6 細(xì)胞免疫熒光染色
            3.2.7 細(xì)胞鈣離子檢測
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 褪黑素能夠緩解白消安引起的小鼠睪丸損傷
            3.3.2 褪黑素能夠促進(jìn)小鼠睪丸和精原干細(xì)胞中褪黑素受體的表達(dá)
            3.3.3 褪黑素能夠抑制小鼠睪丸中生殖細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            3.3.4 褪黑素能夠緩解小鼠睪丸中生殖細(xì)胞的凋亡
            3.3.5 褪黑素抑制白消安引起的小鼠精原干細(xì)胞凋亡
            3.3.6 褪黑素能夠促進(jìn)小鼠精原干細(xì)胞增殖
            3.3.7 褪黑素能夠抑制精原干細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路的激活
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
下一步研究課題
參考文獻(xiàn)
附錄 1
附錄 2
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與哺乳動物雄性生殖[J]. 崔艷華,華進(jìn)聯(lián),彭莎.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2016(08)



本文編號：3715874