本文關(guān)鍵詞：腎細(xì)胞癌中WNK2基因甲基化狀態(tài)與mRNA表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腎細(xì)胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一,其惡性程度較高,易發(fā)生轉(zhuǎn)移,近年來其發(fā)病率仍處于上升趨勢。目前,RCC的發(fā)病機(jī)制還未完全清楚,流行病學(xué)調(diào)查研究顯示:吸煙、肥胖、高血壓、糖尿病、遺傳等因素可能與腎細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān)。抑癌基因的失活是惡性腫瘤發(fā)生的重要原因之一。隨著表觀遺傳學(xué)的不斷發(fā)展,目前發(fā)現(xiàn)多種表觀遺傳學(xué)修飾方式,主要包括DNA甲基化、組蛋白修飾、染色質(zhì)重塑和RNA干擾等,其中DNA甲基化是最重要的修飾方式之一。許多觀點(diǎn)認(rèn)為,抑癌基因的失活與DNA啟動子區(qū)異常甲基化密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),幾乎所有蛋白激酶在激酶結(jié)構(gòu)域第2亞單位有一個高度保守的賴氨酸,但在WNK激酶中缺失此賴氨酸,因此得名With no K kinase(K代表賴氨酸),縮寫為WNK。WNK2是WNK家族成員之一,位于人類染色體9q22.31,是新發(fā)現(xiàn)的一個抑癌基因。WNK2基因主要通過表皮生長因子(Epidermal growth factor,EGF)介導(dǎo)的Ras/Raf/絲裂原激活蛋白激酶的激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)/細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信號傳導(dǎo)通路和Rac/p21活化激酶(p21 activated kinase,PAK)信號傳導(dǎo)通路之間的串話機(jī)制來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期。最初在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中發(fā)現(xiàn)WNK2基因啟動子區(qū)高甲基化導(dǎo)致其表達(dá)沉默,隨后在腦膜瘤、胰腺導(dǎo)管腺癌中也發(fā)現(xiàn)了WNK2基因啟動子區(qū)的高甲基化。但是,WNK2基因與RCC之間的相關(guān)研究還未見報(bào)道。本課題以RCC組織、癌旁組織及正常腎組織為標(biāo)本,研究WNK2基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)及m RNA表達(dá)水平,同時分析它們與臨床數(shù)據(jù)之間的關(guān)系,探討WNK2基因在RCC發(fā)生及發(fā)展中的作用,目地為RCC的病因、臨床診斷和治療提供新的思路。方法:1 WNK2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)檢測:應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Methylation Specific PCR,MSP)法檢測58例RCC組織及相對應(yīng)的癌旁組織和正常腎組織中WNK2基因的甲基化狀態(tài),并分析WNK2基因的異常甲基化在RCC發(fā)生、發(fā)展中的作用以及與臨床數(shù)據(jù)間的關(guān)系。2 WNK2基因的m RNA相對表達(dá)量檢測:采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reverse Transcriptase-PCR,RT-PCR)法檢測WNK2基因m RNA在58例RCC組織及相對應(yīng)的癌旁組織和正常腎組織中的相對表達(dá)量,并分析在RCC組織中WNK2基因m RNA相對表達(dá)量和臨床數(shù)據(jù)間的關(guān)系。3采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS20.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果:1 RCC組織中WNK2基因甲基化狀態(tài)RCC組織中WNK2基因甲基化狀態(tài)有三種:即完全甲基化、半甲基化、完全非甲基化。2 RCC組織、癌旁組織和正常腎組織中WNK2基因甲基化狀態(tài)及與臨床資料之間的關(guān)系2.1 RCC組織、癌旁組織和正常腎組織中WNK2基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)及比較在58例RCC組織、58例癌旁組織和58例正常腎組織中WNK2基因啟動子區(qū)甲基化陽性率分別為65.5%(38/58),34.4%(20/58),10.3%(6/58),三組間存在明顯差異(X2=38.161,P=0.000)。RCC組織的甲基化陽性率明顯高于癌旁組織(X2=11.172,P=0.001)及正常組織(X2=37.495,P=0.000)。2.2 RCC組織中WNK2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)在不同臨床資料間的比較WNK2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)在性別(P=0.820)、年齡(P=0.134)、分期(P=1.000)、腫瘤大小(P=0.718)這些不同臨床資料之間的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均大于0.05)。3 58例RCC組織、58例癌旁組織和58例正常腎組織中WNK2基因m RNA的相對表達(dá)量,以及RCC組織中WNK2基因m RNA相對表達(dá)量與臨床資料之間的關(guān)系3.1在58例RCC組織、58例癌旁組織和58例正常腎組織中WNK2基因相對表達(dá)量分別為0.54±0.03、0.66±0.05、0.68±0.03,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,三組之間有顯著差異(P0.05)。WNK2基因m RNA在RCC組織中的相對表達(dá)量明顯低于癌旁組織(P0.05)及正常腎組織(P0.05)。3.2 WNK2基因的m RNA相對表達(dá)量與性別(P=0.142)、年齡(P=0.217)、腫瘤大小(P=0.145)這些不同臨床資料之間的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均大于0.05)。4在RCC組織中,WNK2基因m RNA的相對表達(dá)量在甲基化陽性病例中為0.52±0.04低于甲基化陰性病例中m RNA的相對表達(dá)量0.57±0.02,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1在正常腎組織、癌旁組織和RCC組織中,WNK2啟動子區(qū)甲基化陽性率呈升高趨勢,提示W(wǎng)NK2基因啟動子區(qū)的異常甲基化可能參與RCC的發(fā)生。2在正常腎組織、癌旁組織和RCC組織中,WNK2基因m RNA相對表達(dá)量呈下降趨勢,提示W(wǎng)NK2基因m RNA的表達(dá)下調(diào)可能參與RCC的形成。3在RCC組織中,甲基化陽性組中WNK2基因m RNA的相對表達(dá)量低于甲基化陰性組中m RNA的相對表達(dá)量,并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示W(wǎng)NK2基因啟動子區(qū)高甲基化可能是導(dǎo)致其m RNA表達(dá)的降低的原因之一。
【關(guān)鍵詞】：腎細(xì)胞癌 WNK2 甲基化 表達(dá) 腫瘤發(fā)生機(jī)制 抑癌基因
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-25
• 附表25-28
• 討論28-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述 抑癌基因WNK2 與惡性腫瘤的研究進(jìn)展37-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊建樹;李健寧;徐忠法;;Rac/PAK信號通路與腫瘤的關(guān)系及其在結(jié)直腸癌中的研究進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2014年01期

  本文關(guān)鍵詞：腎細(xì)胞癌中WNK2基因甲基化狀態(tài)與mRNA表達(dá)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：361224