背景:腹膜纖維化（peritoneal fibrosis,PF）是長期腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）治療最重要的并發(fā)癥之一。目前PF發(fā)病機制復(fù)雜,且尚無有效的治療手段。倍半萜內(nèi)酯類衍生物DMAMCL是一個安全性高、治療窗口廣、具有良好的抗炎抗纖維化效果的新型化合物。DMAMCL對PF的影響及相關(guān)機制迄今未見報道。（一）DMAMCL對PF的影響目的:從體內(nèi)外兩個水平探究DMAMCL對PF的影響。方法:（1）體內(nèi)水平:①建立小鼠PF模型,并隨機分為:正常組、PD14天組、PD28天組（即模型組）、DMAMCL早期干預(yù)組、DMAMCL延遲干預(yù)組。28天后收集標(biāo)本;②通過馬松染色檢測壁層腹膜的厚度;Western Blot、QPCR以及免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC）檢測腹膜Fibronectin、Collagen I、E-cadherin、α-SMA的表達水平。（2）體外水平:使用轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）干預(yù)人腹膜間皮細胞（HMrSV5）,并同時給予不同濃度的MCL（DMAMCL的體內(nèi)有效活性成分）刺激... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－４?ＭＣＬ可逆轉(zhuǎn)ＥＭＴ，減少ＥＣＭ沉積

Ｉ的表達不斷增高（圖１－２Ｃ），提示ＰＦ在進展；而我們發(fā)現(xiàn)，作為反映細胞自噬??情況的重要指標(biāo)，ＬＣ３，在ＰＦ進展過程中，ＬＣ３－ＩＩ的表達水平表現(xiàn)為先升高后??降低的有趣現(xiàn)象（圖２－１Ａ），這提示自噬與小鼠ＰＦ有密切的相關(guān)性，在ＰＦ發(fā)??生發(fā)展中，自噬減少，纖維化出現(xiàn)加重。??為探究自噬在ＰＦ中的作用，我們使用了國際上公認的自噬誘導(dǎo)劑ＲＡＰＡ和??自噬抑制劑３＾１八。＇＾５１６１１１６１（＾結(jié)果（圖２－１丑、２－卟）顯示，模型組１＾：３－１１的??表達水平與正常組對比明顯下調(diào)，提示在小鼠ＰＦ模型里，自噬表現(xiàn)為抑制的趨??勢；３ＭＡ干預(yù)組的ＬＣ３－ＩＩ的表達水平進一步下調(diào)，提示自噬抑制劑起作用，進??一步下調(diào)自噬水平；ＲＡＰＡ干預(yù)組的ＬＣ３－ＩＩ的表達水平升高，提示自噬誘導(dǎo)劑??起作用，成功上調(diào)自噬水平。??馬松染色結(jié)果（圖２－１Ｂ、２－１Ｄ）顯示

５４．８３７４±９．１５８７３ｎｍ，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。以上結(jié)果提示ＤＭＡＭＣＬ??上調(diào)細胞自噬的特性在其對ＰＦ的抑制作用中起到一定的作用。進一步實驗，我??們采用免疫組織化學(xué)染色實驗（圖２－２Ｄ），結(jié)果提示，３ＭＡ干預(yù)組和模型組對??比，腹膜層的Ｃｏｌａｇｅｎ?Ｉ和Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表達水平無明顯變化；ＤＭＡＭＣＬ千預(yù)組??的腹膜層的Ｃｏｌａｇｅｎ?Ｉ和Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表達水平明顯比模型組要低，但ＤＭＡＭＣＬ??和３ＭＡ聯(lián)合干預(yù)組和單獨ＤＭＡＭＣＬ干預(yù)組對比，腹膜層的Ｃｏｌａｇｅｎ?Ｉ和??Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表達水平有升高；此外，ＤＭＡＭＣＬ和３ＭＡ聯(lián)合干預(yù)組和３ＭＡ千預(yù)??組對比，腹膜層的Ｃｏｌａｇｅｎ?Ｉ和Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表達水平降低。同樣，Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??結(jié)果（圖２－２Ｆ、２－２Ｇ）得到的結(jié)果與免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果相一致。??１．５－］?ＬＣ３－ＩＩ／ＡＣＴＢ??Ａ?ＰＤ?曲ｙ２８?�。。枺�?＝??Ｎｏｒｍａｌ?Ｖｅｈｉｃｌｅ?ＤＭＡＭＣＬ?■■?★＊?｜Ｍ｜｜??ＬＬｃＣ３３ｌ＝：?＝?＝?ｒ－二二ｇ■??ＡＣ七一—？一一《＿．?〇〇ＫｎｌＥ－ＳＥｃＬ??ＰＤ?ｄａｙ?２８??Ｂ???ＰＤ?ｄａｙ?２８????ＣＦ，?１?｜ｌ?Ｉ?■??｜?ｖ—?Ｓｍｃｌ??ｎ?ＰＤ?ｄａｙ?２８???Ｕ

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3610987