發(fā)布時間：2022-01-15 07:46

　　前列腺癌在全球新發(fā)惡性腫瘤中居第二位，在發(fā)達(dá)國家中則位于第一位。我國前列腺癌的檢出率上升很快，應(yīng)該受到重視。前列腺干細(xì)胞抗原（prostate stem cell antigen，PSCA）是Reiter等發(fā)現(xiàn)的一種前列腺癌相關(guān)蛋白，是表達(dá)在前列腺上皮細(xì)胞表面的含123個氨基酸殘基的GPI錨定蛋白。由于PSCA具有較高的前列腺組織特異性，其蛋白質(zhì)分子錨定在細(xì)胞表面而非分泌形式，因此PSCA可作為前列腺癌診斷及免疫治療的潛在靶標(biāo)而受到廣泛關(guān)注。本研究的目標(biāo)是基于國內(nèi)外的研究現(xiàn)狀和本室的研究基礎(chǔ)，期望研制抗人前列腺干細(xì)胞抗原單克隆抗體。研究內(nèi)容包括，首先采用雜交瘤技術(shù)制備抗人前列腺干細(xì)胞抗原的單克隆抗體，然后進(jìn)行篩選以得到結(jié)合細(xì)胞表面PSCA活性的單克隆抗體，再在小鼠模型中評價其抑瘤活性和建立診斷前列腺癌的免疫組化方法。同時，擴(kuò)增抗體的可變區(qū)基因，進(jìn)行單鏈抗體的相關(guān)研究。對于抗人前列腺干細(xì)胞抗原單克隆抗體的制備，抗原的選擇與制備是篩選得到活性抗體的關(guān)鍵。首先根據(jù)文獻(xiàn)選取PSCA分子全長的21-101位氨基酸，構(gòu)建了含GST標(biāo)簽和His標(biāo)簽的PSCA融合蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒，GST可以增加可溶... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

pET-42a(+)-GST-PSCA-His質(zhì)粒模式圖和GST-PSCA-His的表達(dá)載體鑒定電泳圖

圖 1-2 SDS-PAGE 分析 GST-PSCA-His 的表達(dá)M：Molecular weight maker；1：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，誘導(dǎo)；2：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，未誘導(dǎo)；3：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，超聲后沉淀；4：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，超聲后上清；5：BL21(DE3)/pET-42a(+)-GST-PSCA-His，全菌；

PSCA mAb 的篩選實(shí)驗(yàn)以 PSCA 重組蛋白為免疫原，常規(guī)免疫 BALB/c 小鼠，采用 B 淋巴細(xì)進(jìn)行細(xì)胞融合，以 GST-PSCA-His 和 GST-His 為抗原，用 ELISA 篩選得到單抗的雜交瘤細(xì)胞克隆，共獲得 6 株分泌抗 PSCA mAb 的雜交瘤細(xì)胞。于 個月以上，多次復(fù)蘇傳代仍能穩(wěn)定分泌抗體，用 ELISA 測定效價均未降 PSCAmAb 的純化和亞型交瘤細(xì)胞株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后，大量制備腹水，并用 rProtein A 柱進(jìn)行純化(體的還原型 SDS-PAGE 如圖 2-2 所示，結(jié)果顯示獲得較高純度的 PSCA 抗鏈位置的不同表明了單抗之間存在差異。亞類(型)分析結(jié)果顯示，4 株抗3#、61#)重鏈亞類為 IgG2b，2 株(24#、31#)為 IgG1，輕鏈全部為 κ 型(見圖測定抗體濃度并調(diào)整為 2mg/mL，以 ELISA 法測定效價結(jié)果顯示均在 1抗 PSCAmAb 的亞型與效價鑒定結(jié)果見表 2.1。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]前列腺癌診治進(jìn)展[J]. 孫穎浩.  上海醫(yī)學(xué). 2011(07)
[2]前列腺特異性膜抗原在前列腺癌患者外周血和組織中的表達(dá)及意義[J]. 王慧萍,徐蕾,宋黎明,于和鳴,邢念增.  中國腫瘤臨床與康復(fù). 2010(02)



本文編號：3590210