發(fā)布時間：2022-01-15 06:51

　　研究背景:最初,外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞垃圾。后來,隨著外泌體參與細(xì)胞間的交流的功能被發(fā)現(xiàn),大量外泌體對其受體細(xì)胞的影響的研究涌出,但外泌體對供體細(xì)胞的影響尚不清楚。已有研究證明在不同刺激下近端腎小管上皮細(xì)胞分泌的外泌體會促進(jìn)急慢性腎臟疾病的進(jìn)展。研究目的:本研究旨在探討抑制腎小管上皮細(xì)胞中外泌體分泌關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因Rab27a的表達(dá)進(jìn)而抑制對其供體細(xì)胞腎小管上皮細(xì)胞炎癥因子的分泌是否能改善糖尿病腎病炎癥。研究方法及結(jié)果:首先我們證明了沉默Rab27a抑制外泌體分泌可以抑制牛血清白蛋白（BSA）誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞炎癥因子的分泌,進(jìn)一步我們在HFD/STZ誘導(dǎo)12周的糖尿病小鼠模型中通過免疫組織化學(xué)染色再次驗證了糖尿病小鼠腎臟中Rab27a的表達(dá)是明顯升高的,同時炎癥指標(biāo)IL-6和TNF-α以及纖維化指標(biāo)COL-1表達(dá)的水平也都是顯著升高的。此外,我們也證明了在BSA的刺激下腎小管上皮細(xì)胞分泌的外泌體中miR-26a-5p的表達(dá)是明顯升高的,而細(xì)胞中miR-26a-5p的表達(dá)也是相應(yīng)的降低了,而在BSA刺激下抑制Rab27a的表達(dá)后miR-26a-5p在腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)相較于BSA組明顯升... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯示不同ｓｉＲａｂ２７ａ轉(zhuǎn)染ＨＫ－２細(xì)胞后Ｒａｂ２７ａ?ｍＲＮＡ表達(dá)水平??

第一章通過抑制外泌體關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子Ｒａｂ２７ａ的表達(dá)進(jìn)而抑制ＨＫ－２細(xì)胞炎癥因子的分泌??圖１－２?ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯示在ＢＳＡ刺激下將ｓｉＲａｂ２７ａ轉(zhuǎn)染到ＨＫ－２細(xì)胞后Ｒａｂ２７ａ?ｉｎＲＮＡ的表??達(dá)水平??Ｆｉｇｕｒｅ．?１－２?Ｒａｂ２７ａ?ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＨＫ－２?ｃｅｌｌ?ｂｙ?ＢＳＡ?ｓｔｉｍｕｌｉ?ｏｒ?ｓｉＲａｂ２７ａ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ??ｑＲＴ－ＰＣＲ?＊ｐ＜０．０５?ｖｅｒｓｕｓ?ｓｉＮＣ，＃ｐ＜０．０５?ｖｅｒｓｕｓ?ＢＳＡ＋ｓｉＮＣ?ｇｒｏｕｐ??３．?３為了探索沉默外泌體關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因Ｒａｂ２７ａ的表達(dá)對糖尿病腎病炎癥的影響，??我們在轉(zhuǎn)染ｓｉＲａｂ２７ａ２４小時后再用ｌＯｍｇ／ｍｌＢＳＡ刺激２４小時后結(jié)果顯示在ＢＳＡ??刺激下炎癥指標(biāo)ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ?ｍＲＮＡ水平都都明顯升高，而敲除Ｒａｂ２７ａ后炎癥??因子ＩＬ－６和ＴＮＦ－?ａ的ｍＲＮＡ水平明顯受到了明顯的抑制（圖１－３，表１－３）。??表１－３在ＢＳＡ刺激的情況下沉默Ｒａｂ２７ａ后ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ?ｍＲＮＡ的表達(dá)水平??Ｔａｂｌｅ．?１－３?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ＩＬ－６?ａｎｄ?ＴＮＦ－ａ?ｍＲＮＡ?ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｓｉＲａｂ２７ａ?ｕｎｄｅｒ?ｔｈｅ??ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＢＳＡ??ｓｉＮＣ?ＢＳＡ?ｓｉＲａｂ２７ａ?ＢＳＡ＋ｓｉＲａｂ２７ａ?Ｆ?值?Ｐ?值??ＩＬ－６?ｍＲＮＡ?１．０００?士?７．５１４?士?０．４９５６?±?３．１４０?土?４４．２１?＜０．０００１??０．０４６４６?０．９３５７＊＊?０．０１７９７＊＊?０．２１６１＃??ＴＮ

臟??中糖原的沉積明顯升高，在本實驗中我們觀察到炎癥因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ａ及纖維??化指標(biāo)Ｃ０Ｌ１也是相應(yīng)的升高，進(jìn)一步我們也觀察到Ｒａｂ２７ａ的大量堆積（圖卜５）。??Ｑ?Ｒａｂ２７ａ?ＴＬ６?ＴＮＦａ?Ｃｏｌｌ??ｄ．??＼＇－廣」?：??＼ｒ?，?．．?－?－?－?ｖ；?ｒ．ｊ．：；：??＼?么．?＇?＇?入八：．；．．．．＇??．?■?．?＂?：?■?．?．?？－??：．＇?乂?…＇??ｌ）Ｋ１）?ｆ；．．．；?，、??■??圖１－５免疫組織化學(xué)染色顯示Ｒａｂ２７ａ、ＴＮＦ－ｃｕ?ＩＬ－６ａｎｄＣＯＬ－ｌ的表達(dá)水平??Ｆｉｇｕｒｅ．１－５?Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?Ｒａｂ２７ａ＞?ＴＮＦ－ａ＞?ＩＬ－６?ａｎｄ?ＣＯＬ－ｌ（＊ｐ＜０．０５?ｖｅｒｓｕｓ??ＮＣ）??第四節(jié)討論??外泌體最近作為一種治療手段被廣泛研宄，但由于其價格昂貴、操作復(fù)雜，??且對其進(jìn)行修飾更是一項高精尖的技術(shù)這些問題尚未解決還存在一些技術(shù)難??題。而將直接抑制外泌體的分泌作為一種治療手段，其敲除基因的技術(shù)己經(jīng)很??成熟，并且操作也比較簡便，故對抑制外泌體關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因進(jìn)而抑制外泌體的??分泌的探索是非常有價值的。??在糖尿病腎病患者中己經(jīng)被證明患者尿液中的外泌體明顯增多，并且在急??慢性腎病當(dāng)中發(fā)現(xiàn)腎小球、足細(xì)胞及腎小管分泌的外泌體的量都是明顯增多的，??＇?１４??


本文編號：3590128