研究目的:血管鈣化（Vascular calcification,VC）是慢性腎臟�。–KD）患者常見的臨床表現(xiàn)之一。但是,目前尚無可靠的早期生物標(biāo)記物,這給血管鈣化的防治帶來了困難。我們通過Label-free蛋白質(zhì)組學(xué)在高磷誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（RASMCs）模型中篩選出具有顯著差異表達(dá)的分子BRG1。BRG1又叫Smarca4,是SWI/SNF復(fù)合物的核心催化亞基,它通過改變基因周圍的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)來調(diào)節(jié)這些基因的轉(zhuǎn)錄活性,并調(diào)控細(xì)胞周期、增殖和分化,但其在血管鈣化中的作用尚不清楚。鑒于此,本研究將觀測BRG1在血管鈣化中的表型,著重闡釋BRG1影響血管鈣化的可能機(jī)制,為尋找血管鈣化早期生物標(biāo)記物打下基礎(chǔ)。研究方法:1.構(gòu)建高磷誘導(dǎo)的RASMCs鈣化模型,用Von-Kossa染色、RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)篩選最佳的建模條件。2.對正常和鈣化RASMCs進(jìn)行Label-free蛋白質(zhì)組學(xué)檢測,篩選具有差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。3.對BRG1的表達(dá)進(jìn)行體內(nèi)驗(yàn)證。構(gòu)建終末期腎臟病（ESRD）血管鈣化動(dòng)物模型,并收集臨床ESRD血管鈣化患者和正常人的動(dòng)脈血管組織,RT-PCR... 

【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

高磷成功誘導(dǎo)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞發(fā)生鈣化

第二章BRG1在血管鈣化中的作用23(a)(b)(c)圖2-2Label-free蛋白質(zhì)組學(xué)篩選鈣化指標(biāo)。(a)正常RASMCs和鈣化RASMCs的Von-Kossa染色；(b)正常RASMCs和鈣化10天RASMCs中OPN、Runx2和Rankl的WesternBlot圖像；(c)正常RASMCs和鈣化10天RASMCs中FGF23、Klotho和iPTH的mRNA表達(dá)水平因此，我們對正常RASMCs和鈣化RASMCs進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)，以篩選出對血管鈣化具有調(diào)控作用的蛋白分子。在聚類分析結(jié)果中，我們共對113個(gè)重要蛋白質(zhì)進(jìn)行了分組，在鈣化組，有57個(gè)蛋白分子表達(dá)下調(diào)（藍(lán)色部分），56個(gè)蛋白分子表達(dá)上調(diào)（紅色部分）。因篩選出的蛋白質(zhì)數(shù)量較多，所以圖中沒有對蛋白質(zhì)的名稱進(jìn)行標(biāo)注。缺失值以“-”表示。Control組和CAL組分別有三組重復(fù)樣品（見圖2-3）。其中，差異倍數(shù)>1.2（p<0.05）或<-1.2（p<0.05）被認(rèn)為是有意義的差異表達(dá)蛋白。圖中一個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)蛋白分子。X軸表示差異變化倍數(shù)（FoldChange,FC），Y軸表示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值的-log10）。水平虛線以下為無意義蛋白質(zhì)，以上為有意義蛋白質(zhì)。兩個(gè)垂直虛線表示下/上調(diào)的蛋白質(zhì)（見圖2-4）。在所有上調(diào)的差異蛋白分子中，BRG1的差異表達(dá)倍數(shù)為2.72（p＝0.01），高于

電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文24上調(diào)蛋白分子的平均差異表達(dá)倍數(shù)2.0。對這113個(gè)差異蛋白分子進(jìn)行了GO分析。生物信息學(xué)分析表明，這些蛋白質(zhì)主要參與胎盤血管的發(fā)育和肝臟的再生，主要的分子功能是細(xì)胞粘附分子的結(jié)合（見圖2-5（a））。接著，使用STRINGdb數(shù)據(jù)庫搜索上面篩選出的蛋白質(zhì)，從而觀察差異蛋白分子之間的相互作用。包括直接（物理）作用和間接（功能）作用。該結(jié)果主要源于計(jì)算預(yù)測、生物之間的知識轉(zhuǎn)移以及其他（主要）數(shù)據(jù)庫的交互作用。每條彩色線代表不同的相互作用，紅色表示基因融合，綠色表示基因鄰域，藍(lán)色表示共作用，紫色表示經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定，淺藍(lán)色表示經(jīng)數(shù)據(jù)庫篩選，黑色表示共表達(dá)，淺紫色表示蛋白質(zhì)同源。紅色背景為蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)，綠色背景為蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)。如圖2-5（b）所示，主要展示了在鈣化組中上調(diào)的BRG1與其他蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)果。圖2-3CAL組與Control組中差異表達(dá)蛋白質(zhì)的聚類熱圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]線粒體自噬的研究進(jìn)展[J]. 胡磊,戴海明.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2018(04)



本文編號：3587309