發(fā)布時(shí)間：2017-05-12 00:14

  本文關(guān)鍵詞：MiR-26ab通過(guò)靶基因PTEN調(diào)控雄激素信號(hào)通路抑制前列腺癌細(xì)胞增殖的效應(yīng)與機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:通過(guò)臨床樣本miRNA表達(dá)差異篩選出靶標(biāo)miRNA目的:探究前列腺良性肥大(prostatic hyperplasia,PH)臨床樣本、癌旁組織(Pericarcinoma,PC)臨床樣本、良性前列腺肥大(Benign prostatic hyperplasia,BPH)臨床樣本和去勢(shì)抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)臨床樣本中miRNA的表達(dá)的差異,并篩選出目標(biāo)miRNA。方法:提取6例前列腺良性增生樣本和18例原發(fā)性前列腺癌標(biāo)本,以及10例前列腺增生樣本和22例CRPC腫瘤樣本中的總RNA。使用miRNA微陣列v2芯片對(duì)總RNA中的miRNA進(jìn)行分析,每個(gè)樣本中的miRNA用雜交試劑盒表達(dá),分析表達(dá)后miRNA之間顯著差異,篩選出靶標(biāo)miRNA。結(jié)果:檢測(cè)到723個(gè)人miRNA,其中有339個(gè)miRNA(47%)有顯著差異,其中,在CRPC中,mi RNA-32,mi RNA-590-5p和mi RNA-21有機(jī)顯著的過(guò)度表達(dá),而miRNA-99a,mi RNA-221和miRNA-26ab有顯著的抑制。miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221在CRPC中發(fā)現(xiàn)有特異性表達(dá)但在PC中卻沒(méi)有顯著差異。結(jié)論:由于miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221在CRPC中發(fā)現(xiàn)有特異性表達(dá)而在PC中卻沒(méi)有顯著差異,所以在此可以確定miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221與CRPC表達(dá)有關(guān)聯(lián)。因?yàn)閙i RNA-21和miRNA-221之前已顯示與雄性激素調(diào)節(jié)相關(guān)并且在CRPC中也有所涉及。最終,miRNA-26ab被選取用于進(jìn)一步大的研究。第二部分:對(duì)mi RNA的鑒定以及在AR信號(hào)通路中的作用機(jī)制的初步探討目的:通過(guò)轉(zhuǎn)染LNCa P細(xì)胞株,探究mi RNA在前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期中的作用,以及確定mi RNA-26ab的靶基因,最后明確mi RNA與AR信號(hào)通路之間的相互關(guān)系。方法:①首先對(duì)mi RNA-26ab轉(zhuǎn)染的LNCa P細(xì)胞運(yùn)用熒光檢測(cè),之后用流式細(xì)胞儀分析檢測(cè)生長(zhǎng)周期各階段細(xì)胞數(shù)量。②第二步,將mi RNA-26ab與PTEN基因片段結(jié)合,并使用熒光定量PCR來(lái)定量,mi RNA-26ab-PTEN在克隆到載體p SGG-3UTR質(zhì)粒上,并使用熒光素酶法檢測(cè)表達(dá)情況。③最后利用western-blot技術(shù)檢測(cè)mi RNA-26ab對(duì)AR信號(hào)通路的影響。結(jié)果:①mi RNA-26ab的mi RNA前體被轉(zhuǎn)染進(jìn)入親代LNCa P細(xì)胞。mi RNA-26ab以時(shí)間依賴方式顯著的減少了LNCa P細(xì)胞的生長(zhǎng)率(P0.05)。②前體mi RNA-26ab轉(zhuǎn)染的LNCa P細(xì)胞被用于m RNA微陣列分析結(jié)果,結(jié)果五個(gè)基因(PTEN,FBN1,REBB,TPM1,E2F1)顯示出大約5倍數(shù)的變化。其中,PTEN被預(yù)測(cè)為mi RNA-26ab功能上最有希望的目標(biāo)基因并且在前體mi RNA-26ab轉(zhuǎn)染的LNCa P細(xì)胞中,PTEN蛋白的表達(dá)同樣的增加。同時(shí)熒光素酶結(jié)果明確的顯示出PTEN受mi RNA-26ab的直接調(diào)控。③在LNCa P細(xì)胞中,mi RNA-26ab可阻斷DHT誘導(dǎo)的PSA表達(dá)以及PSA-LUC受體基因活性,但mi RNA-26ab卻沒(méi)有改變AR的表達(dá),說(shuō)明前體mi RNA-26ab是直接減少AR信號(hào)通路靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：CRPC miRNAs mi RNA-26ab LNCa P細(xì)胞株 前列腺癌 PTEN基因
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25

  本文關(guān)鍵詞：MiR-26ab通過(guò)靶基因PTEN調(diào)控雄激素信號(hào)通路抑制前列腺癌細(xì)胞增殖的效應(yīng)與機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：358382