發(fā)布時間：2017-05-12 00:14

  本文關(guān)鍵詞：MiR-26ab通過靶基因PTEN調(diào)控雄激素信號通路抑制前列腺癌細胞增殖的效應(yīng)與機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:通過臨床樣本miRNA表達差異篩選出靶標miRNA目的:探究前列腺良性肥大(prostatic hyperplasia,PH)臨床樣本、癌旁組織(Pericarcinoma,PC)臨床樣本、良性前列腺肥大(Benign prostatic hyperplasia,BPH)臨床樣本和去勢抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)臨床樣本中miRNA的表達的差異,并篩選出目標miRNA。方法:提取6例前列腺良性增生樣本和18例原發(fā)性前列腺癌標本,以及10例前列腺增生樣本和22例CRPC腫瘤樣本中的總RNA。使用miRNA微陣列v2芯片對總RNA中的miRNA進行分析,每個樣本中的miRNA用雜交試劑盒表達,分析表達后miRNA之間顯著差異,篩選出靶標miRNA。結(jié)果:檢測到723個人miRNA,其中有339個miRNA(47%)有顯著差異,其中,在CRPC中,mi RNA-32,mi RNA-590-5p和mi RNA-21有機顯著的過度表達,而miRNA-99a,mi RNA-221和miRNA-26ab有顯著的抑制。miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221在CRPC中發(fā)現(xiàn)有特異性表達但在PC中卻沒有顯著差異。結(jié)論:由于miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221在CRPC中發(fā)現(xiàn)有特異性表達而在PC中卻沒有顯著差異,所以在此可以確定miRNA-26ab,miRNA-21和miRNA-221與CRPC表達有關(guān)聯(lián)。因為mi RNA-21和miRNA-221之前已顯示與雄性激素調(diào)節(jié)相關(guān)并且在CRPC中也有所涉及。最終,miRNA-26ab被選取用于進一步大的研究。第二部分:對mi RNA的鑒定以及在AR信號通路中的作用機制的初步探討目的:通過轉(zhuǎn)染LNCa P細胞株,探究mi RNA在前列腺癌細胞生長和細胞周期中的作用,以及確定mi RNA-26ab的靶基因,最后明確mi RNA與AR信號通路之間的相互關(guān)系。方法:①首先對mi RNA-26ab轉(zhuǎn)染的LNCa P細胞運用熒光檢測,之后用流式細胞儀分析檢測生長周期各階段細胞數(shù)量。②第二步,將mi RNA-26ab與PTEN基因片段結(jié)合,并使用熒光定量PCR來定量,mi RNA-26ab-PTEN在克隆到載體p SGG-3UTR質(zhì)粒上,并使用熒光素酶法檢測表達情況。③最后利用western-blot技術(shù)檢測mi RNA-26ab對AR信號通路的影響。結(jié)果:①mi RNA-26ab的mi RNA前體被轉(zhuǎn)染進入親代LNCa P細胞。mi RNA-26ab以時間依賴方式顯著的減少了LNCa P細胞的生長率(P0.05)。②前體mi RNA-26ab轉(zhuǎn)染的LNCa P細胞被用于m RNA微陣列分析結(jié)果,結(jié)果五個基因(PTEN,FBN1,REBB,TPM1,E2F1)顯示出大約5倍數(shù)的變化。其中,PTEN被預(yù)測為mi RNA-26ab功能上最有希望的目標基因并且在前體mi RNA-26ab轉(zhuǎn)染的LNCa P細胞中,PTEN蛋白的表達同樣的增加。同時熒光素酶結(jié)果明確的顯示出PTEN受mi RNA-26ab的直接調(diào)控。③在LNCa P細胞中,mi RNA-26ab可阻斷DHT誘導(dǎo)的PSA表達以及PSA-LUC受體基因活性,但mi RNA-26ab卻沒有改變AR的表達,說明前體mi RNA-26ab是直接減少AR信號通路靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達。
【關(guān)鍵詞】：CRPC miRNAs mi RNA-26ab LNCa P細胞株 前列腺癌 PTEN基因
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25

  本文關(guān)鍵詞：MiR-26ab通過靶基因PTEN調(diào)控雄激素信號通路抑制前列腺癌細胞增殖的效應(yīng)與機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：358382