目的:探討高糖和血管緊張素Ⅱ刺激下腎小球系膜細(xì)胞TLR4及其信號(hào)通路中下游因子My D88、NF-κB以及炎性因子的表達(dá)變化,并運(yùn)用TLR4 RNA干擾技術(shù)、血管緊張素受體拮抗劑（ARB類(lèi)藥物）干預(yù)高糖及血管緊張素Ⅱ（10-7 M）刺激后的的系膜細(xì)胞,分析TLR4及其下游信號(hào)分子的表達(dá)改變,論證高糖環(huán)境下AngⅡ與TLR4的對(duì)話關(guān)系及其天然免疫炎癥效應(yīng),以闡明TLR4信號(hào)通路在DN發(fā)病機(jī)制中的具體作用。方法:常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞后將細(xì)胞分4組:1、低糖組2、高糖組3、血管緊張素Ⅱ組4、甘露醇組,24小時(shí)后提取細(xì)胞總蛋白。western blot檢測(cè)TLR4、My D88及NF-k B蛋白表達(dá)水平的變化,分析高滲狀態(tài)對(duì)TLR4/My D88信號(hào)通路的影響。設(shè)計(jì)3對(duì)針對(duì)大鼠TLR4基因的特異性si RNA片段以及帶有綠色熒光的陰性對(duì)照。篩選出轉(zhuǎn)染效率最高的si RNA,用于后續(xù)試驗(yàn),將正常培養(yǎng)的細(xì)胞分為:第一組:1、低糖組2、高糖組3、高糖+血管緊張素Ⅱ組4、高糖+ARB組5、高糖+TLR4si RNA組6、高糖+Sc Si RNA組。第二組:1、低糖組2、血管緊張素Ⅱ組3、高糖+血管緊張素Ⅱ組4... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

腎小球系膜細(xì)胞

E果對(duì)比圖（熒光顯微鏡×200）：A：25nmol/L B：50nmol/L CE：125nmol/LPCR篩選沉默效果最佳的siRNA胞，血管緊張素Ⅱ干預(yù) 24 小時(shí)后分別轉(zhuǎn)染 ScSiRNA、NA-3，提取細(xì)胞總 RNA，檢測(cè)各組細(xì)胞 TLR4、MyD8篩選出沉默效果最佳的 siRNA 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如

E 轉(zhuǎn)染效果對(duì)比圖（熒光顯微鏡×200）：A：25nmol/L B：50nmol/L C：75nmol/L E：125nmol/L光定量PCR篩選沉默效果最佳的siRNA培養(yǎng)細(xì)胞，血管緊張素Ⅱ干預(yù) 24 小時(shí)后分別轉(zhuǎn)染 ScSiRNA、siRN2 及 siRNA-3，提取細(xì)胞總 RNA，檢測(cè)各組細(xì)胞 TLR4、MyD88 m達(dá)量，篩選出沉默效果最佳的 siRNA 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下圖:

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TLR4在糖尿病腎病大鼠腎組織中的表達(dá)[J]. 王瑜,呂柳青,張莉,楊柳,陳欽開(kāi),呂金雷.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(12)
[2]炎癥信號(hào)通路在糖尿病腎病中的研究進(jìn)展[J]. 張曉東,耿文佳,魏日胞.  中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志. 2011(02)
[3]TLR4與糖尿病腎病的研究進(jìn)展[J]. 臧麗,王建平.  國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志. 2010(06)
[4]糖尿病腎病相關(guān)基因研究進(jìn)展[J]. 余敏,周宏灝,劉昭前.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2008(11)
[5]血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞Toll樣受體4表達(dá)及髓過(guò)氧化物酶活性的機(jī)制研究[J]. 姬媛媛,王志東,劉俊田,劉娜.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2008(11)
[6]福辛普利、氯沙坦對(duì)腎小管上皮細(xì)胞TLR4表達(dá)的影響[J]. 湯天鳳,周巧玲,朱儷儷,唐榮,敖翔.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2008(10)
[7]糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 蔣偉,劉麗秋.  山東醫(yī)藥. 2008(10)
[8]2型糖尿病腎病患者腎小球系膜細(xì)胞表型及功能改變[J]. 劉志紅,陳朝紅,李穎健,劉棟,黎磊石.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2001(22)
[9]糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 林善錟.  中華內(nèi)科雜志. 2001(11)



本文編號(hào)：3575713