目的:探討高糖和血管緊張素Ⅱ刺激下腎小球系膜細胞TLR4及其信號通路中下游因子My D88、NF-κB以及炎性因子的表達變化,并運用TLR4 RNA干擾技術(shù)、血管緊張素受體拮抗劑（ARB類藥物）干預高糖及血管緊張素Ⅱ（10-7 M）刺激后的的系膜細胞,分析TLR4及其下游信號分子的表達改變,論證高糖環(huán)境下AngⅡ與TLR4的對話關(guān)系及其天然免疫炎癥效應(yīng),以闡明TLR4信號通路在DN發(fā)病機制中的具體作用。方法:常規(guī)培養(yǎng)細胞后將細胞分4組:1、低糖組2、高糖組3、血管緊張素Ⅱ組4、甘露醇組,24小時后提取細胞總蛋白。western blot檢測TLR4、My D88及NF-k B蛋白表達水平的變化,分析高滲狀態(tài)對TLR4/My D88信號通路的影響。設(shè)計3對針對大鼠TLR4基因的特異性si RNA片段以及帶有綠色熒光的陰性對照。篩選出轉(zhuǎn)染效率最高的si RNA,用于后續(xù)試驗,將正常培養(yǎng)的細胞分為:第一組:1、低糖組2、高糖組3、高糖+血管緊張素Ⅱ組4、高糖+ARB組5、高糖+TLR4si RNA組6、高糖+Sc Si RNA組。第二組:1、低糖組2、血管緊張素Ⅱ組3、高糖+血管緊張素Ⅱ組4... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

腎小球系膜細胞

E果對比圖（熒光顯微鏡×200）：A：25nmol/L B：50nmol/L CE：125nmol/LPCR篩選沉默效果最佳的siRNA胞，血管緊張素Ⅱ干預 24 小時后分別轉(zhuǎn)染 ScSiRNA、NA-3，提取細胞總 RNA，檢測各組細胞 TLR4、MyD8篩選出沉默效果最佳的 siRNA 進行后續(xù)實驗，結(jié)果如

E 轉(zhuǎn)染效果對比圖（熒光顯微鏡×200）：A：25nmol/L B：50nmol/L C：75nmol/L E：125nmol/L光定量PCR篩選沉默效果最佳的siRNA培養(yǎng)細胞，血管緊張素Ⅱ干預 24 小時后分別轉(zhuǎn)染 ScSiRNA、siRN2 及 siRNA-3，提取細胞總 RNA，檢測各組細胞 TLR4、MyD88 m達量，篩選出沉默效果最佳的 siRNA 進行后續(xù)實驗，結(jié)果如下圖:

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3575713