本文關(guān)鍵詞：siRNA沉默人類血紅素敏感基因-1對膀胱癌細胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的世界范圍內(nèi),膀胱癌(bladder cancer,BC)發(fā)病率居惡性腫瘤的第十一位,在男性排名第七位,女性排在第十位之后。在初步診斷中,大約70%至80%的膀胱癌是非肌層浸潤性的膀胱癌(non muscle-invasive bladder cancer,NMIBC),其余的20%至30%是肌層浸潤性的膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)。雖然這兩種膀胱癌從病理上分析都是膀胱尿路上皮起源的病變,但是它們有著明顯不同的臨床特點。而與人體其他的惡性腫瘤相比,非肌層浸潤性膀胱癌患者的總體生存率相對較高,但是其中30%至50%的患者在切除原發(fā)腫瘤后具有復(fù)發(fā)的可能,還有10%至20%的NMIBC患者進展到MIBC。雖然在初診時,只有20%的膀胱癌患者被診斷為MIBC,但是這些惡性腫瘤患者絕大多數(shù)都進展為死亡,此外將近50%的MIBC患者在初診時已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了隱匿性遠處轉(zhuǎn)移[1]。NMIBC患者是否復(fù)發(fā)及進展到MIBC的高危因素,以及MIBC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的預(yù)后都是我們臨床工作者及實驗者所關(guān)心及待解決的主要問題,所以膀胱癌早期診斷及治療已變得尤為重要。人類血紅素敏感基因1(heme-responsive gene 1,HRG-1)是我校實驗室發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤細胞凋亡有關(guān)的新基因,是溶質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白家族48(solute carriers,SLC48)的唯一成員,主要與核內(nèi)體相關(guān)聯(lián),將血紅素從核內(nèi)體運輸進入細胞質(zhì)。SLC48A1/HRG-1與V-ATP酶酸化內(nèi)涵體相互作用,增加V-ATP酶的活性,其可介導(dǎo)增加細胞膜轉(zhuǎn)運體和受體再循環(huán)。我校前期的研究發(fā)現(xiàn)HRG-1在前列腺癌組織中高表達,而在前列腺增生組織中低表達或者不表達,這也為我們提供了理論依據(jù)。文獻報道HRG-1與V-ATP酶存在相互作用,而V-ATP酶參與了腫瘤的發(fā)生及侵襲,這也為我們研究膀胱腫瘤高復(fù)發(fā)提供了思路。本課題目的是探討HRG-1在膀胱癌與膀胱正常組織中的表達情況,通過si RNA干涉技術(shù),轉(zhuǎn)染目的細胞,從而調(diào)節(jié)HRG-1在膀胱癌細胞中的表達情況,觀察其對膀胱癌細胞增殖及凋亡的影響,為臨床上治療及評估惡性腫瘤預(yù)后提供理論基礎(chǔ)。研究方法及內(nèi)容1、觀察人類血紅素敏感基因1(HRG-1)在正常膀胱組織和不同級別膀胱癌組織中的表達情況,分析HRG-1基因是否能為膀胱癌患者的診斷及治療提供一定的依據(jù)。2、通過蛋白印跡法和實時定量PCR的方法,檢測正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1及T24、5637、BIU-87三組膀胱癌細胞系中HRG-1基因表達情況,并篩選出HRG-1表達最高的一組膀胱癌細胞,作為后續(xù)研究所用細胞。3、用si RNA干涉技術(shù)將HRG-1 si RNA轉(zhuǎn)染到膀胱癌T24細胞中,使用實時定量PCR和蛋白印跡法來檢測HRG-1 si RNA在膀胱癌T24細胞中的表達變化。4、MTT法和流式細胞儀檢測干涉HRG-1的表達對膀胱癌T24細胞的增殖及凋亡的影響。實驗結(jié)果1、HRG-1在膀胱正常組織和膀胱腫瘤組織中的陽性表達率分別為25%(5/20)、71.8%(61/85)。HRG-1在膀胱腫瘤組織中的陽性表達率明顯高于正常膀胱組織,并且HRG-1在膀胱組織中的表達情況與與腫瘤的病理分期呈正相關(guān),但與患者的性別、年齡無相關(guān)性。2、通過免疫蛋白印跡法(Western-blot)和實時定量RT-PCR法對正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1及膀胱癌T24、5637和BIU-87細胞進行檢測,發(fā)現(xiàn)HRG-1在正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1中的表達明顯低于膀胱癌T24、5637和BIU-87細胞中的表達,且在三組膀胱癌細胞系中T24細胞中表達水平最高。3、HRG-1 si RNA能有效下調(diào)T24細胞中HRG-1的表達:經(jīng)轉(zhuǎn)染48 h后,收集細胞,提取蛋白及m RNA通過Western blot及real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染si RNA組、NC組及未處理組T24細胞中HRG-1蛋白及m RNA水平,結(jié)果顯示si RNA沉默組HRG-1蛋白及m RNA明顯下調(diào)。4、下調(diào)HRG-1后T24細胞增殖能力減弱,通過MTT實驗檢測發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染HRG-1si RNA組細胞增殖速率比對照組及空白組細胞增殖速率慢,且在第48h后p0.01;下調(diào)HRG-1后T24細胞凋亡增加,通過流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染HRG-1 si RNA 24h及48h后細胞凋亡情況,與對照組及空白組相比凋亡率明顯增加。結(jié)論1、HRG-1在膀胱腫瘤組織中高表達,在正常膀胱組織中低表達甚至不表達,且表達情況與病理分期呈正相關(guān),說明HRG-1的表達與膀胱腫瘤的惡性程度及進展密切相關(guān)。2、HRG-1在正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1中的表達明顯低于膀胱癌細胞T24、5637及BIU-87中的表達,且下調(diào)膀胱癌T24細胞中HRG-1的表達后,細胞增殖能力下降,細胞凋亡率增加,說明下調(diào)HRG-1的表達可以抑制T24細胞的增殖、促進T24細胞的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 HRG-1 siRNA 增殖
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-21
• 實驗一HRG-1 在膀胱組織中的表達分析21-27
• 1 材料21-22
• 2 方法22-24
• 3 結(jié)果24-25
• 4 討論25-27
• 實驗二siRNA沉默HRG-1 基因?qū)Π螂装㏕24細胞的影響27-37
• 1 材料27-28
• 2 方法28-31
• 3 結(jié)果31-35
• 4 討論35-37
• 小結(jié)37-39
• 參考文獻39-46
• 個人簡歷和研究成果46-47
• 致謝47

【相似文獻】

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本文編號：357517