膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最為常見的惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率及死亡率；與其它惡性腫瘤相類似，凋亡缺陷是膀胱癌細(xì)胞的顯著特征，表現(xiàn)出增殖與凋亡的失衡以及對化療藥物的抵抗；因此，如何攻克細(xì)胞水平上腫瘤細(xì)胞的凋亡缺陷與異常增殖并以此來改進(jìn)現(xiàn)有的治療方案已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。凋亡抑制蛋白家族IAPs（Inhibitor of Apoptosis Proteins）是近年來發(fā)現(xiàn)的極為重要的凋亡抑制因子，能夠通過核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB（Nuclear Factor kappa-enhancerBinding protein）、腫瘤壞死因子TNF-α（Tumor Necrosis Factor-α）等信號(hào)傳導(dǎo)通路以及直接或間接抑制含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspases的活性而調(diào)控細(xì)胞的凋亡；某些IAPs成員在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)、亞細(xì)胞定位還與腫瘤的進(jìn)展、化療抵抗以及患者預(yù)后密切相關(guān)；有報(bào)道顯示細(xì)胞核中Survivin（Survivin-N）的表達(dá)是Ta/T1期膀胱癌的生物標(biāo)記物，并且與Ta/T1期膀胱癌患者的預(yù)后密切相關(guān)；本課題組之前的系列研究表明，細(xì)胞核中cIAP1（cIAP1-N）的過表達(dá)與膀胱移... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 cIAP1、Survivin 在膀胱癌組織中表達(dá)及臨床意義的研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1. 患者及組織標(biāo)本
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 抗體稀釋
        2. 方法
            2.1 Western blot
            2.2 免疫組化
            2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        1.Western blot 檢測 IAPs 成員在膀胱癌與正常膀胱上皮組織中的表達(dá)情況
        2.免疫組化檢測 IAPs 成員在不同惡性程度膀胱癌組織中的表達(dá)和分布情況
        3.cIAP1-N 與 Survivin-N 表達(dá)的相關(guān)性分析
        4.cIAP1 與 Survivin 核表達(dá)對患者存活率的影響
        5.cIAP1 與 Survivin 核表達(dá)對患者預(yù)后的影響
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 cIAP1、Survivin 核表達(dá)對膀胱癌細(xì)胞功能影響的研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2. 方法
            2.1 Western blot 檢測cIAP1 與 Survivin 的表達(dá)
            2.2. 激光共聚焦顯微鏡檢測不同 IAPs 成員的亞細(xì)胞定位
            2.3 Western blot 檢測 cIAP1 與 Survivin 在細(xì)胞質(zhì)、核中的表達(dá)
            2.4 免疫共沉淀檢測 cIAP1 與 Survin 的相互作用
            2.5 Hoechst33258 檢測細(xì)胞凋亡
            2.6 Rhodamine-Phalloidin 進(jìn)行 F-actin 染色
            2.7 流式細(xì)胞技術(shù)檢測膀胱癌細(xì)胞 T24 的細(xì)胞周期
            2.8 細(xì)胞劃痕試驗(yàn)
            2.9 體外細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
    結(jié)果
        1 Western blot 檢測 cIAP1 與 Survivin 在不同膀胱細(xì)胞系中的表達(dá)
        2 激光共聚焦顯微鏡檢測 LMB 對 IAPs 成員亞細(xì)胞定位的影響
        3.激光共聚焦顯微鏡檢測cIAP1 與 Survivin 的細(xì)胞核表達(dá)情況
        4 Western blot 檢測 LMB 對 cIAP1 與 Survivin細(xì)胞核表達(dá)的影響
        5.免疫共沉淀檢測 cIAP1 與 Survivin 在膀胱癌細(xì)胞核中的相互作用
        6.Hoechst33258 檢測 cIAP1 與 Survivin 核表達(dá)改變對膀胱癌細(xì)胞凋亡的影響
        7 Rhodamine-Phalloidin 染色檢測 LMB 對 T24細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的影響
        8 流式細(xì)胞儀檢測 cIAP1 與 Survivin 核表達(dá)改變對膀胱癌細(xì)胞周期的影響
        9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測 cIAP1 與 Survivin 核表達(dá)改變對膀胱癌細(xì)胞遷移的影響
        10 ECMatrix gel 檢測 cIAP1 與 Survivin 核表達(dá)改變對T24細(xì)胞侵襲的影響
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 cIAP1、Survivin 核表達(dá)改變對其他凋亡調(diào)控蛋白影響研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1. 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2. 方法
            2.1 Western blot 檢測 IAPs 表達(dá)
            2.2 Western blot 檢測 Caspases 的表達(dá)
            2.3 Western blot 檢測 PTEN 在細(xì)胞質(zhì)、核中的表達(dá)
            2.4 Hoechst33258 檢測細(xì)胞凋亡
            2.5 MTT 檢測細(xì)胞毒性
            2.6 Rhodamine-Phalloidin 進(jìn)行 F-actin 染色
    結(jié)果
        1.Western blot 檢測其他 IAPs 成員在LMB 刺激前后表達(dá)的改變
        2 Western blot 檢測 Caspases 成員在LMB 刺激前后表達(dá)的改變
        3 Western blot 檢測 PTEN 在LMB 刺激前后表達(dá)的改變
        4 Hoechst33258 檢測 LMB 與多柔比星聯(lián)合應(yīng)用對 T24 細(xì)胞凋亡的影響
        5 MTT 檢測 LMB 與多柔比星聯(lián)合應(yīng)用對T24細(xì)胞藥物毒性的影響
        6 Rhodamine-Phalloidin 檢測 LMB 與多柔比星聯(lián)合應(yīng)用對細(xì)胞骨架的影響
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
總結(jié)
綜述
    參考文獻(xiàn)
博士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]凋亡抑制基因Livin在膀胱癌中的表達(dá)及意義[J]. 宋希雙,張志偉,車翔宇,姜濤,李先承,殷積斌.  中華泌尿外科雜志. 2006(S1)
[2]紫杉醇誘導(dǎo)ACC細(xì)胞凋亡及與G2/M期阻滯關(guān)系研究[J]. 林李嵩,林國礎(chǔ),陳萬濤,郭偉,林旭.  中華口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2002(02)
[3]X染色體相關(guān)凋亡抑制蛋白在移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 王麗娜,楊德勇,車翔宇,何中舟,王健伯,吳東軍,李先承,宋希雙.  中華泌尿外科雜志. 2009 (07)



本文編號(hào)：3561950