本文關(guān)鍵詞：氫氣對(duì)小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的保護(hù)作用和代謝組學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:氫氣吸入對(duì)小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的保護(hù)作用目的:探討高濃度氫氣吸入對(duì)乙醛酸鹽誘導(dǎo)的草酸鈣結(jié)晶腎損傷的保護(hù)性作用。方法:通過(guò)腹腔注射乙醛酸鹽誘導(dǎo)草酸鈣結(jié)晶腎損傷模型,氫氧霧化器制備氫氧混合氣。把24只雄性C57BL/6小鼠(7-8周齡),隨機(jī)分為4組(每組6只)。A、單純氮氧混合氣組(NO group):給予氮氧混合氣(67%氮?dú)?33%氧氣)吸入加腹腔注射生理鹽水(20ml-1kg-1d)干預(yù)。B、單純氫氧混合氣組(HO group):給予氫氧混合氣(67%氮?dú)?33%氧氣)吸入加腹腔注射生理鹽水(20ml-1kg-1d)干預(yù)。C、草酸鈣結(jié)晶組(Ca Ox group):給予氮氧混合氣(67%氮?dú)?33%氧氣)吸入加腹腔注射乙醛酸鹽(100mg-1kg-1d)干預(yù)。D、氫氣干預(yù)結(jié)晶組(HO+Ca Ox group):給予氫氧混合氣(67%氫氣+33%氧氣)吸入加腹腔注射乙醛酸鹽(100mg-1kg-1d)干預(yù)。兩種干預(yù)方式間隔時(shí)間為6小時(shí)。7天后留取血清、尿液和腎臟組織進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)測(cè)定血清腎臟損傷分子1(kidney injury molecular-1,KIM-1)評(píng)價(jià)腎功能損傷情況,尿鈣尿肌酐比反映尿鈣排泄情況,腎臟組織鈣含量測(cè)定和腎臟Von Kossa染色檢測(cè)腎臟草酸鈣晶體沉積情況,腎臟組織丙二醛(malondialdehyde,MDA)、8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHd G)、髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)活力反映腎組織氧化狀態(tài)和抗氧化能力,免疫組化法檢測(cè)腎臟骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、跨膜糖蛋白(hyaluronan,CD44)、單核細(xì)胞趨化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和白細(xì)胞介素10(interleukin-10,IL-10)評(píng)價(jià)炎癥反應(yīng)情況,原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:(1)、與NO組相比,HO組血清KIM-1水平無(wú)明顯差別(P0.05),Ca Ox組KIM-1水平明顯升高(P0.05);而與Ca Ox組相比,HO+Ca Ox組KIM-1表達(dá)量明顯降低(P0.05)。(2)與NO組相比,HO組尿鈣尿肌酐比值和尿磷尿肌酐比值無(wú)明顯差別(P0.05),Ca Ox組尿鈣尿肌酐比值和尿磷尿肌酐比值明顯升高(P0.05);而與Ca Ox組相比,HO+Ca Ox組尿鈣尿肌酐比值和尿磷尿肌酐比值明顯降低(P0.05)。(3)腎臟Von Kossa染色顯示,NO組與HO組無(wú)明顯鈣鹽沉積,Ca Ox組與HO+Ca Ox組腎臟鈣鹽沉積較明顯,主要分布在皮髓質(zhì)交界處,與Ca Ox組相比,HO+Ca Ox組鈣鹽沉積面積明顯減少(P0.05);與NO組相比,HO組腎臟組織鈣含量無(wú)明顯差別(P0.05),Ca Ox組腎臟組織鈣含量明顯增多(P0.05),與Ca Ox組相比,HO+Ca Ox組腎臟組織鈣含量明顯減少(P0.05)。(4)與NO組相比,HO組腎組織MDA、8-OHd G含量和SOD、GSH、CAT活力無(wú)明顯差別(P0.05),Ca Ox組腎組織MDA、8-OHd G含量明顯升高(P0.05),SOD、GSH、CAT活力明顯降低(P0.05);而與Ca Ox組相比,HO+Ca Ox組腎組織MDA、8-OHd G含量明顯降低(P0.05),SOD、GSH、CAT活力明顯升高(P0.05)。而這四組的MPO含量并無(wú)明顯差別。(5)免疫組化結(jié)果顯示,與NO組相比,Ca Ox組OPN、CD44、MCP-1、IL-10表達(dá)量明顯增多(P0.05),與Ca Ox組相比,HO+Ca Ox組OPN、CD44、MCP-1表達(dá)量明顯減少(P0.05),而IL-10表達(dá)量明顯增多(P0.05)。(6)NO組與HO組無(wú)明顯TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞,Ca Ox組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.05),凋亡指數(shù)為8.7%,HO+Ca Ox組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較Ca Ox組明顯減少(P0.05),凋亡指數(shù)為3.1%。結(jié)論:高濃度氫氣吸入可以明顯的減輕小鼠草酸鈣結(jié)晶沉積造成的腎小管上皮損傷,減少尿鈣排泄和腎鈣含量,減少草酸鈣晶體在腎小管的沉積,可以明顯減輕氧化狀態(tài),提高抗氧化能力,減少炎癥反應(yīng),改善腎小管上皮細(xì)胞的凋亡,從而對(duì)草酸鈣結(jié)晶腎損傷產(chǎn)生保護(hù)效應(yīng),并且無(wú)明顯的副效應(yīng),可能為一種理想的抗結(jié)石治療的手段。第二部分氫氣減輕小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的血清代謝組學(xué)研究目的:采用基于超高壓液相色譜-四級(jí)桿-時(shí)間飛行串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC/Q-TOF-MS)的代謝組學(xué)技術(shù)探討氫氣減輕小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的代謝物變化。方法:18只雄性C57BL/6小鼠(7-8周齡),隨機(jī)分為3組(每組6只)。A、單純氮氧混合氣組(NO group):給予氮氧混合氣(67%氮?dú)?33%氧氣)吸入加腹腔注射生理鹽水(20ml-1kg-1d)干預(yù)。B、草酸鈣結(jié)晶組(Ca Ox group):給予氮氧混合氣(67%氮?dú)?33%氧氣)吸入加腹腔注射乙醛酸鹽(100mg-1kg-1d)干預(yù)。C、氫氣干預(yù)結(jié)晶組(HO+Ca Ox group):給予氫氧混合氣(67%氫氣+33%氧氣)吸入加腹腔注射乙醛酸鹽(100mg-1kg-1d)干預(yù)。兩種干預(yù)方式間隔時(shí)間為6小時(shí),7天后留取血清標(biāo)本進(jìn)行代謝組學(xué)檢測(cè)。利用UPLC/Q-TOF-MS技術(shù)對(duì)各組血清進(jìn)行代謝輪廓分析,各組數(shù)據(jù)采用偏最小二乘判別分析(PLS-DA)進(jìn)行多維分析,篩選出小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的潛在標(biāo)志物和氫氣的作用靶點(diǎn),初步闡明其作用機(jī)制。結(jié)果:代謝輪廓分析發(fā)現(xiàn),NO組、Ca Ox組與HO+Ca Ox組的代謝輪廓能明顯區(qū)分。Ca Ox組與NO組相比,共有26種代謝產(chǎn)物有顯著差異,為小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的潛在標(biāo)志物,而經(jīng)高濃度氫氣吸入干預(yù)后,HO+Ca Ox組與Ca Ox組相比,有21種代謝產(chǎn)物發(fā)生了顯著回調(diào)(P0.05),有5種代謝產(chǎn)物有回調(diào)趨勢(shì),但未達(dá)顯著差異(P0.05)。這些代謝產(chǎn)物主要涉及脂肪酸代謝、磷脂代謝和氨基酸代謝,其中尤以肉堿類(lèi)代謝產(chǎn)物最為集中。結(jié)論:高濃度氫氣吸入能有效調(diào)節(jié)小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷后發(fā)生的脂肪酸代謝、磷脂代謝和氨基酸代謝變化。
【關(guān)鍵詞】：氫氣 草酸鈣 乙醛酸鹽 腎損傷 氧化應(yīng)激 氫氣 草酸鈣 代謝組學(xué) UPLC/Q-TOF-MS
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-13
• 前言13-18
• 參考文獻(xiàn)15-18
• 第一部分：氫氣吸入對(duì)草酸鈣結(jié)晶腎損傷的保護(hù)作用18-43
• 一、材料和方法19-28
• 二、結(jié)果28-37
• 三、討論37-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 第二部分：氫氣減輕小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的血清代謝組學(xué)研究43-63
• 一、材料和方法43-47
• 二、結(jié)果47-58
• 三、討論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 全文小結(jié)63-64
• 綜述64-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 在讀期間發(fā)表論文情況72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

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1 任恒昌;杜洪印;喻文立;劉璐;徐如彬;于建健;王玉亮;;含飽和氫氣HC-A腎保存液減輕大鼠腎臟冷缺血再灌注損傷的研究[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年01期

  本文關(guān)鍵詞：氫氣對(duì)小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的保護(hù)作用和代謝組學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：352010