[目的]1.分離、提純、培養(yǎng)大鼠BMSCs并進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記示蹤,對比普通培養(yǎng)和低氧環(huán)境預(yù)處理對BMSCs表面CXCR4/CXCR7表達(dá)的影響。2.用ADR進(jìn)行誘導(dǎo)大鼠慢性腎病的動(dòng)物模型,檢測損傷腎組織中SDF-1mRNA的表達(dá)情況。3.經(jīng)腎動(dòng)脈途徑分別將普通培養(yǎng)及低氧處理的BMSCs移植于ADR大鼠模型,并設(shè)立對照組,通過基本指標(biāo)評估治療效果。對比免疫熒光示蹤BMSCs于腎組織的定植效果,并分析SDF-1/CXCR4對于BMSCs歸巢至損傷腎組織的作用。[方法]1.取2只SD雄大鼠的股骨及脛骨,從骨髓腔內(nèi)提取BMSCs進(jìn)行分離提純,經(jīng)流式細(xì)胞儀確定為目標(biāo)細(xì)胞后傳代培養(yǎng)并鑒別,取P4代BMSCs,用攜帶綠色免疫熒光蛋白（GFP）的腺病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行標(biāo)記。將標(biāo)記后的BMSCs分為兩組,C1組繼續(xù)普通培養(yǎng),C2組放入2%02、93%N2、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h,分別加雙抗并固定后送流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測各組BMSCs細(xì)胞表面CXCR4/CXCR7的表達(dá)情況。2.50只雄性SD大鼠切除左腎,4周后經(jīng)尾靜脈途徑給予阿霉素2.5mg/Kg每周1次連續(xù)給藥2周,成功建立慢性腎病模型后,處死4只模型大鼠... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１流式細(xì)胞儀檢測ＢＳＭＣｓ的雙參數(shù)直方二維圖點(diǎn)并選

結(jié)果??１．ＢＭＳＣｓ的培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記結(jié)果??采集分離后ＢＭＳＣｓ經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)并過濾雜質(zhì)，梭形細(xì)胞數(shù)逐漸增多，至Ｐ４代??細(xì)胞生長穩(wěn)定，約３天生長期即可貼壁達(dá)５０％，形態(tài)均一呈梭形，旋渦狀生長，為高純??度細(xì)胞〔圖１－１）。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原表型為ＣＤ２９、ＣＤ４４的陽性率分別為??９６．９％和９８．９％，而表型為ＣＤｌｌｂ、ＣＤ４的陽性率為１．９％和２．２％。??經(jīng)攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的Ａｄ５／Ｆ３５腺病毒轉(zhuǎn)染６ｈ后，細(xì)胞呈多角形，換等量??全培養(yǎng)液２４ｈ后觀察綠色熒光表達(dá)率為７５％，形態(tài)與正常培養(yǎng)的細(xì)胞一致〔圖１－２）。??

生化檢查確定造模成功后選取模型大鼠及正常大鼠各四只處死取腎臟組織，制作石??蠟切片后行ＨＥ染色，光鏡下觀察可見造模后大鼠腎小球局灶節(jié)段性硬化、腎小管萎縮、??腎間質(zhì)片狀纖維化及大量炎性細(xì)胞浸潤，部分腎小管內(nèi)還可見脫落的上皮細(xì)胞。如圖３??所示，表明模型制作成功。??圖３：造模成功的大鼠賢組織??３．?３?ＡＤＲ慢性腎病大鼠腎組織ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ相對表達(dá)量的檢測??利用ＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)，根據(jù)ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ對應(yīng)曲線及實(shí)驗(yàn)ＣＴ值，得到ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的??表達(dá)量（見表３〕并用ＳＰＳＳ軟件分析。結(jié)果顯示：造模成功的ＡＤＲ慢性腎病大鼠腎組織??內(nèi)ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的表達(dá)量較正常大鼠明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０１）。??表３正常大鼠及ＡＤＲ慢性腎病大鼠腎組織ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的相對表達(dá)量（７?士ｓ）??ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ??ＩＴ．常大鼠?１．０１＋０．０６??ＡＤＲ造模大鼠?１．４１?±０．１４??兩組大鼠相比較，Ｐ＜０．０１，?ＡＤＲ慢性腎病造模人鼠腎紺織ＳＤＦ－ｌｍＲＮＡ的相對表達(dá)量顯著高于ｉＴ？：常大鼠。??１９??

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本文編號：3456563