發(fā)布時(shí)間：2021-10-24 23:48

　　研究背景膀胱癌是最常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,目前臨床上治療方法主要有手術(shù)治療、化療及放療,這些方法不僅價(jià)格昂貴,且易因反復(fù)用藥產(chǎn)生耐藥性和毒副作用。祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)于膀胱腫瘤的研究起步較晚,但隨著對(duì)中草藥研究的進(jìn)一步深入,中醫(yī)藥在防治膀胱腫瘤方面也有了顯著的進(jìn)步。中藥治療即可協(xié)同殺傷腫瘤,又有助于機(jī)體從整體水平調(diào)節(jié)免疫平衡狀態(tài),發(fā)揮扶正祛邪的功效�？喙鲜敲耖g喜愛的食物,近年來科研工作者從苦瓜果實(shí)和種子中先后提純獲得多種具生物活性的有效成分,具有抗腫瘤、降血糖、抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化等多種功效,在這些生物活性物質(zhì)中最引人注目的屬核糖體失活蛋白（RIP）。MAP30是Ⅰ型RIP的一種,對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有抑制作用,但是關(guān)于MAP30對(duì)人膀胱癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及凋亡影響的相關(guān)研究尚未見報(bào)道。研究目的本文通過分子克隆技術(shù)表達(dá)并純化苦瓜重組MAP30蛋白,并通過咪唑蘭（MTT）法、流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析MAP30對(duì)5637人膀胱腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。研究方法（1）采用PCR技術(shù)從苦瓜基因組中擴(kuò)增出MAP30基因片段,對(duì)其測(cè)序并構(gòu)建重組表達(dá)載體pET-28a （+）-MAP30,轉(zhuǎn)化... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂耱凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物

圖4-3 MAP30蛋白的小量誘導(dǎo)表達(dá)M: Marker： 1 /3/5/7 ：無 IPTG 誘導(dǎo)對(duì)照;2/4/6/8 ： 1mM IPTG 誘導(dǎo)4. 4 MAP30大量誘導(dǎo)表達(dá)后鎮(zhèn)膠純化收集大量的MAP30經(jīng)超聲破碎至液體清亮，離心得到的h清進(jìn)行鎳膠純化，收集含目標(biāo)蛋白的冼脫峰，12%SDS-PAGE電泳分析蛋白純度，得到純度較高的重組蛋白。純化結(jié)果圖4-4。\1 87 6 5 4 321圖4^4MAP30蛋白的純化M: Protein Marker; 1; 20mMTris-Hcl 洗脫組分；2 ； 20mM 咪睡洗脫組分；3、4 ； 50mM味唾洗脫組分；5、6 ： lOOmM味哇洗脫組分；7、8 ： 250mM咪睡洗脫組分4. 5各洗脫組分透析及濃度測(cè)定取上述50mM、100 mM、250 mM咪嘩洗脫物于透析袋中，于1XPBS緩沖液中透析過夜，取透析物12000rpm離心Imin,收集蛋白液，稀釋4倍后

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛇葡萄素對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株T24的作用[J]. 龍?jiān)?史振軍,楊澤娟,耿燚,田立新.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2012 (02)
[2]重組苦瓜葉蛋白MAP30誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞株EC-1.71凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 韓曉紅,邵世和,薛延軍,陳德玉,黃河,李先茜,許化溪.  臨床檢驗(yàn)雜志. 2011(05)
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[5]葡萄籽提取物原花青素對(duì)人膀胱癌BIU87細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 劉潔,莊乾元,張維怡.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2009(18)
[6]參芪扶正注射液配合化療治療晚期膀胱癌的臨床觀察[J]. 李瑞乾,王啟林,他同生,趙斌.  云南中醫(yī)中藥雜志. 2009(05)
[7]中西醫(yī)結(jié)合治療淺表性膀胱癌30例[J]. 曾曄,賴海標(biāo),鐘亮,黃智峰,吳松,李森,賴偉業(yè).  中醫(yī)研究. 2009(05)
[8]苦瓜抗腫瘤研究進(jìn)展[J]. 張瑜,崔炯謨,趙余慶.  中國(guó)現(xiàn)代中藥. 2009(01)
[9]苦瓜蛋白抗腫瘤作用及其分子機(jī)制[J]. 熊術(shù)道,尹麗慧,李景榮,葉愛芳,章圣輝,溫博貴.  中草藥. 2008(03)
[10]膀胱內(nèi)灌注加龍葵方預(yù)防膀胱癌復(fù)發(fā)的療效觀察[J]. 張紹磊.  現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2008(03)

博士論文
[1]重組蛋白MAP30誘導(dǎo)EC-1.71和BGC-823細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的初步研究[D]. 韓曉紅.江蘇大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3456234