研究背景膀胱癌是最常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,目前臨床上治療方法主要有手術(shù)治療、化療及放療,這些方法不僅價格昂貴,且易因反復用藥產(chǎn)生耐藥性和毒副作用。祖國醫(yī)學對于膀胱腫瘤的研究起步較晚,但隨著對中草藥研究的進一步深入,中醫(yī)藥在防治膀胱腫瘤方面也有了顯著的進步。中藥治療即可協(xié)同殺傷腫瘤,又有助于機體從整體水平調(diào)節(jié)免疫平衡狀態(tài),發(fā)揮扶正祛邪的功效�？喙鲜敲耖g喜愛的食物,近年來科研工作者從苦瓜果實和種子中先后提純獲得多種具生物活性的有效成分,具有抗腫瘤、降血糖、抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化等多種功效,在這些生物活性物質(zhì)中最引人注目的屬核糖體失活蛋白（RIP）。MAP30是Ⅰ型RIP的一種,對多種腫瘤細胞均有抑制作用,但是關(guān)于MAP30對人膀胱癌細胞的生長抑制及凋亡影響的相關(guān)研究尚未見報道。研究目的本文通過分子克隆技術(shù)表達并純化苦瓜重組MAP30蛋白,并通過咪唑蘭（MTT）法、流式細胞儀檢測分析MAP30對5637人膀胱腫瘤細胞增殖的抑制作用及誘導腫瘤細胞凋亡的作用。研究方法（1）采用PCR技術(shù)從苦瓜基因組中擴增出MAP30基因片段,對其測序并構(gòu)建重組表達載體pET-28a （+）-MAP30,轉(zhuǎn)化... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂耱凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物

圖4-3 MAP30蛋白的小量誘導表達M: Marker： 1 /3/5/7 ：無 IPTG 誘導對照;2/4/6/8 ： 1mM IPTG 誘導4. 4 MAP30大量誘導表達后鎮(zhèn)膠純化收集大量的MAP30經(jīng)超聲破碎至液體清亮，離心得到的h清進行鎳膠純化，收集含目標蛋白的冼脫峰，12%SDS-PAGE電泳分析蛋白純度，得到純度較高的重組蛋白。純化結(jié)果圖4-4。\1 87 6 5 4 321圖4^4MAP30蛋白的純化M: Protein Marker; 1; 20mMTris-Hcl 洗脫組分；2 ； 20mM 咪睡洗脫組分；3、4 ； 50mM味唾洗脫組分；5、6 ： lOOmM味哇洗脫組分；7、8 ： 250mM咪睡洗脫組分4. 5各洗脫組分透析及濃度測定取上述50mM、100 mM、250 mM咪嘩洗脫物于透析袋中，于1XPBS緩沖液中透析過夜，取透析物12000rpm離心Imin,收集蛋白液，稀釋4倍后

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]重組蛋白MAP30誘導EC-1.71和BGC-823細胞凋亡及其機制的初步研究[D]. 韓曉紅.江蘇大學 2011



本文編號：3456234