背景和目的血管鈣化是糖尿病及慢性腎臟�。╟hronic kidney disease,CKD）患者最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一,與心血管事件的發(fā)生密切相關(guān)。衰老、炎癥、氧化應(yīng)激、尿毒癥、高磷血癥、高血糖等是VC發(fā)生發(fā)展中的重要因素。其中,鈣磷代謝紊亂及其引起的高磷血癥是誘發(fā)血管鈣化常見(jiàn)因素。NAD+依賴(lài)的去乙�；窼irtuin 1（SIRT1）是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞衰老和炎癥反應(yīng)的組蛋白去乙酰化酶,在調(diào)控高糖或高磷相關(guān)的血管鈣化中起著重要作用。然而,高血糖是否可促進(jìn)高磷血癥誘發(fā)的血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）鈣化及其促進(jìn)鈣化的具體機(jī)制尚不明確。因此,本研究旨在探討高糖在高磷誘導(dǎo)VSMCs衰老和鈣化中的作用及SIRT1參與其調(diào)控的分子機(jī)制。方法1.小鼠原代VSMCs的培養(yǎng)與鑒定:分離小鼠胸腹主動(dòng)脈,利用組織塊貼壁法培養(yǎng)小鼠VSMCs,免疫熒光檢測(cè)平滑肌細(xì)胞特異性標(biāo)記分子平滑肌22α（smooth muscle 22 alpha,SM22α）和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha smooth muscle-actin,α-SMA）。2.以小鼠原代培養(yǎng)的VS... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

原代小鼠VSMCs形態(tài)及α-SMA,SM22α標(biāo)記分子的免疫熒光分析

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文27Fig2.BothphosphateoverloadandhighglucosepromotephosphatedepositionowingtoosteogenictransdifferentiationofVSMCs.圖2.高糖高磷通過(guò)VSMCs成骨樣轉(zhuǎn)分化促進(jìn)鈣磷乘積。A.Westernblottinganalysisforthemarkersofosteoblasts(RUNX2、BMP2)，α-SMAandPit-1.B.AlizarinredstainingfordetectionmineraldepositioninVSMCswithphosphateor/andhighglucose.C.QuantificationofVSMCcalcificationinducedbyHPiand/orHG.D.Calciumcontentwasnormalizedtototalcellularprotein,asdeterminedbyabicinchoninicacidproteinassay.*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001.3.2藥理改變SIRT1活性影響VSMCs向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及鈣化。為探討高磷和高糖誘導(dǎo)VSMCs成骨樣轉(zhuǎn)分化相關(guān)血管鈣化的可能機(jī)制，本研究首先用WB實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了磷酸鹽超負(fù)荷或高糖誘導(dǎo)的VSMCs中SIRT1的表達(dá)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，高糖或高磷處理9天后，SIRT1的表達(dá)明顯減少(Fig3A)。根據(jù)免疫熒光分析結(jié)果，高磷或高糖處理細(xì)胞后，SIRT1的表達(dá)也明顯下

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文29Fig3.PharmacologicalchangestheactivityofSIRT1regulatesosteoblastictransdifferentiationandcalciumdepositionofVSMCsbyexposuretohighglucoseandphosphateoverload.圖3.藥理改變SIRT1活性調(diào)控高糖高磷誘導(dǎo)的VSMCs的成骨轉(zhuǎn)分化和鈣化。A.TheexpressionofSIRT1proteininVSMCsculturedwithnormal,HPiand/orHGmediumover3and9days.B.ImmunofluorescenceanalysisfordeterminingthesenescentVSMCsculturedwithnormal,HPi


本文編號(hào)：3434522