糖尿病腎�。╠iabetic nephropathy,DN）作為終末期腎病的主要原因,是糖尿病的常見并發(fā)癥之一。近年來,研究證據(jù)表明核轉(zhuǎn)錄因子Kappa B（nuclear factor kappa B,NF-κB）的激活和含有熱蛋白結(jié)構(gòu)域的甘氨酸結(jié)合及寡聚結(jié)構(gòu)域樣受體3炎癥因子（NACHT,LRR and PYD domain-containing protein 3,NLRP3炎癥小體）在糖尿病腎病的炎癥進展過程密切相關(guān)。然而,它們的機體作用機制尚不清楚。近年來研究顯示,長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）異常表達在糖尿病腎病等多種疾病中扮演著重要角色。然而,lnc RNA在糖尿病腎病的炎癥過程中的功能和作用機制仍未揭開神秘面紗。在我們課題組前期實驗中,我們通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)（RNA sequencing,RNA-seq）和實時熒光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR,q RT-PCR）在糖尿病腎病db/db小鼠腎臟組織中鑒別了14個呈異常表達的lnc RNAs。在目前的實驗中,我們進一步通過... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Gm4419在系膜細胞細胞質(zhì)和細胞核中的表達

43中，構(gòu)建穩(wěn)定表達Gm4419的質(zhì)粒。如圖1.4所示(彩圖見附圖部分)，經(jīng)BamH I和EcoRV雙酶切驗證和測序驗證，Gm4419過表達質(zhì)粒構(gòu)建成功。如圖1.5熒光定量PCR和圖1.6(彩圖見附圖部分) FISH結(jié)果證實Gm4419過表達質(zhì)粒能夠顯著上調(diào)Gm4419的表達(p＜0.01)。如圖1.5熒光定量PCR驗證3條Gm4419 siRNAs，結(jié)果顯示H-MCsiRNA Gm4419 no.3組沉默效率最佳(p＜0.01)，所以選擇H-MC siRNA Gm4419no.3組的siRNA進行后續(xù)實驗。此外，如圖1.6(彩圖見附圖部分) FISH結(jié)果所示，與H-MC mock組及H-MC siNC組比較，H-MC siGm4419組中Gm4419的表達被明顯抑制。以上結(jié)果顯示Gm4419過表達質(zhì)粒和Gm4419 siRNA構(gòu)建成功。圖 1.5 轉(zhuǎn)染 Gm4419 過表達質(zhì)粒和 siRNAs 對系膜細胞中 Gm4419 表達的影響Figure 1.5 The effect of Gm4419 over-expression plasmid and siRNAs on Gm4419 in MCs*，p <0.05； **，p <0.01； NS

p <0.05； **，p <0.01； NS， no significant2.4 Gm4419在高糖條件下促進系膜細胞炎癥和纖維化如圖1.7 qRT-PCR顯示，高糖組中促炎癥因子mcp-1、TNF-α、IL-1β和纖維標記蛋白Fn、Col.IV的mRNA表達水平均高于低糖組。如圖1.8 qRT-PCR顯示與L-MCmock組和L-MC pcDNA3.1組比較，L-MC Gm4419(+)組mcp-1、TNF-α、IL-1β、Fn和Col.IV的mRNA水平顯著升高；相反，H-MC siGm4419組mcp-1、TNF-α、IL-1β、Fn和Col.IV的mRNA水平與H-MC mock組及H-MC siNC組相比顯著降低。此外，如圖1.9 Western blot和圖1.10 (彩圖見附圖部分)免疫熒光結(jié)果均顯示，與L-MCmock組和L-MC pcDNA3.1組比較，L-MC Gm4419(+)組mcp-1、TNF-α、IL-1β、Fn和Col.IV的蛋白水平顯著升高；相反，H-MC s

【參考文獻】：
期刊論文
[1]A nuclear import inhibitory peptide ameliorates the severity of cholecystokinin-induced acute pancreatitis[J]. Tamás Letoha,Csaba Somlai,Tamáas Takács,Annamária Szabolcs,Katalin Jármay,Zoltán Rakonczay Jr,Péter Hegyi,Ilona Varga,József Kaszaki,István Krizbai,Imre Boros,Ern（?） Duda,Erzsébet Kusz,Botond Penke.  World Journal of Gastroenterology. 2005(07)



本文編號：3380384