背景和目的尿路感染（Urinary tract infection,UTI）是目前世界范圍內(nèi)最為常見的細(xì)菌感染性疾病,是由于病原微生物侵入泌尿系統(tǒng)并繁殖而引起的炎癥反應(yīng),其中約80%的UTI由尿路致病大腸桿菌（Urinary Pathogenic E.coli,UPEC）引起。在美國,UTI每年診斷出的發(fā)病率極高,其中男性發(fā)病率超過3%,女性發(fā)病率超過10%（其中在年齡>65歲的女性中,發(fā)病率增加到20%）,而超過60%的女性在一生中都會發(fā)生至少一次UTI,更有20%-30%的女性患者頻繁復(fù)發(fā)。尿路致病性大腸桿菌（Uropathogenic Escherichia coli,UPEC）是引起尿路感染最常見的病原菌,UPEC在鞭毛、菌毛,毒素等侵襲因子的協(xié)助下致病。UPEC分泌的一種外毒素:α-溶血素（α-hemolysin,HlyA）是一種高效的溶血毒素,典型的RTX（repeats-in-toxin）家族成員。HlyA與尿路感染和敗血癥有關(guān),其在體內(nèi)合成原毒素ProHlyA后,會被兩個內(nèi)部賴氨酸（Lys-563和Lys-689）�；せ�,�；苟舅嘏c細(xì)胞膜的結(jié)合不可逆轉(zhuǎn),引發(fā)一... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１我國目前尿路感染最主要的致病菌分布圖??

?＾???３．?２組織及細(xì)胞水平驗(yàn)證ＵＰＥＣ與細(xì)胞自噬的關(guān)系??⑴驗(yàn)證小鼠尿路感染模型的建立：建立小鼠尿路感染模型（ＵＰＥＣ感染組及??對照組各５只），于感染后的２４小時收取各組每只實(shí)驗(yàn)小鼠的尿液，將尿液行??倍比稀釋后，分別涂布于ＬＢ固體培養(yǎng)基中，倒置放置于３７°Ｃ恒溫?zé)o菌環(huán)境中??１６－２４小時，待菌落生長出后行菌落計(jì)數(shù)。兩組小鼠中的每只小鼠的２４ｈ．ｐ．ｉ尿液??涂布結(jié)果顯示，ＵＰＥＣ感染組的小鼠膀胱細(xì)菌負(fù)荷明顯高于對照組（Ｐ＜０．０５）。??如圖３．２．１所示。這個結(jié)果驗(yàn)證了我們小鼠尿路感染模型建立的成功，為接下來??的組織驗(yàn)證提供了基礎(chǔ)和前提。??３００００－１?＊＊＊??ｄ?Ｉ?Ｉ??２００００－??＂Ｄ?ｒｊ?〇??Ｓ５????－Ｊ?Ｄ??ｒａ?＾?１００００－??＾?°?－Ｕ－??ｍ??０Ｊ?，?＂ａｆｌａ???ＵＰＥＣ?ＣＯＮＴＯＲＬ??圖３．２．丨建立小鼠尿路感染模型后小鼠膀胱細(xì)菌負(fù)荷量對比??從圖中可明顯發(fā)現(xiàn)ＵＰＥＣ感染組（紅色）各小鼠膀胱細(xì)菌負(fù)荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組（藍(lán)色）??各小鼠。??（２）組織及細(xì)胞水平驗(yàn)證尿路致病性大腸桿菌可以引起細(xì)胞自噬的發(fā)生：??小鼠尿路感染模型成功建立后，我們收�。眨校牛酶腥窘M與正常組小鼠膀胱，提??取膀胱組織蛋白行Ｗｅｓｔｅｍ－Ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)以分析各組小鼠中作為細(xì)胞自噬的Ｍａｒｋｅｒ??蛋白ＬＣ３的表達(dá)情況差異，從而在組織水平上明確ＵＰＥＣ引起的尿路感染是否??會引起細(xì)胞自嗤。從圖中結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，相比于正常組小鼠，ＩＰＥＣ感染后的小??鼠膀胱組織中ＬＣ３表達(dá)量明顯較高，如圖３．２．２，這個結(jié)果提示我們在組織水平??上，

????們接著在體外做了細(xì)菌感染，使用ｕｐｅｃ感染膀胱上皮細(xì)胞??（ＢＥＣｓ），ＭＯＩｓ＝１００：ｌ。我們提取了感染后１５分鐘、３０分鐘及６０分鐘被ＵＰＥＣ??感染的膀胱上皮細(xì)胞的蛋白并進(jìn)行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果可以明顯看出，??１５分鐘、３０分鐘及６０分鐘的ＵＰＥＣ感染組中ＬＣ３的表達(dá)量明顯高于對照組，??這個結(jié)果支持了我們建立小鼠尿路感染模型后所得出的結(jié)論。??以上結(jié)果證實(shí)了，由ＵＰＥＣ引起的尿路感染會促進(jìn)細(xì)胞自噬的進(jìn)程。??


本文編號：3379418