目的檢測DU145、PC-3和LNCaP前列腺癌細(xì)胞中趨化因子CXC配體（L）12及其受體（R）4的表達(dá),探討重組人CXCL12對上述細(xì)胞增殖的影響及其機制。方法逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）研究CXCL12/CXCR4在DU145、PC-3和LNCaP細(xì)胞的表達(dá);CCK-8實驗研究重組人CXCL12對DU145、PC-3和LNCaP細(xì)胞增殖的作用;Wettern印跡實驗研究重組人CXCL12對DU145細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）和磷酶化ERK（pERK）表達(dá)的影響。結(jié)果 DU145、PC-3和LNCaP細(xì)胞均表達(dá)CXCL12和CXCR4,重組人CXCL12可明顯促進(jìn)上述細(xì)胞的增殖,重組人CXCL12雖然不能改變DU145細(xì)胞ERK1/2表達(dá),但可上調(diào)pERK1/2的表達(dá)。結(jié)論前列腺癌細(xì)胞表達(dá)CXCL12及其受體CXCR4,CXCL12/CXCR4可通過活化絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）/ERK信號通路促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖。 

【文章來源】：中國老年學(xué)雜志. 2017,37(07)北大核心

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前列腺癌細(xì)胞表達(dá)CXCL12及CXCＲ2mＲNA

1～3:0、10、40ng/mlCXCL12圖2外源性CXCL12上調(diào)DU145細(xì)胞pEＲK水平3討論前列腺癌在歐美被稱為男性健康的第一大殺手，其發(fā)病率位居西方世界男性惡性腫瘤的第一位，而死亡率也已升至第二位，僅次于肺癌〔4〕。前列腺癌在北京男性泌尿生殖系腫瘤中排名第一位、所有腫瘤疾病中排名第五位〔5〕。炎癥反應(yīng)是機體在進(jìn)化演進(jìn)過程中形成的具有抵抗及清除病原微生物、異物及壞死組織的一種保護(hù)機制。該過程有助于生物體清除異己，從而保證個體的生存，但炎癥的長期存在，即慢性炎癥，也會導(dǎo)致包括腫瘤在內(nèi)的多種疾病發(fā)生〔6〕。全球約25%的腫瘤是由炎癥發(fā)展而來的〔7〕。趨化因子屬于細(xì)胞因子超家族成員，根據(jù)鄰近氨基端結(jié)構(gòu)性半胱氨酸的排列，其可被分為CXC、CX3C、CC和C四個亞家族。其中CXC亞家族又可依據(jù)第一個保守半胱氨酸前是否存有谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELＲ)結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步分為ELＲ+CXC和ELＲ-CXC兩類。盡管趨化因子在炎癥和免疫反應(yīng)中可以活化、吸引及調(diào)節(jié)粒細(xì)胞的遷移，但越來越多的證據(jù)顯示，趨化因子也參與了腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成〔8〕。作為ELＲ+CXC類趨化因子中的一員，CXCL12是CXCＲ4的唯一配體。有研究已經(jīng)證實，CXCL12/CXCＲ4參與了多種腫瘤的發(fā)生與演進(jìn)過程。在包括卵巢癌、小細(xì)胞肺癌和腦膠質(zhì)瘤的許多腫瘤中，CXCL12均可促進(jìn)表達(dá)CXCＲ4腫瘤細(xì)胞的增殖與存活〔9～11〕。另外，CXCL12也參與腫瘤細(xì)胞的特異性器官轉(zhuǎn)移，Müller等〔12〕研究表明，CXCＲ4高表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞和乳腺癌組織，而乳腺癌常轉(zhuǎn)移的靶組織則高表達(dá)其配體CXCL12，CXCＲ4可介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞肌動蛋白的聚合和偽足形成，并借助受體與配體的特異性結(jié)合，以實現(xiàn)其向靶組織的趨化及轉(zhuǎn)移，這就是所謂的“歸巢學(xué)?

聚丙烯酰胺凝膠中電泳(電壓為110V);將凝膠中蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上(電流為300mA，2h);5%的脫脂奶粉室溫封閉3h;Tween-20磷酸鹽緩沖液(PBST)洗膜3×5min;一抗4℃孵育過夜(β-actin、EＲK和pEＲK濃度均為1∶1000)，PBST洗膜3×5min;HＲP標(biāo)記的二抗(1∶10000)37℃孵育45min;PBST洗膜4×5min;向膜上加入電化學(xué)發(fā)光(ECL)顯影液，并于全自動化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)中曝光、拍照。1.6統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件行q檢驗。2結(jié)果2.1前列腺癌細(xì)胞表達(dá)CXCL12及其受體CXCＲ4DU145、PC-3和LNCaP均表達(dá)CXCL12及其受體CXCＲ4。見圖1。半定量分析表明，與PC-3(0.51±0.08)和DU145(0.29±0.06)比較，LNCaP細(xì)胞CXCL12mＲNA表達(dá)量(1.34±0.14)明顯增高，而CXCＲ4的mＲNA水平在DU145中最高(0.99±0.08)，LNCaP次之(0.62±0.09)，PC-3最低(0.47±0.06)。圖1前列腺癌細(xì)胞表達(dá)CXCL12及CXCＲ2mＲNA2.2外源性CXCL12促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖細(xì)胞培養(yǎng)72h后，CCK8實驗結(jié)果表明，外源性CXCL12均可促進(jìn)DU145、PC-3和LNCaP的增殖，但是各細(xì)胞促進(jìn)增殖的濃度有明顯差異(P＜0.05)，DU145的促增殖濃度為10、20和40ng/ml，PC-3為60ng/ml，而LNCaP為10、20、40和60ng/ml。見表2。2.3外源性CXCL12促進(jìn)DU145細(xì)胞EＲK磷酸化(pEＲK)與0ng/mlCXCL12(0.70±0.35、0.55±0.13)比較，10、40ng/ml的CXCL12不能改變EＲK的水平(1.01±0.15、0.94±0.14，P＞0.05)，但可明顯促進(jìn)pEＲK的表達(dá)(1.55±0.14、1.56±0.18，P＜0.05)。見圖2。表2外源性CXCL12促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖(x±s，n=3)組別0ng/ml10ng/ml20ng/ml40ng/ml60ng/mlDU1450.553±0.080.636±0.061)0.666±0.032)0.753±0.042)0.647±0.04PC-30.491±0.040.526±0.060.529±0.060.541±0.040.610±0.031)L

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中國前列腺癌的流行病學(xué)概述和啟示[J]. 葉定偉,朱耀.  中華外科雜志. 2015 (04)



本文編號：3342443