該文旨在探討副交感神經(jīng)M1受體（muscarinic acetylcholine M1 receptor,CHRM1）通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號通路對前列腺癌增殖、轉(zhuǎn)移以及腫瘤細胞凋亡影響的研究。選用Western blot、免疫熒光等方法檢測CHRM1在前列腺癌細胞中表達情況。體外培養(yǎng)人前列腺癌細胞系PC-3、LNCaP、DU145,然后用CHRM1激動劑卡巴膽堿（CAR）及特異性抑制劑哌侖西平（PIN）處理細胞。用CHRM1 RNAi慢病毒感染細胞,構(gòu)建前列腺癌CHRM1敲低的穩(wěn)轉(zhuǎn)株。選用CCK8細胞增殖實驗、平板克隆實驗、細胞遷移侵襲實驗、流式細胞術(shù)檢測及透射電鏡觀察等方法探究CHRM1在前列腺癌中增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡水平。最后,用Western blot方法檢測敲低的CHRM1前列腺癌細胞中上皮間質(zhì)標志物及PI3K/AKT信號表達水平。結(jié)果顯示,CHRM1大量表達在前列腺癌各細胞系細胞中。CAR處理后細胞增殖能力、克隆形成水平、轉(zhuǎn)移能力及抗凋亡能力提高,而PIN處理后其增殖能力、克隆形成能力、轉(zhuǎn)移能力及抗凋亡能力降低。敲低CHRM1后,細胞的轉(zhuǎn)移能力及抗凋亡能力降低,且電鏡下出現(xiàn)... 

【文章來源】：中國細胞生物學學報. 2020,42(05)CSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

構(gòu)建CHRM1穩(wěn)定敲低的細胞系模型

為了探究CHRM1是否在人前列腺癌中促進增殖和腫瘤形成,我們首先比較了CHRM1在人前列腺癌細胞系細胞PC-3、LNCaP、DU145、正常的前列腺上皮細胞RWPE-1、非小細胞肺癌細胞系A549中蛋白表達情況,發(fā)現(xiàn)CHRM1在前列腺癌細胞中表達高于正常前列腺上皮細胞,而在PC-3中表達最高(圖1A和圖1B)。用結(jié)晶紫染色可清楚觀察各種細胞的形態(tài)(圖1C)。用免疫熒光的方法檢測細胞核及CHRM1表達及定位情況,CHRM1大量表達在胞膜及胞質(zhì)中(圖1D)。以上結(jié)果提示,CHRM1在前列腺癌各細胞系中大量表達。2.2 構(gòu)建CHRM1穩(wěn)定敲低的細胞系模型

2.3 CHRM1激活促進前列腺癌的增殖及克隆形成能力為了研究CHRM1在調(diào)節(jié)腫瘤細胞進展過程中的作用,我們選取了CHRM1特異性拮抗劑PIN和CHRM1非選擇性激動劑CAR進行接下來實驗。在PC-3細胞中我們通過CCK8細胞增殖實驗發(fā)現(xiàn),小劑量的CAR可以促進細胞增殖(圖3A),而大劑量的PIN可以抑制細胞增殖(圖3B),且具有劑量依賴性和時間依賴性。最后,選擇2 μmol/L CAR和200 μmol/L PIN作用24 h進行接下來實驗(圖3C)。同樣設置對照組、激動劑組、抑制劑組進行克隆形成實驗,發(fā)現(xiàn)激動劑組PC-3細胞克隆形成能力明顯增強,而抑制劑對其克隆形成能力在很大程度上有抑制作用(圖3D和圖3E)。以上提示,CHRM1激活促進前列腺癌的增殖及克隆形成能力。


本文編號：3333074