本文關鍵詞：不同轉(zhuǎn)移潛能膀胱細胞株的定量蛋白質(zhì)組與N-糖組分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中較常見的惡性腫瘤的一種,通�？梢苑譃榉羌咏䴘櫺园螂装┮约凹咏䴘櫺园螂装┻@兩種。目前臨床使用的膀胱癌診斷標志物為組織多肽抗原和癌胚抗原,這兩種腫瘤標志物的特異性較差,在多種癌癥發(fā)生時都會升高。利用新技術和新方法開展膀胱癌研究,尋找和發(fā)現(xiàn)新的膀胱癌腫瘤標志物,對于膀胱腫瘤的早期診斷和分子靶向治療都具有非常重要的意義。本研究首先運用細胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標記技術(SILAC)技術對3株不同轉(zhuǎn)移潛能膀胱癌細胞株HCV29,KK47和YTS1的蛋白質(zhì)組進行相對定量分析。結(jié)果共發(fā)現(xiàn)了689種表達變化的蛋白,包括255種表達上調(diào)蛋白和434種表達下調(diào)蛋白。對這些表達變化的蛋白進行分析發(fā)現(xiàn)屬于細胞結(jié)合和催化分類的蛋白最多。據(jù)國內(nèi)外眾多的文獻報道,整合素是一類重要的跨膜糖蛋白,它能夠與細胞外基質(zhì)結(jié)合并參與許多生物過程,尤其是癌細胞的發(fā)展與轉(zhuǎn)移。利用SILAC蛋白質(zhì)定量技術,發(fā)現(xiàn)整合素α6在3株細胞中的表達比例約為1:18:14。通過western blotting,q PCR,細胞免疫染色和流式細胞術多種技術進行驗證。同時使用臨床組織基因芯片結(jié)果對比分析,結(jié)果表明,與正常膀胱表皮細胞HCV29相比,整合素α6在膀胱癌細胞中表達量均有明顯的上升,且在非侵染性膀胱癌KK47細胞中的表達量最高。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型EMT是指具有極性的上皮細胞在特定的生理和病理情況下轉(zhuǎn)化成為具有遷移能力的間質(zhì)細胞的過程,這一過程被認為是癌癥發(fā)展和遷移的重要基本步驟。蛋白質(zhì)的糖基化修飾異常改變在許多重大疾病中,特別是在膀胱癌等眾多腫瘤的發(fā)展以及轉(zhuǎn)移過程中都具有極其重要的意義。研究表明多種腫瘤形成的過程中細胞內(nèi)的糖鏈發(fā)生了明顯的改變,同時發(fā)現(xiàn)發(fā)生糖基化修飾改變的分子與惡性腫瘤細胞轉(zhuǎn)移時細胞內(nèi)的信號傳導有關。在膀胱癌中,生物大分子的糖基化特別是蛋白質(zhì)糖基化修飾的異常改變影響著癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。本研究使用TGFβ處理膀胱正常上皮細胞HCV29建立EMT模型。經(jīng)過TGFβ處理后的HCV29細胞表現(xiàn)出明顯的間質(zhì)細胞特征。通過凝集素芯片技術分析發(fā)現(xiàn)5種凝集素(UEA-I,BS-I,MAL-II,RCA120和PWM)識別的糖鏈表達上調(diào),10種凝集素(PNA,GNA,SNA,NPA,PTL-II,DBA,PHA-E+L,DSA,PTL-I和GSL-I)識別的糖鏈結(jié)構下調(diào)。對EMT模型細胞進行MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜檢測N-聚糖表達分析發(fā)現(xiàn)與正常細胞相比,處理后的細胞含有更多的高甘露糖型和雜合型N-聚糖,N-聚糖的巖藻糖化程度也更高。最后通過糖基因芯片技術分析發(fā)現(xiàn),在處理的細胞中,基因hexb,fuca1,man2a1等5個N-聚糖合成相關基因的表達均是下調(diào)的。在癌癥治療的策略中,及時發(fā)現(xiàn),及早治療有利于增加癌癥患者的存活率。目前的許多報道指出糖蛋白表達量及其糖基化修飾的改變常伴隨著癌癥的發(fā)展,因此從糖生物學角度研究膀胱癌具有重要意義。
【關鍵詞】：膀胱癌 定量蛋白質(zhì)組 N-聚糖 SILAC 整合素α6
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 緒論7-16
• 1.1 膀胱癌現(xiàn)狀7
• 1.2 定量蛋白質(zhì)組學7-9
• 1.3 蛋白的糖基化修飾9-12
• 1.4 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）12
• 1.5 整合素蛋白12-14
• 1.6 腫瘤生物標志物14
• 1.7 細胞模型14
• 1.8 立題依據(jù)與意義14-15
• 1.9 主要研究內(nèi)容15-16
• 第二章 材料與方法16-23
• 2.1 實驗材料16
• 2.1.1 細胞株16
• 2.1.2 主要試劑16
• 2.1.3 主要儀器16
• 2.2 實驗方法16-23
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.2 同位素標記細胞株17
• 2.2.3 細胞劃痕實驗17
• 2.2.4 蛋白提取17-18
• 2.2.5 蛋白免疫印跡18
• 2.2.6 實時熒光定量PCR18-19
• 2.2.7 細胞免疫熒光組化19
• 2.2.8 膠內(nèi)酶解19
• 2.2.9 溶液內(nèi)酶解19-20
• 2.2.10 MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜20
• 2.2.11 液質(zhì)數(shù)據(jù)處理20
• 2.2.12 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)處理20
• 2.2.13 流式細胞術20
• 2.2.14 蛋白功能分析和IPA分析20
• 2.2.15 凝集素芯片分析和數(shù)據(jù)分析20-21
• 2.2.16 細胞凝集素組化21
• 2.2.17 質(zhì)譜鑒定N-聚糖21
• 2.2.18 糖鏈質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理21
• 2.2.19 LTQ Orbitrap液相串聯(lián)質(zhì)譜分析21-23
• 第三章 結(jié)果與討論23-46
• 3.1 膀胱癌細胞系蛋白質(zhì)組分析23-35
• 3.1.1 3株細胞的形態(tài)差異和生存習性的異同23
• 3.1.2 細胞同位素摻入率分析23-24
• 3.1.3 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)24-29
• 3.1.4 定量數(shù)據(jù)分析29-30
• 3.1.5 蛋白功能分析30-31
• 3.1.6 蛋白功能網(wǎng)絡分析31-32
• 3.1.7 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)的驗證32-33
• 3.1.8 細胞免疫染色33
• 3.1.9 小結(jié)33-35
• 3.2 整合素 α6 在膀胱癌細胞系中表達的差異35-37
• 3.2.1 定量蛋白質(zhì)組研究表明整合素 α6 在KK47細胞株的中表達量最高35
• 3.2.2 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)的驗證35-36
• 3.2.3 細胞免疫組化實驗驗證整合素 α6 在活細胞中的表達情況36
• 3.2.4 小結(jié)36-37
• 3.3 膀胱上皮細胞HCV29發(fā)生EMT前后細胞N-聚糖的變化37-46
• 3.3.1 TGFβ 誘導的EMT細胞模型構建37-39
• 3.3.2 凝集素芯片結(jié)果39-40
• 3.3.3 EMT過程N-聚糖的改變40-44
• 3.3.4 糖基因芯片分析糖基因的表達44
• 3.3.5 小結(jié)44-46
• 第四章 主要結(jié)論與展望46-48
• 主要結(jié)論46-47
• 展望47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻49-55
• 附錄: 作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 徐曉恩;姜英華;施前;;腫瘤蛋白質(zhì)組學:過去、現(xiàn)在和將來[J];癌癥;2008年10期

2 丁明霞;李

本文編號：332102