本文關(guān)鍵詞：不同轉(zhuǎn)移潛能膀胱細(xì)胞株的定量蛋白質(zhì)組與N-糖組分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中較常見(jiàn)的惡性腫瘤的一種,通�？梢苑譃榉羌咏䴘�(rùn)性膀胱癌以及肌層浸潤(rùn)性膀胱癌這兩種。目前臨床使用的膀胱癌診斷標(biāo)志物為組織多肽抗原和癌胚抗原,這兩種腫瘤標(biāo)志物的特異性較差,在多種癌癥發(fā)生時(shí)都會(huì)升高。利用新技術(shù)和新方法開(kāi)展膀胱癌研究,尋找和發(fā)現(xiàn)新的膀胱癌腫瘤標(biāo)志物,對(duì)于膀胱腫瘤的早期診斷和分子靶向治療都具有非常重要的意義。本研究首先運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(SILAC)技術(shù)對(duì)3株不同轉(zhuǎn)移潛能膀胱癌細(xì)胞株HCV29,KK47和YTS1的蛋白質(zhì)組進(jìn)行相對(duì)定量分析。結(jié)果共發(fā)現(xiàn)了689種表達(dá)變化的蛋白,包括255種表達(dá)上調(diào)蛋白和434種表達(dá)下調(diào)蛋白。對(duì)這些表達(dá)變化的蛋白進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)屬于細(xì)胞結(jié)合和催化分類(lèi)的蛋白最多。據(jù)國(guó)內(nèi)外眾多的文獻(xiàn)報(bào)道,整合素是一類(lèi)重要的跨膜糖蛋白,它能夠與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合并參與許多生物過(guò)程,尤其是癌細(xì)胞的發(fā)展與轉(zhuǎn)移。利用SILAC蛋白質(zhì)定量技術(shù),發(fā)現(xiàn)整合素α6在3株細(xì)胞中的表達(dá)比例約為1:18:14。通過(guò)western blotting,q PCR,細(xì)胞免疫染色和流式細(xì)胞術(shù)多種技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)使用臨床組織基因芯片結(jié)果對(duì)比分析,結(jié)果表明,與正常膀胱表皮細(xì)胞HCV29相比,整合素α6在膀胱癌細(xì)胞中表達(dá)量均有明顯的上升,且在非侵染性膀胱癌KK47細(xì)胞中的表達(dá)量最高。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型EMT是指具有極性的上皮細(xì)胞在特定的生理和病理情況下轉(zhuǎn)化成為具有遷移能力的間質(zhì)細(xì)胞的過(guò)程,這一過(guò)程被認(rèn)為是癌癥發(fā)展和遷移的重要基本步驟。蛋白質(zhì)的糖基化修飾異常改變?cè)谠S多重大疾病中,特別是在膀胱癌等眾多腫瘤的發(fā)展以及轉(zhuǎn)移過(guò)程中都具有極其重要的意義。研究表明多種腫瘤形成的過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)的糖鏈發(fā)生了明顯的改變,同時(shí)發(fā)現(xiàn)發(fā)生糖基化修飾改變的分子與惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移時(shí)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)。在膀胱癌中,生物大分子的糖基化特別是蛋白質(zhì)糖基化修飾的異常改變影響著癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。本研究使用TGFβ處理膀胱正常上皮細(xì)胞HCV29建立EMT模型。經(jīng)過(guò)TGFβ處理后的HCV29細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的間質(zhì)細(xì)胞特征。通過(guò)凝集素芯片技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)5種凝集素(UEA-I,BS-I,MAL-II,RCA120和PWM)識(shí)別的糖鏈表達(dá)上調(diào),10種凝集素(PNA,GNA,SNA,NPA,PTL-II,DBA,PHA-E+L,DSA,PTL-I和GSL-I)識(shí)別的糖鏈結(jié)構(gòu)下調(diào)。對(duì)EMT模型細(xì)胞進(jìn)行MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜檢測(cè)N-聚糖表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)與正常細(xì)胞相比,處理后的細(xì)胞含有更多的高甘露糖型和雜合型N-聚糖,N-聚糖的巖藻糖化程度也更高。最后通過(guò)糖基因芯片技術(shù)分析發(fā)現(xiàn),在處理的細(xì)胞中,基因hexb,fuca1,man2a1等5個(gè)N-聚糖合成相關(guān)基因的表達(dá)均是下調(diào)的。在癌癥治療的策略中,及時(shí)發(fā)現(xiàn),及早治療有利于增加癌癥患者的存活率。目前的許多報(bào)道指出糖蛋白表達(dá)量及其糖基化修飾的改變常伴隨著癌癥的發(fā)展,因此從糖生物學(xué)角度研究膀胱癌具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 定量蛋白質(zhì)組 N-聚糖 SILAC 整合素α6
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 緒論7-16
• 1.1 膀胱癌現(xiàn)狀7
• 1.2 定量蛋白質(zhì)組學(xué)7-9
• 1.3 蛋白的糖基化修飾9-12
• 1.4 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）12
• 1.5 整合素蛋白12-14
• 1.6 腫瘤生物標(biāo)志物14
• 1.7 細(xì)胞模型14
• 1.8 立題依據(jù)與意義14-15
• 1.9 主要研究?jī)?nèi)容15-16
• 第二章 材料與方法16-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16
• 2.1.1 細(xì)胞株16
• 2.1.2 主要試劑16
• 2.1.3 主要儀器16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.2 同位素標(biāo)記細(xì)胞株17
• 2.2.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)17
• 2.2.4 蛋白提取17-18
• 2.2.5 蛋白免疫印跡18
• 2.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR18-19
• 2.2.7 細(xì)胞免疫熒光組化19
• 2.2.8 膠內(nèi)酶解19
• 2.2.9 溶液內(nèi)酶解19-20
• 2.2.10 MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜20
• 2.2.11 液質(zhì)數(shù)據(jù)處理20
• 2.2.12 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)處理20
• 2.2.13 流式細(xì)胞術(shù)20
• 2.2.14 蛋白功能分析和IPA分析20
• 2.2.15 凝集素芯片分析和數(shù)據(jù)分析20-21
• 2.2.16 細(xì)胞凝集素組化21
• 2.2.17 質(zhì)譜鑒定N-聚糖21
• 2.2.18 糖鏈質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理21
• 2.2.19 LTQ Orbitrap液相串聯(lián)質(zhì)譜分析21-23
• 第三章 結(jié)果與討論23-46
• 3.1 膀胱癌細(xì)胞系蛋白質(zhì)組分析23-35
• 3.1.1 3株細(xì)胞的形態(tài)差異和生存習(xí)性的異同23
• 3.1.2 細(xì)胞同位素?fù)饺肼史治?/span>23-24
• 3.1.3 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)24-29
• 3.1.4 定量數(shù)據(jù)分析29-30
• 3.1.5 蛋白功能分析30-31
• 3.1.6 蛋白功能網(wǎng)絡(luò)分析31-32
• 3.1.7 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)的驗(yàn)證32-33
• 3.1.8 細(xì)胞免疫染色33
• 3.1.9 小結(jié)33-35
• 3.2 整合素 α6 在膀胱癌細(xì)胞系中表達(dá)的差異35-37
• 3.2.1 定量蛋白質(zhì)組研究表明整合素 α6 在KK47細(xì)胞株的中表達(dá)量最高35
• 3.2.2 蛋白質(zhì)定量數(shù)據(jù)的驗(yàn)證35-36
• 3.2.3 細(xì)胞免疫組化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證整合素 α6 在活細(xì)胞中的表達(dá)情況36
• 3.2.4 小結(jié)36-37
• 3.3 膀胱上皮細(xì)胞HCV29發(fā)生EMT前后細(xì)胞N-聚糖的變化37-46
• 3.3.1 TGFβ 誘導(dǎo)的EMT細(xì)胞模型構(gòu)建37-39
• 3.3.2 凝集素芯片結(jié)果39-40
• 3.3.3 EMT過(guò)程N(yùn)-聚糖的改變40-44
• 3.3.4 糖基因芯片分析糖基因的表達(dá)44
• 3.3.5 小結(jié)44-46
• 第四章 主要結(jié)論與展望46-48
• 主要結(jié)論46-47
• 展望47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 附錄: 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 徐曉恩;姜英華;施前;;腫瘤蛋白質(zhì)組學(xué):過(guò)去、現(xiàn)在和將來(lái)[J];癌癥;2008年10期

2 丁明霞;李

本文編號(hào)：332102